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MANUAL DE LABORATORIO DEL MÓDULO BIOLOGÍA BUCAL Y BASES FARMACOLÓGICAS
Álvarez Sánchez María Fernanda 3153
Código Fecha de elaboración o revisión Versión Página SGC-FESZ-CD-ML08 22/Enero/2020 0 62/
PRÁCTICA 9
FORMACIÓN DE BIOPELÍCULA DENTAL “IN VITRO”
OBJETIVO
Conocer la capacidad de algunos microorganismos de cavidad oral, para adherirse a superficies duras en presencia y ausencia de carbohidratos.
CONCEPTOS PREVIOS
Definición de biopelícula dental
Microorganismos de importancia en la formación de biopelícula dental.
Microorganismos involucrados en la formación de biopelícula (supra y subgingival)
Enfermedad bucodental asociadas a la biopelícula.
FUNDAMENTO TEÓRICO
La caries dental y la enfermedad periodontal comparten un origen común conocido como biopelícula, por lo cual el conocimiento y la comprensión de los mecanismos involucrados en su formación son importantes para el cirujano dentista, ya que le permiten implementar medidas preventivas y de control.
La cavidad bucal proporciona diferentes sitios para la colocación y crecimiento microbiano entre los que se encuentran saliva, labios, mejillas, paladar, lengua, encía y dientes.
Las características anatómicas y la composición bioquímica de los dientes pueden favorecer la instalación y proliferación de microorganismos (principalmente bacterias) para dar origen la biopelícula.
La colonización microbiana específica comprende diferentes momentos que incluyen la adherencia, agregación, coagregación, crecimiento y reproducción de los microorganismos que se adhieren a la película adquirida.( Figura 8.1)
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Figura 8.1. Secuencia de desarrollo de placa microbiana. Tomado de Seneviratne et al., 2011
La biopelícula se inicia con la formación de película adquirida donde participan las glucoproteínas principalmente derivadas de la saliva y entre las que se encuentran la amilasa, histatinas, estaterinas, lisozima, anticuerpos (principalmente Ig A), entre otras, que se depositan sobre la superficie de los dientes a partir de las cargas eléctricas de ambas partes.
La película formada adquiere funciones protectoras al proporcionar lubricación a las superficies e impidiendo la pérdida de humedad del tejido.
Sobre la superficie del esmalte, comienza a depositarse una película delgada amorfa. Los mecanismos que intervienen en la formación de la película sobre el esmalte incluyen fuerzas electrostáticas, tipo Van der Walls e hidrófobas. Es por ello, que en la superficie de la hidroxiapatita que posee grupos fosfato con carga negativa, interactúa con proteínas y glucoproteínas salivales y del fluido crevicular con carga positiva. (Figura 8.2.A)
Una vez que se forma la película adquirida, es colonizada por microorganismos que residen en la cavidad bucal. Las bacterias se adhieren a las glucoproteínas de la película en forma casi inmediata. Algunos mecanismos por los cuales las bacterias se unen a las superficies dentales es mediante receptores específicos de la película mediante moléculas bacterianas específicas llamadas adhesinas lo que facilita su adherencia y proliferación.(Figura 8.2.B)
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A B C
Figura 8.2 Formación de la biopelícula : 1.A) Muestra la afinidad de las cargas de las glucoproteínas salivales y su afinidad por el esmalte dental. 1.B) Muestra las sustancias bacterianas y los receptores específicos para ellas. 1. C) Muestra la unión de las bacterias a la película adquirida mediante puentes de calcio. Tomado de:
MATERIAL
1 Tubo de ensaye 18x150mm con tapón de hule con 15 ml de medio base rojo de fenol más sacarosa al 5 %
1 Tubo de ensaye 18x150mm con tapón de hule con 15 ml de medio base rojo de fenol.
1 Tubo de ensaye18x150mm estéril
1 Paquete con 2 hisopos estériles.
Pipeta de 1 ml
Mechero
EQUIPO
Refrigerador
Incubadora.
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SERVICIOS
Electricidad
Agua corriente
Gas
PROCEDIMIENTO O TÉCNICA
Sembrado de biopelícula:
- Colectar en un tubo de ensaye 18x150mm estéril, 2 ml de saliva de un integrante del equipo que no se haya efectuado limpieza dental.
- Con un hisopo estéril, raspar la superficie de una de las arcadas dentarias con acumulación de biopelícula dental.
- Sembrar por agitación la muestra del hisopo en un tubo sin sacarosa.
- Adicionar 0.5 ml de saliva al tubo.
- Tapar el tubo con un tapón de hule.
- Incubar a 37° C durante 24 horas.
- Realizar el mismo procedimiento en el tubo con sacarosa a partir del paso 2
- Monitorear durante 7 días la formación de biopelícula dental de ambos tubos.
NOTA: Los tubos nunca deberán ser agitados, de lo contrario no se observará formación de biopelícula.
Este material será utilizado para la práctica siguiente de aislamiento de microorganismos de la biopelícula dental (practica 9).
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2. Mencione ¿a qué se debe el cambio de color del medio en los tubos sembrados y laproducción de burbujas? Esto se dio ya que en uno había sacarosa y en el otro no. Recordemos que al inicio ambos tubos eran de color rojo y después de realizar el procedimiento y colocar la saliva en ambos tubos, el tubo con sacarosa se tornó amarillo y el otro se quedó del mismo color, lo que quiere decir que esas bacterias del tubo que si tuvo un cambio de color utilizaron esa sacarosa y la comenzaron a procesar produciendo así ácidos ya que estas si tenían un sustrato, y también por eso se produjeron burbujas.
Sin en cambio en el otro no hubo un metabolismo por lo tanto no hubo cambio de coloración.
3. Explique ¿qué es y a que se debe la formación de una película blanca alrededor del alambre en su experimento? Si no se forma explique sus causas. Se da gracias a que las bacterias tienen metabolismo gracias al sustrato presente en el tubo con sacarosa, ya que gracias a ese se produjo la placa bacteriana en la pared del tubo. 4. ¿Qué es el cálculo dental?
Es la placa bacteriana que se ha endurecido o calcificado sobre los dientes debido al depósito de minerales sobre la placa bacteriana.
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BIBLIOGRAFÍA
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- Mouton Christian, Robert Jean-Claude, Bacteriología Bucodental. Barcelona. Editorial Masson S.A. P.p19-
- Negroni, M. Microbiología estomatológica. 3ª. Edición. Buenos Aires Ed. Médica Panamericana. 2018, 481-
- Seneviratne, C. J., Zhang, C. F., & Samaranayake, L. P. (2011). Dental plaque biofilm in oral health and disease. Chin J Dent Res, 14(2), 87-94.
