Problemas de Cinética.
1.- Para estudiar la velocidad de una reacción enzimática en función de la
concentración de sustrato, se prepararon series de incubaciones con diferentes
concentraciones de sustrato y una cantidad constante de enzima, habiéndose
determinado previamente las condiciones óptimas de la reacción.
Las velocidades iniciales obtenidas para cada concentración de sustrato se indican a
continuación: Concentración de sustrato
mM Velocidad inicial
moles producto formado/min
0.05 15.4
0.08 20.0
0.12 24.0
0.20 31.2
0.30 36.5
0.40 39.2
0.50 40.0
0.60 40.0
a. De la observación de los datos numéricos, dedúzcase la velocidad máxima de la
reacción y el valor de Km.
b. Si la concentración de enzima en cada mezcla de reacción se incrementa al doble
¿cómo variaran la Km y Vmax?
c. ¿Cuál será la concentración de enzima libre a una concentración de 0,7 mM de
sustrato?.
d. Calcúlese el valor de la velocidad inicial para concentraciones de sustrato 0,1 y
0,7 mM.
2.-Los estudios cinéticos encaminados a conocer las diferentes características del
enzima frente a los dos sustratos, se realizaron utilizando UDP-(14C)-glucosa con el
objeto de determinar la actividad del enzima midiendo la velocidad de la reacción por
la radiactividad presente en el disacárido de glucosa.
Los datos obtenidos son los siguientes:
Ensayo1: la mezcla de reacción contiene Tris-HCl 50 mM, pH 7,8, EDTA 5 mM,
NaSO4 2 mM, glucosa 1,2 M y la cantidad apropiada de glucógeno sintetasa, en un
volumen total de 0,3 ml a 30°C.
Velocidad inicial
cpm disacárido de glucosa Concentración de UDP-glucosa
mM
523 0.2
333 0.1
212 0.05
117 0.025
Ensayo 2: La misma mezcla de reacción que en el caso anterior, excepto que se
utiliza UDP-glucosa 100 mM y glucosa como sustrato variable.
Velocidad inicial
cpm disacárido de glucosa Concentración de glucosa
mM
433 2
