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Práctica 3.
3. Determinación del espectro de
absroción y coeficiente de extinción
molar para el p-nitrofenol.
Introducción.
Muchas sustancias disueltas presentan determinados colores que absorben luz a determinadas longitudes de onda comprendidas entre 400 y 700 nm y la dejan pasar a las demás longitudes.
Sin embargo, otras sutancas incoloras, a simple vista, son capaces de absorber la luz ultravioleta, con longitudes de onda inferior a 400nm, o la luz infrarroja con longitudes de onda superiores a 700nm.
La capacidad de absorción de la luz es característica de cada sustancia así como los puntos de fusión y ebullición.
Cuand o se hace pasar un rayo de luz monocromada de una determinada longitud de onda de intensidad I0 a través de una disolución de una sustancia colocada en un recipiente transparente, parte de luz es absorbida de manera que la intensidad de luz transmitida (I) es menor que I0.
El grado de absorción de la luz depende de la longitud de onda y de la concentración de soluto en la disolución, siguiendo la Ley de Lamber-Beer.
A=log (I0/I) = 3 cl
IO= intensidad de luz incidente I=paso de luz
I=intensidad de luz transmitida c=concentración de soluto (M)
3 = coeficiente de extinción molar A= Absorbancia
Objetivo.
El objetivo de esta práctica es la determinación del espectro de absroción del p-nitrofenol, que realizaremos leyendo las absorbancias de una disolución de p-nitrofenol correspondiente a las longitudes de onda 360, 380, 390, 400, 410,
420, 440, 460,480 y 500nm, ajustando previamente con tampón Tris Hcl (blanco) cero de absorbancia a cada longitud de onda.
Materiales que vamos a emplear.
- p-Nitrofenol 1 mM (preparado en Tris-Hcl 0,2M, ph=9)
-Tampón Tris-HCl 0,2M, ph=
-Agua para uno de los tubos que preparamos al principio
-Pipetas de dieferentes volúmenes
-Tubos de ensayo para preparar las disoluciones
-Vaso de precipitado
-Agitador
Método experimental.
1)Preparamos dos tubos, en uno de ellos ponemos 6ml de tampón Tris/HCl 0,2M, ph=9 y añadimos 0,1ml de p-nitrofenol de concentración 1mM.
Preparamos otro rubo con 6ml de agua.
Leemos las absorbancias (tras haberlos mezclado por agitación) de la disolución de p-nitrofenol (habiendo ajustado el blanco con el tubo de agua) a distintas longitudes de onda para reconocer el espectro de absorcion del p- nitrofenol.
Los resultados en cuanto a la absorbancia fueron:
Longitud de onda 360 380 390 400 410 420 440 460 480 500 ABSORBANCIA 0,474 0,387 0,366 0,352 0,341 0,319 0,241 0,195 0,131 0,
Una vez leídas, escogemos la longitud cuya absorbancia haya resultado mayor (360nm con una absorbancia de 0.474)
Para finalizar la práctica hemos de calcular el coeficiente de extinción molar 3 del p-nitrofenol, usando las concentraciones de p-nitrofenol final de las absorbancias de la longitud.
La fórmula que usaremos sera
A= 3 c l
El significado de cada término de la fórmula está explicado al principio de la práctica.
tubo nº Absorbancia Concentración (mM) Longitud (cm) 1 14.81 0.032 1 2 13 0.029 1 3 14.6 0.025 1 4 16 0.022 1 5 17.94 0.019 1 6 19.93 0.016 1
Para calcular el coeficiente de extinción molar para el p-nitrofenol en 1/Mcm, es a partir de la pendiente (m=3) de la representación de absorción frente a la concentración de p- nitrofenol en mM.
3 = 18.817 mM-1 cm-1 = 18817 M-1 cm-
