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Asignatura: bioquimica, Profesor: Alicia Alicia, Carrera: Medicina, Universidad: UEM
Tipo: Apuntes
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Tema 10: Catálisis enzimática Las enzimas están en el centro de todos los procesos bioquímicos. Catalizan cientos de reacciones consecutivas en las que degradan nutrientes, se conserva y transforma la energía química y se fabrican las macromoléculas biológicas a partir de precursores sencillos. Con la excepción de un pequeño grupo de moléculas de arn catalítico todas las enzimas son proteínas .Su actividad catalítica depende de la integridad de su conformación proteica nativa .Si una enzima se desnaturaliza o se disocia en subunidades la actividad catalítica suele desaparecer. Si una enzima se descompone en sus aminoácidos constituyentes la actividad catalítica se destruye. Algunas enzimas no requieren para su actividad más grupos químicos que sus residuos aminoácidos .Otros requieren un componente químico adicional llamado cofactor. El cofactor puede ser uno o varios iones inorgánicos tales como Mg, Fe, Mn o Zn o una molécula inorgánica compleja denominada coenzima. Las coenzimas actúan como transportadores transitorios de grupos funcionales específicos. La mayoría de ellos son derivados de vitaminas, nutrientes orgánicos que son necesarios en pequeñas cantidades en la dieta. Los más importantes son el NAD y FAD Algunas enzimas necesitan tanto de una coenzima como uno de un cofactor para su actividad. Un grupo prostético es una coenzima o ion metálico unido covalentemente o de manera muy fuerte a la proteína. Una enzima activa junto con su coenzima o cofactor se denomina holoenzima La parte proteica de la enzima se denomina apoenzima. Está inactivo porque no tiene unido un cofactor. La mayoría de moléculas biológicas son estables a las condiciones de ph neutro, temperatura suave y ambiente acuoso en el interior de la célula. Una reacción catalizada tiene lugar en una bolsa enzimática denominada sitio activo. La molécula fijada en el sitio activo y sobre el que actúa la enzima se denomina sustrato. La superficie del sitio activo de la enzima está revestido de con residuos de aminoaciodos con grupos sustituyentes que se unen al sustrato y catalizan sus transformación química. La función de un catalizador es aumentar la velocidad de una reacción .Los catalizadores no modifican los equilibrios de una reacción. El punto de partida de la reacción se denomina estado basal que es la contribución a la energía libre del sistema de una molécula promedio bajo un conjunto de condiciones dadas. El equilibrio entre P y S refleja la diferencia en energía libre de sus estados basales. El estado de transición es un momento molecular en el que acontecimientos como rotura de enlaces, formación de enlaces y desarrollo de cargas han llegado al instante preciso en el que el colapso hacia sustrato o hacia producto es igualmente probable. La diferencia entre los niveles de energía del estado basal y de transición se denomina energía de activación. Una energía de activación más elevada corresponde a una reacción más lenta. Las velocidades de reacción pueden aumentarse incrementando la temperatura o la presión. De modo alternativo es posible disminuir la energía de activación añadiendo un catalizador.
No se gasta enzima en el proceso. Cualquier reacción puede consistir en varias etapas que suponen la formación y desintegración de especies químicas transitorias denominadas intermedios de reacción. Un intermedio de reacción es cualquier especie producida en el trascurso de la reacción que tenga un tiempo de vida químico infinito. Los complejos ES y EP son intermediarios de reacción. Cuando en una reacción existen varios pasos, la velocidad global viene determinada por el paso cuya energía es más elevada: paso limitante de velocidad. Entre sustratos y grupos funcionales de las enzimas se pueden formar enlaces covalentes transitorios con un sustrato, activándolo para la reacción. Las interacciones covalentes hacen disminuir la energía de activación. Por otro lado también puede haber interacciones no covalentes entre enzima y sustrato. El establecimiento de esas interacciones liberan pequeñas cantidades de E libre: da estabilidad al complejo ES. Energía de fijación. La energía de fijación hace que la enzima sea específica. La especificidad se refiere a la capacidad de una enzima de discriminar entre sustrato y molécula competitiva. La especificidad proviene de la formación de múltiples interacciones débiles entre la enzima y el sustrato específico. EL centro activo son aminoácidos con cadenas laterales que favorecerán tanto la unión del sustrato como su catálisis. La complementariedad geométrica y electrónica entre enzima y sustrato depende de fuerzas no covalentes. La especificidad pude ser :
Modelo de Koshland (1958): las enzimas son flexibles y sus sitios activos pueden cambiar (expandirse) para acomodarse a su sustrato. Una vez formado el complejo ES, grupos funcionales catalíticos situados adecuadamente colaboran en la catálisis. Responsables de enlaces covalentes: a. Catálisis ácido base general En muchas reacciones se generan intermediaros inestables cargados: se estabilizan al donar o aceptar H+ y se transforman en producto más fácilmente que en reactivos. Grupos R de aas del centro activo actúan como dadores o aceptores de protones
En muchas reacciones enzimáticas se fijan al E dos o más moléculas de S diferentes Suelen transferir grupos funcionales de un sustrato a otro Siguen el método de Michaelis-Mente Reacción enzimática con formación de un complejo ternario Unión estadística o al azar Unión ordenada Reacción enzimática en la que no se forma un complejo ternario → mecanismo ping-pong o de doble desplazamiento pH Las enzimas actúan dentro de límites estrechos de pH Existen un pH óptimo – Actividad máxima – Reflejo del ambiente celular en el que normalmente se encuentra F 0 D 8Cambios en el pH afectan a la estructura terciaria – Distribución de cargas – Unión E– S TEMPERATURA temp → V reacción Velocidad de la reacción se duplica cada 10ºC Tª óptima – Velocidad máxima Si aumenta mucho la temperatura: desnaturalización, se pierde la estructura terciaria, el centro activo pierde su estructura
Inhibición Los inhibidores enzimáticos son moléculas que interfieren en la catálisis, enlenteciéndola o deteniendo la reacción enzimática. La presencia de un inhibidor altera la actividad de la E, observándose una modificación en los valores de Vmax y Km. Vmax y Vmax aparente Vmax → en ausencia de Inhibidor Vmax aparente → valor de v máxima observada en presencia de un Inhibidor Km y Km aparente Km→ en ausencia de Inhibidor Km aparente → valor de Km ( [S] al que se alcanza ½ de la Vmax) observada en presencia de un Inhibidor. Inhibición reversible a. Inhibición competitiva El inhibidor competitivo compite con el sustrato por el sitio activo de la enzima. Mientras el inhibidor ocupa el sitio activo impide la fijación del sustrato al enzima.
Muchos inhibidores competitivos son estructuralmente similares al sustrato combinándose con la enzima y formando un complejo EI. La inhibición competitiva se pude analizar cuantitativamente mediante cinética del estado estacionario. En presencia de un inhibidor competitivo la ecuación de michaelis –Menten es :