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ligandos que son factores de crecimiento se unen a los factores de crecimiento , se unen a unos traductores, cascada de proteín quinasas: llegan al núcleo celular donde regularán el ciclo.
Control bioquímico del ciclo: motor: consiste en dos proteínas , proteína quinasa dependiente de ciclina CDK, y una sub reguladora llamada cíclica.
Proceso regulador de una pK, tenemos una proteína que regula la actividad de la K: ciclina. Se sintetizan y se degradan, es uan proteían cíclica porque se sintetiza y se degrada.
Desde el punto de vista experimental, ha habido en la historia reciente 80’s- hasta ahora. Se ha abordado :
Bq quimica de los procesos., reacciones q ocurren durante el cc. Estudio de sustratos y productos. Cinética, etc… caracterizar moléculas extractos y purificar componentes q.
Genético
Xenopus laevis, proceso de desarrollo caracterizado. Se eligió porque los ovocitos son grandes. Como cualquier oocito tiene dos características fundamentales: zona blanquecina polo vegetal, vitelo. Polo animal con el resto de los componentes vesícula germinal: el núcleo da una impronta blanca sobre la superficie teñida pro cromóforos. Ese huevo se ha centrifugado el núcleo que está en el interior flota hacia arriba y colapsa los cromóforos de la superficie se puede hasta microinyector tiene un contenido de NDA normal, su contenido en RNA, ribosomas… es equ a 100.000 cel somáticas: maquinaria celular de síntesis proteica
Factor promovedor de la maduraicón
Ovocitos están parados en la G2, lispos para entrar en DIVISIÓN: progesterona induce la división: segmentación. Si de aquí en mitosis sacamos un extracto citoplasmático. centrifugación alta: altamente concentrado.
Cuando se lo añadimos a un ovocito de la fase G2 se activa este ovocito: factor soluble MPF.
El abordaje bq: pasarlo por columnas HLP, e ir obteniendo para poder caracterizar las proteínas.
En los estudios iniciales: cuando hacemos ese ensayo y veía que cuando añadimos progesterona: onda de algo que transferido a G lo activaba y caía con e tiempo. Cuando estaba en la metafase II de la meiosis los niveles estaban otra vez altos y se mantenían durante bastante tiempo, hasta que si se producía la fertilización caían, a partir de entonces había picos de actividad MPF que coincidían con la div celular.
Ese extracto citoplasmático concentrado. Si ese extracto le añadimos DNA exógeno, del esperma de Xenopus o de una bacteria da igual. Es capaz de organizar ese DNA y forma una membrana nuclear alrededor, lo empaqueta y lo rodea de la mb nuclear. Y es capaz de ciclarlo en el tiempo rompiéndola y organizándola.
La actividad de maduración en estos oocitos, siguiendo esto se veía que la actividad subía y bajaba: activación arriba y abajo. Cortantemente a esta bajada y subida: aumento y subida de fosforilación a una proteína: H1. Es una histona en el linker del nucleosoma, se desorganiza a la mina: se relaciono con una capacidad fosforilable de la histona con la desorganización del pseudonucleo.
Si tratamos con ese extracto capaz de formar núcleos: tratamos con RNAasas: no se produce la ciclación.
Si añadimos a este extracto de Nasas, le añadimos el mensajero para la ciclina B y las inhibimos las RNasas: se recupera la capacidad oscilante.
Coincide con que esa ciclina se sintetiza, se degrada y se vuelve a sintetizar, coincide la ruptura de la mb con la degradación de la ciclina.
Timecorse, con radiactividad: aa de cadena ramificada, metionina y cys: radiactivamente pro la sensibilidad.
La proteína se sintetiza se degrada y luego hay una señal que la vuelve a poner en marcha.
Mutante del ciclo celular: célula que no se divida.( CELL CICLYE DIVITION MUTATS CCDM
Dos cepas de levadura:
Fision yeast S. pombe, pudding yeas: S.cerevisiae
No se rompe la membrana nuclear. No implica que se rompa la mb nuclear.
Pombe: G1 más corta. Crece en G2, sin embrargo en cerviciae la gema es comitente con la replicación hasta que la yema no sea grande no se produce la mitosis. En pombe, para entrar en M debe de tener el doble que del G1.
Septo en las células en pombe y en la cerevisae: se estrangula
Mutantes mutagenizar al azar y ver lo que sale:
Start point: dependiendo de los nutrientes en la progresión del ciclo, en 2h se divide.
Ponerles en crecer en condiciones de temperatura sensible:
Mutantes de crecer en una temperatura y no a otra, temperatura sensible.
Alta o baja, normalmente son los que no crecen a alta temperatura.: no crece: restrictiva, restringe el crecimiento.
Sembrar esos mutantes y ver cuáles de esos mutantes, que mutantes son mutantes de del ciclo celular.
Gemmas con diferrente tamaño: levaduras con todas las fases del ciclo posible. Se sabe el avance por el tamaño de la yema en relación a la madre.
El de abajo están todas en la misma fase. Sin gemación. Uniformidad en la morfología.
Ts: cambio de secuencia de aa que conduce a una proteína que puede dejar de funcionar por cambio de estructura. Mutantes genéticos pero la mutación no se manifiesta por el procesamiento, sino en la secuencia de la proteína la proteína a la temperatura restrictiva pierda su función, inestable etc.
Estos mutantes nos permiten del procesos de rescate genético. Levaduras, y transformarlos con genotecas de DNA, ver cual es el fenotipo que se generan en la colonias transformantes a pasar por la temperatura restrictiva.
Se hace la transformación con cDNA: si se puede dividir es porque se han rescatadi: aislamos ese cDNA: analizarlo.
CDC28: CDK que tiene sacaromices cervisiae.cell divition cycle.
Se llaman diferente en pombe. Cuando en pombe es cdc2.
Un mutante en el ciclo celular de cerviciae, el mutante cdc28 cdk, se podría complementar con la cdk procedente de humanos. El mismo gen peor procedente de humanos, el controlador es universal, además funcionalmente equivalentes además de homólogos.
Cdk1 humana
Alternancia de fases, 20-4-09 1 día.
LAS PROTEÍNAS, QUE SON NECESARIAS PARA LA PUESTA EN MARCHA EN EL ORIGEN DE REPLICACIÓN SON SINTETIZADOS DURANTE LA g1 DEL CICLCO celular, esa síntesis está reprimida por la MCDK, como consecuencia de dos mecanismos, desde el punto de visto de expresión, no se puede expresar o es rápidamente fosforilado por la CDK y mandado a degradación. Al complejo CDK1, esté activo, no niceles suficientes de CDC6 ni CDT1.
La fase G1 y la fase M y G2: no pueden haber disparo de los orígenes de replicación, una vez pasado la fase S, como se llega al máximo de actividad, ninguna proteína implicada en el ensamblaje de los orígenes de replicación tendrá lugar.
De la fase M tendrá que pasar por S, no podemos pasar a M durante mitosis, ni G1 ni G1.
No queda explicado por el controlador bq: mecanismo adicional porque no podemos pasar por mitosis sino pasamos por S.
Formarse los precomplejos: dispara la fase S. El controlador de actividad normal, tiene máxima actividad? No sino que ocurre en M, durante la fase S: activación de cierta parte de CDK cilcina y no llega al máximo: el nivel del estado de activ de cdk/Cl marca el estado de la célula en que fase esté. Cuando definimos la fase S, podríamos definir cual es el grado de actividad respecto al total, que tiene el CDK/C durante la S. Exp no es fácil. Es gradual.
Puede haber algo en G1-G2 O S.
Entre s-g-g2 hay algo que bloquee la mitosis M, se produce en cualquier fase del ciclo celular excepto la M, algo que bloquee la mitosis. Evidencias directa no la tenemos peor sí indirecta: chequeo durante la replicación, bloquea la mitosis. Mecanismo que garantice la alternancia de las fases. G1-G2 se genere moléculas que estén bloqueando que se entre en mitosis. Factor CDKciclina.
Degradación protéica: ubiquitinación y degradación pro el proteasoma. Proteínas que serán degradadas: marcada con ubiquitina, pequeña prot de 76 aa, se necesita activarla por un sistema multienzimático.
Activación: E1, ubiquitin activ proteins: + atp: FORMACIÓN de E1-AMP a Sh(ub)-AMP libera ppi y se queda unido la ubq por la Gy terminal. Las aminoacilTRNA sintetasas poseen un mecanismo similar.
Conjugaciónn: U2: ubq conjugation enzimes.
Transferencia E2-SH recibe a la AMPC-UBQ: se recupera la E1. No se convierte en nada.
E3: reconoce a la E2 y proteína sustrato, recive en un enlace conavelte la ubq a2. A TRAVÉS DE UN EPSILON AMINICO: ISOPEPTIDICO EN EL CT de la ubq( gly).
Vaciras moléculas de ubq: ubiquitinación conjugadas entre ellas.
Ubiquitylation. Ubicuitilación. Y no qui. Lacion y no nacion.lacion: activarlo por un gasto de atp, no es una reacción simple sino que requiere activación, presencia de atp para que se produzca la reacción, la ubicuitilación: requiere gasto energético.
Si se utiliza la lisina de la Ubq par aunirse a la siguiente la K48, esas uniones: señal de degradación, igual que la K29.
Cuando ocurre en la K63: no es señal de degradación, otras dunciones, reparación de DNA, reparación del DNA ubq en la lys63. Endocitosis receptores , internalizados requiere ubq y no degradación, selección de proteínas para destino celular dif.
Eso idica la degradación. Para que ocurra la degradación, el mínimo de mol que tiene que tener una proteína, son 4. Tetraubiquitina, menos de 4 no es una señal suficiente.
Además de eso, se recupera la ubq, enzimas: ubiquitina C proteasas, recuperamos la UBQ, es un cofactor que va y vuelve. Se reusa
Degradaciónn llevada a cabo por el proteasoma
G1/S= complejo SCF, Skp, Cullir F: Fbox
Los nutrientes condicionarán el ciclo celular, la inducción de la expresión del controlador del ciclo, de CDK/CDC g1: cln3/cdc28: poner en macha la maq transcripcional para preparar la célula par ala entrada de ciclo.
Los genes que son controlados este complejo, G1 temprana son inactivos, los más importantes SBF, whi5: no hay transcripción, bloqueada. El avanza bloqueada.
Si wh15 se fosforila por el complejo cl3cdk28 como es un represor, se desbloquea, esa fosforilación conlleva la salida del núcleo del represor llamarán a los coactivadores y se activa la trascripción. Como consecuencia del represor en un mecanismo universal tb funciona en mamiferos aunque son más prots.
El paso de G1/S check point de start, eliminemos una proteína que se va a sintetizar en respuesta al inhibidor cdkcly: sic 1.
Los complejos cdkcly: esos como consecuencia de la autofosforilación, se inactivan por degradación de la ciclina. Tras la P, la degradación precede previa a la fosforilación se ubiquitina y se degrada por proteasoma, lo lleva a cabo scf, con cdc34.
Skp1 ayuda para enlacazar la proteína F, el procesos de activación de la K de G1, ES AUTOLIMITANTE EN EL TIEMPO. DE FORMA QUE SU PROPIA activación conlleva a su propia inactivación.
Cilclina S: clip, estará inhibido por el inhibidor sic, y por tanto aunque tengamos algo de ciclina: no funciona la cdk, /Cly: la propia G1 cdk CLEANCKD produce la fosforilación de sic1: se hiperfosforila por CDK/CLY, hasta 7 P, con ese estado de hiperP, lo que ocurre es que soc1 se señaliza a degradación por ubq: SCF y además FBOX es cdc4. Conlleva a la activación del complejo CDKcly de fase S, y a partir de aquí la fase de R del DNA: pasamos start.
Se supone que hemos quitado una barrera de actividad: inhibidor de los complejos CDK/Cli.
En el punto de transición pasado el star, se produce una rápida desaparición de sic1, esa rápida desaparición por previa hiperF, hace que alcance su máxima actividad el complejo CDK clyS y CDK28, comitante con esto se produce la brusca inactivación de las ciclinas G1: no actividad CDK/CLY. Todo o nada casi. o todo el SIC1 se P o se degrada o no pasamos a S.
Es el punto de decisión. La célula no tiene más remedio que prograsar hacia fase S: mecanismo fino pero que responde como un interruptor molecular hasta que no se alcanza el estado de p, 7-8P en SIC 1 la actividad del complejo SCDK que pasa a la fase S es nula.
Se asegura que las células se asegura que se alcance un nivel suf de SCDK par ala progresión:
Sensor: grado de P que le imprime un complejo CDK de la fase anterior: por lo que sino debemos de esperar porque no se ha alcanzado suf actividad.
Transición g1/S y s/m
Nutrientes:A ctivan a la cln3/Cdk28 y estos pone en lmarcha la respuesta transcripcional: sic1(inhibidor de fase S), cdc precomplejos de replicación , clb5,6 cln1,2.
Promotores: reprimidos de HUL5? (PONER BIEN)
Scf ES EL master regulacod
ClIn3 se fosforila por una CDC28 por la porpia. De vez en cuando le mete un fosfato Y SE UBIQUITINA POR UNA fbox QUE NO SE SABE NADA.
Clin 3 se cambia por 1 y 2 que han sido inducidas su síntesis.
Fosforila el complejo CDKcln1,2 fosforila a cdc6, a sic 1 y swi5. Sic 1 está controlando negativamente al complejo fase S: club5, y cdc28: no se puede avanzar de G1 a S.
Cuando esa fosforilación es suficientemente alta: clin1 se fosforila por CDC28 esa fosforilacion señala a ubq u a dehradaciçon FBOX ES GRR1 y la ubq lo hace SCF.
CDC6 una vez P pro las CDCK se manda a degradación. Y a sic =. Lo jace la Fbox CDC4 comitante con el proceso. En una lavadura de gemación: una zona de crecimento de la yema, hay una proteina llamada JSL1 y 7 fosforila a wee1, (Swee1 EN CEREVISAE wee en pombe) limita la act cdk, porque P la Y del sitio activo de la cdk, el ciclo procede a inactivar a wee1, se inativa pro una señal procedente de la zona del crecimientod e la yema, que fosforila a swee1, controla negativamente la fase G2 M, puesto que fosforila el sitio de Y del centor activo, va a ser ubiquitilada y mandada a degradación, una vez más a través de SCF y utilizando una Fbox llamada Met30.
Otro contorlador de G1: cln1,2 y CDC28: reprime la transición G1/s, REPRESORA: A LA S ROTEINAS NECESARIAS PARA EL ORIGEN DE REPLCIAICON LAS MANDA A DEGRADACIÓN pero a su vez es capaz de P al otro freno de G1: el inhibididor del CDK de la sig fase, finalmente conduce a la fase S, la progresión conlleva una inactivación de la protein K , que fosforila e inactiva a CDC28 en la Y.
G1 aparece un complejo E3: responsable de la transición de mitosis, peor aparece en G1, el mec de represión que ejerce CCDK, sobre la represión de G1: es por la APC (Anafase).
En pombe es lo mismo.
Cicli citoplasmico de S.cerevisiae.
El progeso del ciclo: cambios morfogenéticas de la levadura, dirigidos por el complejo CDKc correspondiente, el tamaño de la yema: índice de que fase está el ciclo celular.
Disposiciónn de la actina, en el ciclo el la lev.
Iicial: la actina están desorientadas, en forma de G actina la forma globular solubre.
La peusta en marcha del ciclo es comitante con la polimerización de la actina, la direccionalidad: hacia el punto del crecimiento e la yema siguen o direccionan el crecimento de la yema
Durante el ciclo celular, de la yema, se produce a la vez que progresa el ciclo: aumento del tamaño de la célula, de masa, crecer.
Inicialmente el crecimiento de la levadura es totalmente al azar: en todas las direcciones. Cuando comienza a posicionarse la actina , se produce en un crecimiento en todas direcciones a un crecimiento donde protruye la yema y finalmente la yema crecerá en todas las direcciones.
Como se decide el punto de crecimiento de la yema. Tenemos una esfera que es la célula madre: decir donde se va a producir el crecimiento de la yema. Curiosamente la levadura tiene memoria “molecular” de donde se ha producido el crecimeintod e la yema anterior. Va a posicionar el crecimiento. Cerca de donde tubo lugar el anterior crecimiento de yema. Se posicioan siempre cerca donde tuvo lugar la anterior gemación.
Las proteínas que dirigen el psociionamiento BuB POSICIONAN al punto concreto los filamentos de actina y septinas que serán responsables de formar el anillo de estrangulamiento. El cierre del anillo lo hará la contracción de los filamentos de actina.
Ciclo nuclear: la levadura a diferencia de mamiferos y demás especies la mb nuclear nos e rompe durante el ciclo celular y la mit sino que permanece intacto.
Problema: los mts tienen que atravesar la mb nuclear sin romperla. El núclea cambia su posición dirigido los MTS ala región dond crece la yema. Entonces, se produce la migración de los mts en el posición contraria, se produce ela separación de los dos núcleos en realidad cada uno con su material genético completo.
El centrosoma colocado próximo a la mb nuclear. Es importante en el puntod e vist ad ela funcionalidad de la cervisiae.
Mitosis:
Durante la fase S se sintetiza el DNA, las dos cromátidas hijas se quedan unidas entre sí por el efecto de unas pts llamadas cohesinas. Una señal procedente del cinetocoro, por las proteínas llamadas MAD “ locas” se produce la liberación de CDC20.
Unidad que da especificidad a APC, como consecuencia de la act de APC por rescatar ese CDC20 anclado se producirá la transición de metafase a anafase por la cual se degradan las cohesinas que mantenían unidas a las cromátidas. Iniciamos la transición met anafase.
Las cohesinas, bloquean la transición metafase-anafase: degradarlas
Los cinetocoros alineadas en la anafase tenemos secuestrada a CDC20. CDC20 forma aprte del complejo APC, E3 g2/m
APC –CDC20 es una forma activa de APC, cuando a la vez de añadirse a CDC20 cdkc de la fase G2/M fosforila algunas sub de APC, requiere la P pro los complejos CDKc, y por otro lado, la quinasa llamada CDC5 en cerevisiae, o genérico polokinasas debe de fosforilar a APC para que sea activo, la E3 misma es fosforilada por los cdk de la fase correspondiente para que sea activa.
La degradación de las cohesinas es llevado a cabo por las proteínas llamadas separasas, en s.ce es esp1 regulado neg formado un complejo e inhib por unas proteínas cuyo prototipo es PDS1. Bloqueando su actividad.
La función de APC será ubq a PDS1 que es el ibn de las separasas, y como consecuencia de ello se activa esp 1 y produce la degr de las cohesinas, tenemos la transición de metafase a anafase puesta en marcha, es uno de los mecs.
M: peust aen marcha la trasicion metaf-anafasE: inactivación total de CDKc fosforilacion de clib y P por ubq APC y degradación por proteasoma.
Siguiente paso: salida de mitosis, se lleva a cabo por una red proteica que denominados MEN “mitoitc exit network” se produce por un mec similar al crecimiento de la yema, la sep física de los cromosomas por la migración de lso cromo en los polos del huso mitótico: interruptor molecular TEMp
Inactiva : TEMP1 gdp y activ con GTP es una small GTP.
Normalmente unido a GDP inactivo.
El paso a activa, produce la activación de una cascada de activación, que son PK muchas de ellas, que producirá que una proteína fosfatasa llamada CDC14 (Aprendersela) secuestrada e inactiva en el nucleolo celular tras este proceso de fosforilación saldrá del nucleolo y sale este CDC14 en su forma activa, y producirá el mecanismo de salida. El mec de salida consiste en :
La otra sub de de APC, está secuestrada CDh1 por los complejos Cdckc CDC14 lo desforforila: y activa a la apc. Swi5 fosforilada y degradada: se defosforila por al fosfatasa, wi5 factor de transcripción que regula a sec 1: inh de los complejos cdkc de fase S. La célula está preparándose de entrar en G
Además sic1 es defosforilada por cdk14 la sintetizada(bajos niveles)
Clib2,3/cdc28 de fase M, inhibe el paso de anafase a salida: inactivarlo para que podramos salir la mitosis ademas inhibe la union de apc con cdh1.
Cuando se pasa a degradación todos los complejso CDKc hemos salido de mitosis: importante como el propio proceos de la anafase: si la célula no desencadena este proceso no saldrá del todo de l amitosis porque el final de la mitosis. Citocinesis es el final.
La cd14 revierte la acción de cdkc:
Prototípico de la UV. Pone en marcha un sistema de reparación NER pero cuando es de las dos cadenas: ionizantes: dependiente de recombinación que activa a otro complejo KU. Esas dos vías con sensores distintos: activación de mEC1.
Cómo actúa ese mEc 1 dep de la fase.
En S: intrínseco: se para pro el mism mecanismo en fase S. Sin embargo mec1 activa a chk1 que a su vez fosforila y estabiliza a PDS1 el inhibidor de las separasas: inhibida y no podemos progresar la M no se degradan las COhesinas.
RAD53 a través de CDC5: inhibición de CDC28 progreisón del ciclo.
Parada en G1: regulación de un factor de trascrpción que es SW6 que forma parte del complejo Swee DE FASE G1. Se necesita para que los genes que se trascriben en G1 se trascriban, se inhibe la progresión de la fase G1.
Chequeo de mitosis en todos los ciclos celulares, no solo por daño: correcta segregación de los cromosomas, de forma que tenga una copia completa del genoma.
Cromátidas unidas al MTS pro el cinetocorose pone en marcha.
Este punto de chekeo: funcionado durante todo el tiempo hasta que los cromosomas son alineados en la placa ecuatorial o la yema pasa un trozo del núcleo. Este punto de chequeo está permanentemente funcionando hata que se produce el alineamiento de los cromosomas y unidos al cada correspondiente lado en el huso acromático.
Sensor: lo desconocemos, peor procede de los cinetocoros, sensor de la progresión cromosómicas.
Traductores, son unas proteínas, PK, de la famila BUB que fosforilan a las MAD se encuentra asociado nuestra unidad CDC asociado al cinetocoro a través de ellas.
CDC20 no está activo no se libera y ap-cdc20 es´t ainactivo. No podemos degradar a las PDS1 para que las separasas estén activadas. Bloqueamos la degradación de cohesinas: transciión metafase-anafase, hasta que los cromosomas estén alineados en el plano ecuatorial: la unión a los polos celulares.
Chequeo 2 en M: mitoitc exit netword: la puesta en marcha d ela anafase: comienza la regración cromosómica, debe de hacerla bien. Citoquinesis, de nuevo cualquier alteración será sensada por proteínas que tenemos ahí: sensar el traductor, si bloqueamos el mecanismo de salida: cdc14 no sale del nucleolo , no defosforila y no bloquea la M, pasada la Anafase. Un punto de chequeo,
profase y metafase
cuando la profase esta bien echa, ponemos en marcha la anafase, cuando comienza la célula queque a que los cromosomas hay una div ½ a cada lado. MEN
en realidad esta red MEN se combina con otra red: FEAR. Que forma CDC14 fourteen ……
es igualmente de importante a la MEN que para antes de citoquinesis.
Señalización Celular a la proliferación celular en Mamíferos : Mecanismos que emplean los mitógenos.
Organismo eucarionte superior: las necesidades de comunicación entre células es compleja, más que un unicelular, más variedad de respuestas posibles. Sobrevivir, diferenciarse, dividirse o morirse.
A veces la ausencia de señales: muerte o señales de muerte, o un balance de supervivencia-muerte
Integran todas estas señales: respuesta consecuente.
La mayoría de los factores que inducen proliferación las mitogénicas: proteínas solubres unidas a receptores de la mp. La señal está fuera y debe de entrar la señal a la célula. Cambios en el medio intracelular: he recibido la señal externa. El cambio de una señal ext a la interna, transducción de señales para distinguirla de traducción.
Receptor en la S2: la señal emitida o bien es una proteína anclada a la mb de la célula o secretada al espacio extracelular hidrofílica y es soluble, se une al receptor de la mp.
Paracrino, sináptica, endocrino, contacto dependiente o yuxtacrina.
Axonal: largo
Paracrina: cercano, autocrina: Emisora y Recep es la misma.
Estas moléculas de señalización extracelular:
Proteínas de gran tamaño, péptidos, aa, núcleotidos , retinoides esteroides, gases, derivados de los ácidos grasos.
Algunos no necesitan que el receptor esté en la S2 de la mp. Porque los gases pueden difundir dentro. los de naturaleza antipática: mal no entrarían sólo por endocitosis o receptor. Los apolares pueden difundir a través de la bicapa lipídica, estos receptores son nucleares/citoplasmáticos. Muchas hormonas liberados a la sangre, viajan normalmente transportados por una proteína transportadora como es la albúmina.
Alcance en el núcleo que es normalmente donde están los receptores de las hormonas de carácter apolar.
Tipos de receptores extracelulares: mp , parte o no anclados en la mb plasmática, en general serán agente solubles en la bicapa: proteínas integrales de mp como Nocth.
Receptores de hormonas polares: receptores ligados a proteínas G heterotriméricas. Son parte de la maq de transducción de señales
Actividad enzimática: activada por el mec de actividades enzimáticas normalmente Kinasas.
En otras ocasiones algunas prts receptores, con actividad K en el propio receptor. Las más habituales: proteína K serintroninK o Y K. O pueden estar asociados a proteína Y K en la porción citoplasmática: citokinas.
Ejemplo ser/tre: TGFb, no promueven normalmente mitogenesis puede producir parada en el ciclo o algunas ocasiones aumento.
La mayoría de los growth factor , PDGF: de plaquetas, se une a un receptor de PGCFR , y el dominio citoplasmico con tirK, se activa al unirse PDGF.
Cambios de trascripción de genes: por ejemplo SMAD o STAT, y hay otras vías que contienen más pasos: efector que es un FT. No todos los son FT peor una gran parte son FT, que pasa a activar la trascripción de genes.
Proteína G monomérica una GTPasa monomérica: RAS una vez activado RAS, NO LO ACTIVA directamente sino que hace falta moléculas intermedias que se denominan adaptadores.
Otro tipo de Recep de señales extracelulares : CK, importancia en la reg de la MItogénesis, constituyen una variación con receptores de TIR K, no está en el mismo péptidos sino en una molécula aparte asociada al receptor. Se denominan citoplásmicas a veces unidas al receptor directamente SEÑAL ENZIMA-ACOPLADA A LOS RECEPTORES.. Las más características son YK jak y src , sistema de atajo para dar en pocos pasos la activ de los factores de transcripción llamados stats.
Cuando acabe algo en K: quinasa, proteína quinasa, JNK RK ,
Detalles de los mec de transducción de señales, menos usados que las vías mitogénicas, Menos usados para las líneas celulares no inmunes, fibroblastos (fáciles de trabajar) PDGF.
Receptor ligado a proteínas G triméricas de 7LH: GT.
Señal unión del Receptor al ligando: el receptor cambia su conformación: es entonces cuando es capaz de interaccionar con prt G heterotrimérica. La sub alfa en estado primordial inactiva. Interacciona con el receptor, cambiando su nucleótido de GDP y por GTP. Entonces se libera de la B y G, las dos: interaccionar con otras proteínas y cambiar su función. Los 2. Interaccionar como efectores.
Ejemplo la Adenilato ciclasa: glucagón. La subnidad alfa es capaz de activar a la adenilato ciclasa.
AMPc : segundo mensajero el AMPc altera la función de una proteína K: PKA: protein kinasa regulada por aMPc, se une a las sub reguladoras del heterotetrámero, se liberan las subunidades reguladoras, la PKA tiene muchos sustratos a las cuales es capaz de fosforiliar a varias prots. Una de ellas es un factor de trascripción CREB: proteína de respuesta a AMPc, Elementos de respuesta de APMc y que se trascriben ciertos genes.
Hay a veces formas solubles que son la misma que las ancladas: por corte proteolítico.
Dimerización de tiroxinaK. Dimerización y tetradimerización, la proción extracelular está unido a una YK, pero por puesnts disulfuro, algunos por dimerización. Pero diferente forma.
pgdf dímerO con 2 sitios de unión equivalentes. Que se unen a dos zonas equivalentes de dos cadenas de PGFR. QUE HACE QUE forme otro dimero, simétrico. ES EL MÁS SENCILLO el ligando con dos dominios de unión al receptor.
Egf: MONÓMERO, QUE INDUCE LA APARICION DEL SITIO DEL dimerización de EGFR
La hormona de crecimiento GH monómero con dos sitios de unión diferente que se unen a dos zonas diferentes a cada una de las
GHR, son iguales sin embargo este monómero tiene dos sitios de unión diferente: se unen a una y la otra a la otra, son intercambiables.
Dimerización o la oligodimerización peor los detalles son variables.
Transfosforilación: estén activos, aunque se haya querido cristalizar es difícil porque la membrana lo impide en parte.
Como otras proteías k: loop de activación que controla que la TK pueda fosforilar un pép fosfato que tiene la Ypsforilable.
Negro el atp.
Lo que cambia del receptor: el loop permite la transferencia o no. Pueda transferir el fosfato. El loop de activación en verde, la Y autofosforilada mantiene activado al loop ESTABILIZA ESTA CONFORMACIÓN QUE PERMITE QUE LA y QUE SE VA A FOSFORILAR , SE PUEDE TRANSferir el 3º fosfato del ATP, hay 2 mg coordinando el O2, permite transferir este P a el ox de la cadena lateral de la Y, est tiroxina acceder a ser fosforilable, este loop mantenerlo abierto hacia fuera.
fosforilación en trans nosrmalmtente fosforilado por la otra cadena del receptor YK.
Son varias veces, normalmente, se producen varias transfosforilaciones, la vía mitogénica: activación de ras es un protooncogen se aisló como un oncogén (Desde virus) dominantes positivos.
Independientemente para las señales celulares
Ras redescubrió como oncogen, luego se descubrieron mutaciones parecidas en función a los oncogenes virales y se descubrió el oncogén normal de ras, que si que responde a esta señalización es regulable, las normales c-ras y v-ras de virus. Dominante positivo.
Adaptadores y actividad catalítica: RBD2 adaptador : puente molecular no tiene actividad catalítica, hace de puente molecular entre el receptor YK fosofrilado y una proteína que modifica el estado activo e inactivo de ras. Es un puente molecular que hace que se pueda unir cercano a la mb plasmática, sos que modificará el estado activo de ras. Peor su función es como se conoce como un GEF “guanine nucleotide exange factor ” cuando SOS logra interaccionar con la mp con RAS, unido a GDP, deja de tener afinidad con GDP y tiene GTP unido. RAS: GTPasa monomérica.
Ras activado en la mb unido a GTP activado.
GRB2: dominio SH2 , homología con SRC. Las proteínas tienen en muchos casos partes de la estructura que funcionan como partes independientes, estructura tridimensional mantenida , función soportada y que funciona de forma modular. Todas las estructuras con ese dominio tendrán ese dominio, podemos hacer moléculas híbridas pegando este dominio. Realizando la misma función, unidas a otras proteínas.
Ensamblajes de dominios, cada dominio en una función, a función es la suma de los dominios. En muchos caso es así.
SRC: YK, solubres que dependen de lípidos etc, no anclados por un segmento transmembranal.
Se vio que había más proteínas parecidas a SRC, el dominio K parecidos a estas proteínas son SH1 , una secuencia no se sabía para qué servían SH2 y el SH3 tampoco servía para que servía.
Sh2: une residuos de fosfotirosina, SH3: unión a poliprolinas. Código: dominios que se unen a secuencias protéicas.
GRB2: adaptador, SH2 se une a la YK, y SH3: para reclutar a SOS. GEF a la mp.
FOSFOINÓSITOS: RECLUTAR PROTEÍNAS DE SEÑALIZACIÓN A LA MP, PORQUE TIENE ESTAS PROTEÍNAS PH, NO
PUEDEN ESTAR d emanera estable ancladas a la mp.
Se puedne unir a varias PY, en los polipéptidos, peor tienen el potencial de unirse a varias proteínas, se descubrió que no todos los YK son equivalentes para reclutar cualquier dominio SH2: ciertas proteínas con ciertos SH2 a ciertos YP de ciertos receptores.
Sh2: tienen un dominio de unión a la fosforitoxina y otro dominio de unión a un péptidos, por lo tanto cambia este dominio: cambio de especificidad.
Amplificando un poco más la diversidad.
No solo una YK diferente al tener ligeramente distintas las secuencias de fosforilación: distintos conjuntos de proteínas con Sh2, incluso dos receptores tan parecidas como las L-PDGFR y el b: no une en las mismas SH2 sino es diferente,
GRB pero en posiciones diferentes.
Identificar los dominios SH2 en kinasas como son las SRC, fosfatrasas: YK, shp1 y shp2. Hay factores de trascripción como los activados por lso receptores de CK: dominios Sh2: ensamble un dímero activo como factor de trasncripción.
Hay otra vía para activar RAS por EGF: unión de un adaptador a la fosfotiroxina, SHC, una activación de PLC (fosfolipasa C), mediado por el receptor de EFG activado y activación de pIP3K mediado por el reclutamiento de cbl. Se cree que la unión de tiroxina fosfatasas, sirve para terminar la señal.
DHAG y ca: activa a la PKC:
Clásicas PKC
Cuando se sintetizan el de pseudosutrato: inactivan catalíticamente lo comparten las 3 sub
Las noveles. No tienen regulación por calcio,
PKC Atípicas: ni acilglicerol (A medias pero no une y calcio) no se activan por ca ni acilglicerol.
Inactivar a la PKC: fosforilando al Dag que se recluta a la mb, DGK: ácido fosfatídico eliminación de Dag: mecanismos de inactivar la señal.
PIP3: varios fosfatos, pueden ser PI3P, PI3,4P2 P345P3….
Se puede bloquear la actividad del receptor de proteínas G activado, hay una PK, que utiliza como s al receptor activado: fosforilado: reclutamiento para otra proteína que se une a las fosofserinas : arrestina, no activa a G.
Vía atípica:
Hay un lípido extracelular, que funciona como una molécula de señalización: ácido isofosfatídico , el receptor extracelular es una proteína que tiene 7 sg trasmembrana acoplado a prts G heterotrimericas, cuando se activa el receptor, se activa la sub alfa y betagamma.
La L es GI: baja los niveles de AMPc dentro de las células. : el AMPC funciona como freno a la proliferación.
Se activa el complejo B-Y por un mecanismo poco definido se logar que se active ras, y MapK: proliferación celular. Los intermediarios pueden ser una YK que active este SHC que consiga que se reclute GRB2 Sos estará en la mb y activa a ras no se sabe cual es la YK, participa una PI3K hay varias isoformas de un enzima. En concreto es la gamma. Quizá más que en la proliferación celular: quimiotaxis
GEF: factor de intercambio de GTP por GDP: activa de ras unida al GTP.
Ciclo de activación-inactivación de ras: cambia la conformación: pasa a tener actividad de GTP, es capaz de unirse otra proteína gap que hace que aumente la actividad de GTP-ras y pase a estar activa.
Proteína RAS
RAS. Con unos 22 aminoácidos muy pequeña, estructura compacta pero muy moldeable con las proteínas que interaccionan: complejos de ras, con gef, gtp gdp etc, que cambios conforormacionales induce el GEF.
Ras unido a GTP , activa , el tercer fosfato del GTP está estableciendo puentes de H con dos zonas de ras, switch 1 y dos , que tienen conformaciones móviles, una cerrada y otra abierta. En la activa de ras, switch 1 y dos cerrada mantenida por la conformación en el fosfato.
La inactiva de ras, está perdido, están más abiertos.
Modificada de ras:
Si se cambia los ph de GEF: empuja, rompe puentes de hidrógeno, aa interaccionan con sitch 2, abriendo la cavidad para que el GDP no solo deje de interaccionar con ras sino que deje que difunda fuera.
GEF aparta a S 1 hacia fuera y retare a S2 de tal forma que no solo se rompe interacciones S1 CON EL GDP sino le deja un portal para salir. Cuando GDP sale fuera, como hay una concentración mayor fuera de GTP: se une y al entrar se cierra : S1 y S2: más cerrado al GTP.
Isoprenilación próxima al C terminal, hay una proteólisis, con lo cual los últimos residuos de ras está unida.
El isoprenilo, está mantenido. Hay un resíduo farnesilo…..
3 cadenas de ácido graso: se mantiene en la mebn
para que ras es esencial que esté anclado a la mb plasmática: inhibidores de enzimas de la ruta que permite el anclaje a la mb: fármacos antitumorales: disminuir la presencia de ras mutado: impedir las señales constituivas de ras activo.
Fibroblastos: estimulados con factores de crecimiento, y luego se eliminan durante 24 h :se paran en g0/g1: + factores de crecimiento: fase S, entran en la fase S. Sincronizamos.
Si conseguimos inyectar esas células con un anticuerpo que bloquea la función biológica de Ras, no logra interaccionar con las MAPk, si microinyectamos la función activante de ras: no pasa a S se quedan en G0, ras es necesario para la entrada en fase S.
El experimento similar a hacer e infectar las células con un virus oncogénico, es directamente: proteína recombinante con mutaciones similares: papel descontrolador de la proliferación en los virus oncogénicos, : dominante positiva. En lugar de transfectar: microinyector ras doble positivo: las células entraban en fase S en ausencia de fact mitogénicos.
GPRC: GTP heterotrimética, enzima efectora , adenilato ciclasa, hay un aumento de un segundo mensajero intracelular y pro ese aumento hay un paso de un estado inactivo de una pK, cuando está activo: atp: fosforilar esas proteínas su función cambia y la célula hace otras cosas.
RTK Es similar pero se usan complej de proteínas que se ensamblan unos con otros y se fosforilan unos con otros. G MONOMÉRICAS: RAS ACTIVAS, ACTIVA UNA CASCADA DE KINASAS, FOSFORILA a determinados sustratos que puedne ser proteínas que mod el citoesqueleto, factores de transcripción de determinados genes etc.
Map K: REGULADAS POR RAS ACTIVADO
Si las proteínas que están alejadas de la mp, se pueden considerar como efectores, son proteínas que están reguladas por ras activado.
Ras unido a GTP: activar su activación, su unión de ras activo cuando se unen los mitogénicos a la célula. Mutantes y candidatos de esos efectores, dominantes negativos de esos efectores potenciales: deberían de inhibir los efectos de la activación de ras.
Uno de los sistemas que se usó para detectar ras, es el doble híbrido en levadura. Esto se basa en la propiedad de las proteínas que es que tiene módulos, dominios estructuralmente compactos y funcionalmente independientes, algunos factores de transcripción son así: dominio con capacidad de unión a DNA específica , de promotores de determinados genes, en un módulo separada puente polipeptidico con la función de activar la maq basal de transcripción, separables le dominio de unión a DNA de transactivación. Activa a el promotor de un gen que no es el promotor propio, en transcripción: cis: sobre el propio gen y trans sobre otro. Trans: activación de la transcripción que no es el propio, un dominio de activación de la transcripción denominado como dominio de transactivación.
Se pueden separar en los dos dominios: artificialmente tener una construcción: un dominio de unión de DNA de un FT unido a una proteína, NT de otra proteína que podría ser ras: seleccionar proteínas que interaccionen con ras.
Genoteca con genes híbridos que tengan el dominio con los genes posibles de un organismo(todos los genes de un organismo), de CDNA para que sea una genoteca de transcripción, y un dominio que interacciona con esta proteína.
Levaduras que expresan la constricción proteína, y cada uno de los clones de lev llevará un único plásmido de esta genoteca: diferentes proteínas.
Seleccionamos los clones de esta genoteca:
Crecer solo los clones que lleven de los plásmidos posibles aquellos en los que el dominio X la proteína X, interaccione muy fuertemente con ras. Cuando se establece la interacción estable se juntarán físicamente el domio de unión de DNA con el factor de activación de la trascripción, de tal forma que solo sobreviven en un medio selectivo: el que tiene la construcción completa: el gen de selección.
Confirmación de interacción del efector de ras: no solo con el doble híbrido se necesita más.
Inmunoprecipitación con un anticuerpo específico de una proteína con un western blot de otra proteína, si está presente la segunda , el complejo de ambas: estable y aguantar la inmunoprecipitación, y está ahí presente. Es una inmunoprecipitación es una IP. Y un western blot.
Gracias a la base de datos de ncbi.
OMIM: enfermedades de causa genética mendeliana en el hombre.
Las MAPKK son bastante específicas de la vía de ERK pero en el campo de…..
Son otras protéinas G monoméricas no de la misma fam de ras las que controlan jnk , COMO RAC Y CDC342.
Al menos esta proteína ste5sirve de andamio para estas proteínas.
Puede ser el andamio la K , mapkk, para tener juntas para la mapk y mapkk.
Erk es activada porque se fosforila el loop de activación Y y treonina cercano en al secuencia primaria: cambio conformacional es accesible el sustrato al sitio catalítico. Como se termina la señal que conlleva la activación de map k: fosfatasas.
Con que se defosforile uno de los dos: inactivo.
Hay algunas fosfatasas que defosofrilan la T y Y
Fosfatasas: defosforilar los 2 residuos de la mapk: la trascripción de sus genes se activan por la activ de mapk: loop de control negativo. Autorregulación de la mapk.
Algunas de ellas: más especificidad que las mapK.
Familias de PK ancladas a la mb:
Insulina, receptores en la parte externa con S-s con dominios K intracitoplasmicas
Dependiente de ampc , CA, PKB CITOPLÁSMICAS… ETC.
PARA VER LOS COMPONENTES QUE LLEVAN LOS FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN EN EL NÚCLEO, como además de haber cascadas de activación de proteínas como hay cascadas de activación de la transcripción génica, es bastante evidente con algunos genes que intervienen en proliferación.
Lo que vemos como una cascada lineal: interacciones entre los diferentes genes, regulación de la activación y función de otras proteínas etc.
Regulación de la trascripción de genes en cascada.
Activación de factores de trascripción presentes en GO unidos al promotor inactivos, la activación mitogénica se hacen activos: activan la trascripción de otros genes que activan la trascripción de varios genes en cadena.
En última instancia: pts implicadas en la replicación de DNA o en el proceso de mitosis.
Señales mitogéncias externas a los más alejados temporalmente a la señal mitogénica:
Tempranos: cuya expresión se activa tardíamente en la activación del factor mitogénico.
FOS se activa antes de mYC peor de forma temprana los dos. Fos y myc se identificaron presentes en virus oncogéncios, implicados en cáncer, y son FTS que regulan la trascripción de genes tardíos, de horas después de que se haya iniciado la respuesta mitogénica.
Fos: activación
Los mitógenos activan a ERK y fosforila a TCF que es un factor de trascripción, presenten en g0 inactivo, cuando es fosforilado: finirse a otros factores de transcripción y activar la transcripción de fos proteína que resulta de traducir el RNA trascrito del mRNA de fos. Se unen al elemento de respuesta ser, a suero ser (FETAL).
FACTOR de trascripción Jun, forman un complejo con fos: que forma ap1 : FACTOR de trascripción activo, cuando aumenta la producción de fos por los mitógenos se pueden formar el heterodímero ap1, hay sitios en el promotor de myc que al unirse el complejo ap1 a ese sitio, ap1 element: activa la trascripción de myc.
Los complejos AP1, hay varios posibles, primero porque son complejos ap1 tanto los heterodímeros ed fos-jun y un dímero de jun- jun. Hay varios miembros de la familia de fos y varios de jun. Sitios AP1 de los genes, es grande.
Aunque hay muchos sitios AP1, composiciones del homodímero-heterodímero ap1, no todos los posibles complejos ap1: capacidad de regular la trascripción de todos los sitios posibles ap1, activados mejor por un heterodímero/homodímero que otros. No cualquier complejo ap1 no es le mejor de activar la trascripción en un determinado sitio en un determinado gen.
L a trascripción de jun regulada por mitógenos, no implicada por ERK, interviene en vez de ERK, JNK, en el promotor del propio jun hay un sitio ap1, pero el complejo ap1 que mejor activa el sitio ap1, no es fos jun ni jun jun, sino con otro monómero: atf2: SITIO PROMOTOR DE JUN, para que tengamos jun atf2 activo: tiene que ocurrir que en un sitio de la S-t P en jun en G0, ese sitio se defosforila con una fosfatasa. Que activada por mitógenos o lo que sea logra defosforilar este sitio inhibidor.
Cuando ese sitio está defosforilado, se une a atf2 en el sitio ap1, y son fosforilados en un sitio activo los 2. Pueden funcionar para activar la trascripción de jun.
Erk fosofrila y activa a fos para aumentar la trascripción de fos como a tcf.
Myc: producto que se identifico en determinados oncogenes v-myc. Importante no solo de prolif cel: apop, diferenciación etc: regulador global de la trascripción. 15-20%genes están regulados de alguna manera por myc.
No solo se controla por la trascripción del mensajero como la degradación. Además la degradación de la proteína degradado por el proteasoma o no. participa la GSK3.
Myc contorla la trascripción de genes en el ciclo
Aumenta de cycD y cdk4.
Aumenta la trascripción de ciclinas y CDKs: ciclinas de la fase G1 más tempranas, ciclinas cycD y cdk4.
También de una fosfatasa CDC25A : defosforilación necesaria para que se active las CDks.
Importante para que haya más ciclina sino que tiene un efecto adicional ayuda a que se activen la siguiente ciclina E-cdk2 ayuda porque además de que haya un exceso de CYCD/cdk4: inhibidor de ciclinas cdkc: p27(Cki).
Baje p27: baja la capacidad de síntesis, secuestrado por ciclina D cdk4. Myc controlado: no haya suficiente p27 para que las cdk2: esté libre para actúar, esté libre.
Myc controla la transducción de otro factor de trascripción que controla otros factores de trascripción al inicio de la fase S, E2F.
Resumen de la señalización de mitosis:
activación de las map kinasas que se translocan al núcleo: cambio de la expresión génica: progresión del ciclo celular.
El ciclo celular en mamíferos suele ser de 24h con 1 punto de restricción y con una fase de quiescencia.
Punto de restricción y factores de crecimiento:
Los factores de crecimiento: necesarios para la progresión del ciclo celular, si pasa por el punto de restricción podremos quitar los GF que seguirán actuando. Si las células pasan del punto de restricción R, de G1 temprana a g1 tardía, aunque quitásemos los factores de crecimiento, las células siguen en ciclo en fase S. Si están en G1 early antes de R y quitamos los GFs , entonces pasa a fase de quiescencia G0.
Complejo que sea el G0-G1 CDC6 Y VARIAS CICLINAS: acordarse del Deab
De fase G1 (se inicia con estas pero se mantienen a lo largo del tiempo. ciclina D….., cdk4,6 sin actividad cíclica!!! Sólo decaen al eliminar los factores de crecimiento! Se degradan las ciclones cuando no existen GFs en el medio. Pasando por lo tanto las células a la fase G0.
G1-S : Ciclina E CDK
S-G2: Ciclina A-cdk
M: Ciclina B-cdk
Cdk1: HHcdc2 (homólogo de cdc2 de pombe)
Cuadro del alberts
Perfil de CDC si lo seguimos, el máximo de actividad ocurre durante la fase G2/M. Igualmente en un diente de sierra.
En la Diapo: error, los complejos CDK4,6 debe de degradarse con el tiempo, porque la actividad debe de degradarse con el tiempo en las células que no salen del ciclo. Si se mantiene en ciclo por la presencia continuada de factores de crecimiento: ciclina D CDCK4,6 se mantiene su actividad por lo que se mantiene su actividad.
Regulación de las CDK en mamíferos. Iguales que en levaduras. Diapo!
Cualquier Pk la parte catalítica dos lóbulos, el C y el N. Donde se unen: sitio catalítico. La unión de la ciclina: cambio conformacional, apertura de parte del sitio catalítico. El lazo se abre hacia fuera y permite la entrada del ATP. Se produce posteriormente gracias a la fosforilación del lazo catalítico: se carga negativamente, unirse a una región rica en arg y lys, anclada en el lóbulo C de las CDKs.
El sitio catalítico en condiciones nativas, el lazo está cercano en la entrada del CA no permitiendo la entrada y salida de productos y reactivos.
Cuando se fotografía la estructura de la CDK permite ver en el fondo una estructura que corresponde el ATP, sustrato que utilizará la K para fosforilar la proteína.
Wee1 la proteína tiroxin k que fosforila la Y del SITIO ACTIVO: por lo que BLQA LA UNIÓN AL atp. Para activarla es necesario defosforilar este resíduo de Y , cercano al centro activo, realizado por la fosfatasa CDC25.
Ciclo celular en Mamíferos. 15/04/09 16:
Describir el ciclo en mamíferos: para conocer que prevalece sobre qué.
Experimento de fusión: formación de heterocariontes de diferentes células que están en diferentes puntos del ciclo.
Resultado del heterocarionte:
1.-Primero fusionamos células en cualquier fase con células en mitosis. La célula queestá en mitosis obliga a la otra en entrar en mitosis. “Manda la mitosis”
Conclusión: Algo hay en la mitosis que domina y obliga a cualquier núcleo a pasar a mitosis. Confirma la hipótesis de que en mitosis algo domina sobre cualquiera de las fases del ciclo celular. Máximo de actividad de los C-CDK domina sobre todo. No permite a nada que esté en otra fase que no sea la suya: mitosis.
Cantidad del complejo C-cdk que hay es limitante importancia sobre la cantidad de los C-cdks activados
2 .-G1 con fase de S. La de G1 entran en S: hay algo en las células de fase S que hace que cualquier célula de fase g1 con esto: fase S domina frente a G1. Eso se debe a que hay un nivel de activación de CDK-c suficiente para entrar a S.
3.- fusión de S con una célula en G2: retraso en G2. SI EL CICLO HUBIERA PROGRESADO, ESAS CÉLULAS TENDRÍAN que haber llegado a mitosis y no han llegado, hay algo en S que bloquea la progresión de G2. Y las de S no pasan a G2. Hay algo en G2 que retrasa la entrada en G2 desde S o al revés, hay algo en S que inhibe la progresión hacia G2.
Alternancia de fases: cuando una célula está en S no puede haber mitosis, por eso se retrasa G2, ejemplifica que es justo las conclusiones generales del ciclo celular. Es la alternancia de fases.
Alternancia de fases S y M. Debido a ORC.
Los orígenes de replicación están ocupados durante la mayoría de las fases del ciclo por el complejo ORC, ese complejo durante la fase G1: formación de los precomplejos de replicación , de los componentes: CDC6 CDT1 y MCM (helicasa 2-7 ) y la MCM (misma familia pero sin actividad helicasa).
Transición G1/S
El CE-CDK2 ayudado por la CDC7 /cdk) ciclina: DBF4 otras CDKS DE FASE S minoritarias.
Fosofrilan a MCM2-7 a la helicasa. Esta fosforilación estimula la unión de CDC45 y se abre el origen de replicación debido a las helicasas y CDC45 entra en el origen. Es entonces cuando el precompleto se disocia.
Complejo de iniciación de la replicación del DNA: Se liberan todos excepto ORC-CDC45: se unan a la zona abierta debido a la interacción con CDC45: RPA (homólogo a ssb) entran los RPC y la DNApoldelta.
Prevención de la re-replicación: 1 copia y solo 1
Estos complejos de replicación se desensamblan de forma que en la fase G1 temprana, han desaparecido CDT1 Y CDC6. Se volverán a sintetizar y por lo tanto a progresar el nuevo ciclo.
Regulación de los complejos de prereplicación
CDC6 se degrada en levadura x ubicuitilación y por CDC34. En mamíferos CDC6 en parte se degrada y en parte tras la P, va a salir del núcleo celular hacia el citplasma.
CDT1 se degrada en pombe durante la fase S, en cerevisiae no hay. En mamíferos se inactiva por la unión a una proteína llamada Geminina. Ese es el factor negativo que controla G2. ( se degradará durante la M , por CDH1/APC).
MCM2-7 sale del núcleo tras la fase S en levaduras .En mamíferos pierde a unión fuerte a la cromatina por la P.
