CENTRIFUGACIÓN
DIFERENCIAL
PREGUNTAS
¿Qué es la compartimentalización celular?
Es la organización interna de las células
eucariontes, donde estructuras delimitadas por una
o dos membranas (organelos) realizan reacciones
metabólicas que permiten el funcionamiento
celular.
¿Qué tienen en común estos compartimientos?
Su estructura; presencia de membrana
fosfolípidos, proteínas, azucares y otros
metabolitos en su interior.
¿Qué diferencia a estos compartimientos?
Las funciones que realizan para mantener el
funcionamiento celular; cada uno tiene. su función
específica. Para que funciones de manera correcta
deben interactuar entre sí. Formas diferentes,
tamaños diferentes, etc. Todo esto permite
separarlos.
FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR
Técnicas y procedimientos que permiten separar y
purificar un orgánulo especifico de las células para
su estudio a partir de sus características
moleculares, bioquímicas y formas de los
diferentes gránulos.
El tamaño es clave porque permite separarlos
mediante un pequeño llamado centrifuga.
LECTURA 1: PURIFICACIÓN DE LAS CÉLULAS Y SUS
PARTES
Se separan componentes internos de la célula, por
lo que se debe romper la membrana:
Western Blot: se utiliza detergente para
cambiar solubilidad presentes en
membrana y se destruya la membrana.
Utilización de medio hipotónico (baja
concentración de sales entra agua, se
hincha y se rompe, mejor conocido como
citólisis) para no causar daño a la célula ni
organelos. Se libera todo el contenido de la
célula.
Fuerza mecánica (presión): presionar de
manera de desgarrar la membrana para que
se libere el contenido.
Sonicación: aplicación de fuerza vibratoria
que genera ondas que produce la
destrucción de la membrana plasmática y se
libera contenido.
Para separar los componentes subcelulares,
debemos romper la membrana plasmática. Esto se
logra ajustando el pH, utilizando sonicación,
soluciones hipotónicas o equipos especializados
para homogenizar tejidos.
Todo se realiza a través de un tubo de ensayo y se
homogeniza, se mantiene a través de un medio
líquido que tenga las condiciones óptimas de la
célula y posteriormente comienza el proceso de
centrifugación de forma seriada.
En el proceso de centrifugación se utiliza una
centrifuga que gira y produce que:
Moléculas de mayor tamaño (núcleo) caigan
al fondo del tubo.
Moléculas de menor tamaño quedan en
sobrenadante (ribosomas, unidades
ribosomales).
A medida que aumenta la velocidad van cayendo
estructuras más pequeñas.
De mayor a menor tamaño:
- Núcleo.
- Mitocondria tiene doble membrana.
- Lisosomas contiene enzimas ácidas.
- Peroxisoma.
- Cloroplastos.
- Fracciones microsomales fragmentos
de RE (membranas microsomales).
- Ribosomas.
- Subunidades ribosomales.
- Soluble en el citoplasma citosol.
