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PRÁCTICA 1: USO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO
- ¿Mencione 3 microscopistas importantes en la evolución del microscopio y su obra? a. Antonie van Leeuwenhoek: Conocido como el "padre de la microbiología". Construyó microscopios simples de lente única con los que observó por primera vez bacterias y protozoos ("animáculos"). b. Robert Hooke: Autor de Micrographia (1665). Utilizó un microscopio compuesto para observar cortes de corcho, acuñando el término "célula". c. Ernst Abbe: Formuló las bases matemáticas de la resolución óptica y diseñó el condensador que lleva su nombre, optimizando la iluminación en el microscopio compuesto.
Referencia: Madigan, M. T., et al. (2019). Brock. Biología de los microorganismos. 15ª ed. Pearson Educación.
- ¿Cuál es la aplicación clínica del microscopio? a. Su uso es fundamental para el diagnóstico de enfermedades infecciosas y hematológicas. b. Identificar bacterias, hongos y parásitos en muestras biológicas (sangre, orina, heces). c. Realizar conteos celulares (citometría hemática). d. Observar cambios morfológicos en tejidos (biopsias) para detectar neoplasias (cáncer). Referencia: Jawetz, M., & Adelberg, E. (2016). Microbiología Médica. 27ª ed. McGraw-Hill.
- ¿Mencione 5 factores que dañan al microscopio y 5 cuidados?
Factores que lo dañan Medidas de cuidado
- Humedad excesiva (fomenta hongos en lentes).
- Guardar en un lugar seco o usar fundas protectoras.
- Polvo y partículas abrasivas. 2. Limpiar las lentes solo con papel seda especial.
- Residuos de aceite de inmersión en objetivos secos.
- Limpiar el objetivo de 100x tras cada uso con alcohol isopropílico.
- Vibraciones o golpes mecánicos. 4. Transportarlo siempre con las dos manos (brazo y base).
- Cambios bruscos de voltaje. 5. Conectarlo a un regulador de corriente.
Referencia: Tortora, G. J., et al. (2017). Introducción a la Microbiología. 12ª ed. Editorial Médica Panamericana.
- ¿Mencione 5 tipos de microscopio y su funcionamiento? a. Campo Claro: La luz atraviesa la muestra; los objetos se ven oscuros sobre un fondo claro. b. Campo Oscuro: Utiliza un condensador especial que dispersa la luz; solo la luz reflejada por la muestra entra al objetivo. Ideal para bacterias delgadas como Treponema pallidum. c. Contraste de Fases: Transforma las diferencias de índice de refracción en variaciones de intensidad luminosa. Permite ver células vivas sin teñir. d. Fluorescencia: Utiliza luz ultravioleta para excitar fluorocromos en la muestra, emitiendo luz visible de colores brillantes. e. Electrónico de Transmisión (MET): Utiliza un haz de electrones en lugar de luz. Logra aumentos de hasta 100,000x para ver estructuras internas (organelos, virus).
Referencia: Madigan, M. T., et al. (2019). Brock. Biología de los microorganismos. 15ª ed.
- ¿Qué significa microscopio simple y compuesto? a. Microscopio Simple: Consta de una sola lente convergente (como una lupa). Su poder de aumento es limitado. b. Microscopio Compuesto: Utiliza un sistema de dos o más lentes (objetivo y ocular) dispuestas en serie para multiplicar el aumento total.
Referencia: Murray, P. R., et al. (2017). Microbiología Médica. 8ª ed. Elsevier.
- Definir colorante. Un colorante es una sustancia (generalmente un compuesto orgánico) que posee grupos químicos unidos a anillos bencénicos que le confieren color ( cromóforo ) y la capacidad de unirse a las fibras o estructuras celulares ( auxocromo ). En microbiología, son sales compuestas por un ion positivo y uno negativo, donde uno de ellos es el cromóforo.
Son sustancias de origen químico o biológico (tintes, pigmentos, reactivos), mayormente compuestos por: grupos cromóforos y grupos con enlaces dobles conjugados. Estos suelen darles su color al colorante, y pueden unirse a las células por enlaces iónicos, covalentes o cromóforos.
- Enuncie que son las tinciones simples y especiales y diferencias entre las dos. a. Tinciones simples: Utilizan un solo colorante (como azul de metileno o cristal violeta). Su objetivo principal es destacar la morfología (forma), el tamaño y la agrupación de los microorganismos. b. Tinciones especiales: Se utilizan para observar estructuras específicas que no se tiñen con métodos comunes. Ejemplos: tinción de cápsulas, de endosporas o de flagelos. c. Diferencia principal: La tinción simple solo da contraste general a toda la célula, mientras que la especial revela partes anatómicas externas o internas específicas mediante protocolos más complejos.
- ¿Cuál es el tamaño promedio de las bacterias?
- ¿Qué ventajas se tienen en una preparación entre porta y cubreobjetos y que desventajas? a. Ventajas: i. Proporciona una superficie plana y estable para colocar la muestra. ii. Facilita la manipulación y el transporte de la preparación. iii. Permite que la luz del microscopio atraviese la muestra de manera uniforme. iv. Es reutilizable tras limpieza adecuada. v. Protege la muestra de contaminación y desecación. vi. Evita el contacto directo de la muestra con el objetivo del microscopio vii. Permite el uso de técnicas como la observación en fresco o tinciones sin que la muestra se desplace. b. Desventajas: i. Frágil ii. Si está sucio o rayado, genera artefactos ópticos que dificultan la observación. iii. El grosor del vidrio puede variar y afectar la calidad de la imagen.
- ¿En qué consiste un colorante básico y un colorante ácido?
a. Colorante Básico: El cromóforo tiene carga positiva (catión). Como la superficie bacteriana suele tener carga negativa, estos colorantes son atraídos por la célula y la tiñen (ej. safranina, cristal violeta). b. Colorante Ácido: El cromóforo tiene carga negativa (anión), principalmente en sus grupos carboxilos e hidroxilos, uniéndose a estructuras cargadas positivamente, como el citoplasma.
- ¿Cuál es la importancia de las técnicas de coloración? a. Son esenciales porque la mayoría de los microorganismos son transparentes e incoloros cuando se observan con luz blanca. La coloración crea el contraste necesario para identificar la morfología, diferenciar grupos taxonómicos (como en la Tinción de Gram) y diagnosticar agentes causales de enfermedades.
- Enuncie tres bacilos patógenos para el humano. a. Bacillus anthracis (causante del carbunco o ántrax). b. Mycobacterium tuberculosis (causante de la tuberculosis). c. Clostridium tetani (causante del tétanos).
- Enuncia los componentes de la siguiente bacteria en toda su estructura. a. Cápsula: Capa externa organizada y pegajosa (señalada en la parte más externa). b. Pared celular: Estructura rígida debajo de la cápsula. c. Membrana plasmática: Capa delgada interna que rodea el citoplasma. d. Fimbrias o Pili: Los "pelitos" cortos que rodean toda la superficie. e. Citoplasma: La matriz fluida interna (donde apunta el cuadro de "Color rojo"). f. Ribosomas: Los puntos pequeños distribuidos en el interior (donde apunta el cuadro de "Color verde"). g. Nucleoide (ADN): La masa de fibras largas en el centro de la célula. h. Flagelo: El apéndice largo en forma de látigo usado para la locomoción.
PRÁCTICA 3: Tinción de Gram y Ziehl-Neelsen.
Es la tinción más importante y utilizada en bacteriología médica. Permite clasificar rápidamente a las bacterias en dos grandes grupos, lo cual es crucial para:
a. Iniciar un tratamiento antibiótico empírico (ya que algunos fármacos solo actúan contra un grupo). b. Orientar la identificación taxonómica del patógeno.
- Mencione 3 nombres de bacterias que sean acidorresistentes. a. Mycobacterium tuberculosis (causa la tuberculosis). b. Mycobacterium leprae (causa la lepra). c. Nocardia asteroides (parcialmente ácido-resistente).
- Defina los términos Gram-positivo y Gram-negativo. a. Gram-positivo: Bacterias que retienen el colorante primario (cristal violeta) y se observan de color púrpura o violeta al microscopio tras completar la técnica. b. Gram-negativo: Bacterias que pierden el cristal violeta durante la decoloración y aceptan el colorante de contraste (safranina), observándose de color rojo o rosado.
- Enumerar algunos tipos de bacterias gram-positivas y gram-negativas.
- ¿Qué es un mordiente y cuál se utiliza en la tinción de Gram?
Un mordiente es una sustancia que aumenta la afinidad de una célula por un colorante o ayuda a fijarlo en la estructura celular.
PRÁCTICA 4: Medios de cultivo y técnicas de aislamiento de bacterias.
En el cuaderno.
PRÁCTICA 5: Morfología bacteriana y colonial.
Ya impreso
PRÁCTICA 6: Microcultivo de hongos
PRÁCTICA 7:
- Defina que es un hongo, hifa, micelio y espora.
Hongo: Microorganismo eucariota, quimioheterótrofo, que posee una pared celular compuesta principalmente de quitina y carece de clorofila.
Hifa: Filamento largo de células que constituye la unidad estructural de los hongos filamentosos (mohos).
Micelio: Masa o conjunto de hifas entrelazadas que forman el cuerpo vegetativo del hongo.
Espora: Estructura reproductiva (sexual o asexual) o de resistencia que permite la dispersión y supervivencia del hongo en diferentes ambientes.
- ¿Cómo se clasifican los hongos?
Los hongos se clasifican principalmente según su tipo de reproducción sexual y la estructura de sus hifas en:
Zygomycota: Forman zigosporas sexuales; hifas generalmente no septadas (cenocíticas).
Ascomycota: Forman esporas en sacos llamados ascas.
Basidiomycota: Forman esporas externamente en una estructura llamada basidio.
Microsporidia: Hongos parásitos intracelulares obligados que carecen de mitocondrias.
- Mencione hongos clasificados como Fungi Imperfecti.
Se les llama así a los hongos en los que no se ha observado una fase de reproducción sexual. Algunos ejemplos son:
Candida albicans.
Epidermophyton.
Coccidioides immitis.
- ¿Qué es un microcultivo?
d. Puede producir micotoxinas como la aflatoxina. e. Es un patógeno oportunista común en pacientes inmunosuprimidos.
- Mencione 5 características del hongo ‘’ Penicillium’’. a. Sus estructuras microscópicas tienen forma de "pincel" o mano. b. Es la fuente original del antibiótico penicilina. c. Se utiliza industrialmente en la maduración de quesos (ej. P. roqueforti ). d. Rara vez causa enfermedad en humanos, excepto en casos muy severos de inmunosupresión. e. Sus conidios se disponen en cadenas largas a partir de células llamadas fiálides.
PRÁCTICA 8: Ecología bacteriana.
- Defina ecología, ecosistema, hábitat y nicho ecológico. a. Ecología: Es el estudio de las interacciones entre los organismos y su entorno, incluyendo tanto los factores bióticos (seres vivos) como los abióticos (luz, temperatura, pH). b. Ecosistema: Es una unidad funcional que incluye a todos los organismos vivos de un área determinada y los componentes físicos con los que interactúan. c. Hábitat: Es el lugar físico o ambiente específico donde vive y se desarrolla un organismo. d. Nicho ecológico: Es la función o "profesión" que desempeña un organismo dentro de su ecosistema, incluyendo su dieta, comportamiento y cómo utiliza los recursos del hábitat.
- Establezca la distinción entre simbiosis y comensalismo.
- Defina oportunismo y parasitismo.
- Enuncie una definición de microorganismo anfibionte.
Un microorganismo anfibionte es aquel que puede comportarse como comensal o como parásito dependiendo de las condiciones del huésped. Es decir, vive en equilibrio con el organismo, pero ante un desequilibrio (como la inmunosupresión), cambia su comportamiento a patógeno.
- Enuncie los tipos de microbiota del cuerpo humano. a. Microbiota residente: Consiste en tipos de microorganismos relativamente fijos que se encuentran regularmente en un área determinada a una edad determinada; si se altera, se restablece rápidamente por sí sola. b. Microbiota transitoria: Microorganismos (potencialmente patógenos o no) que habitan en la piel o mucosas por horas, días o semanas; provienen del medio ambiente y no se establecen de forma permanente.
- ¿De qué depende la adquisición de microbiota residente de un individuo? a. Vía de nacimiento: Si el parto fue vaginal (exposición a bacterias vaginales) o por cesárea (exposición a bacterias de la piel materna). b. Alimentación: Lactancia materna versus fórmula infantil. c. Ambiente: El entorno donde se desarrolla el individuo y el contacto con otras personas o animales. d. Higiene y uso de antibióticos: Factores que pueden alterar drásticamente la colonización inicial.
- ¿Qué importancia tiene la flora residente? a. Interferencia bacteriana: Evitan la colonización de patógenos al competir por nutrientes y sitios de unión en los receptores celulares. b. Producción de sustancias: Sintetizan vitaminas esenciales (como la vitamina K y el complejo B). c. Desarrollo inmunológico: Ayudan a "entrenar" y madurar el sistema inmunitario del huésped desde el nacimiento. d. Producción de bacteriocinas: Generan sustancias químicas que inhiben el crecimiento de otras bacterias competidoras.
- Enumere algunos microorganismos psicrófilos causantes de descomposición de alimentos de refrigeración. Estos microorganismos son el "dolor de cabeza" de la industria alimentaria, ya que alteran los productos incluso bajo refrigeración:
a. Pseudomonas spp. (especialmente P. fluorescens ): Principales responsables de la putrefacción de carnes y lácteos. b. Brochothrix thermosphacta : Común en productos cárnicos envasados. c. Alcaligenes spp.: Pueden causar viscosidad y cambios de color en la leche. d. Flavobacterium spp.: Asociadas a la descomposición de pescados y mariscos.
- Menciona ¿Qué importancia médica tiene conocer los rangos de temperatura de las bacterias? Conocer estos rangos es fundamental por tres razones principales:
a. Patogénesis: La mayoría de los patógenos humanos son mesófilos , ya que su temperatura óptima coincide con la temperatura corporal humana (37 °C). b. Diagnóstico: En el laboratorio de microbiología, las estufas de incubación se ajustan a 35-37 °C para simular el ambiente del cuerpo y permitir el aislamiento de los sospechosos. c. Control de Infecciones y Esterilización: Permite diseñar métodos físicos (como el autoclave o la pasteurización) para destruir bacterias mediante calor, o métodos de conservación (refrigeración/congelación) para inhibir su crecimiento.
- En los tubos de caldo nutritivo ¿A qué temperatura espera un mejor desarrollo y por qué? En un entorno general de laboratorio clínico, se espera un mejor desarrollo a 37 °C.
¿Por qué?
Porque el caldo nutritivo se utiliza habitualmente para cultivar bacterias de interés médico (mesófilas). A esta temperatura, la actividad enzimática de los patógenos alcanza su velocidad máxima. Si la temperatura fuera menor, el metabolismo sería lento; si fuera mucho mayor, las proteínas y membranas celulares se desnaturalizarían, deteniendo el crecimiento.
Fuentes Bibliográficas (Formato Vancouver)
- Madigan MT, Bender KS, Buckley DH, Sattley WM, Stahl DA. Brock Biología de los Microorganismos. 15a ed. Madrid: Pearson Educación; 2019.
- Murray PR, Rosenthal KS, Pfaller MA. Microbiología Médica. 9a ed. Barcelona: Elsevier;
- Tortora GJ, Funke BR, Case CL. Introducción a la Microbiología. 12a ed. Buenos Aires: Editorial Médica Panamericana; 2017.
PRÁCTICA 9: Obtención y aislamiento de cultivos puros.
- ¿Qué factores deben cuidarse al realizar el cultivo de un microorganismo?
Para que un microorganismo se desarrolle in vitro , se deben replicar las condiciones de su nicho ecológico o del huésped. Según Murray (2021) , los factores críticos son:
a. Disponibilidad de Nutrientes: Presencia de fuentes de carbono, nitrógeno y sales minerales. b. Temperatura: La mayoría de los patógenos humanos son mesófilos (crecen óptimamente a 35-37°C). c. Atmósfera Gaseosa: Presencia o ausencia de O2. Se dividen en aerobios estrictos, anaerobios, microaerófilos o capnófilos (ricos en CO2). d. pH: La mayoría de las bacterias prefieren un pH neutro o ligeramente alcalino (7.2 a 7.4). e. Humedad y Presión Osmótica: El agua es vital para el metabolismo; medios muy salinos pueden inhibir el crecimiento por plasmólisis. f. Tiempo de Incubación: Varía desde 18 horas (enterobacterias) hasta semanas (micobacterias).
- ¿Qué es un cultivo puro?
Un cultivo puro (o cultivo axénico) es aquel que contiene una única especie de microorganismo que procede de una sola célula. De acuerdo con Jawetz (2011) , en un cultivo puro todas las células son genéticamente idénticas, lo que permite estudiar las propiedades específicas de ese taxón sin interferencias de otros organismos.
- ¿Qué tipos de nutrientes debe tener un medio de cultivo?
Los medios de cultivo deben suministrar los elementos necesarios para la síntesis de macromoléculas. Walker (2006) los clasifica en:
a. Macronutrientes: Carbono (energía y estructura), Nitrógeno (proteínas y ácidos nucleicos), Azufre y Fósforo. b. Iones Metálicos: , que actúan como cofactores enzimáticos. c. Factores de Crecimiento: Vitaminas, aminoácidos o purinas/pirimidinas que el microorganismo no puede sintetizar por sí mismo. d. Agua: El solvente universal para todas las reacciones metabólicas.
- ¿Cuál sería la importancia de obtener cultivos puros?
La importancia radica en la precisión del diagnóstico y la investigación clínica. Según Romero (2018) , obtener un cultivo puro es fundamental para:
PRÁCTICA BIOQUÍMICA: ALBÚMINA SÉRICA
- Mencione cuales son las proteínas plasmáticas
El plasma contiene una mezcla compleja de proteínas (concentración total de 6 a 8 g/dL ). Según Baynes (2019) , se clasifican principalmente en:
a. Albúmina: Es la proteína más abundante (aprox. 50-60% del total). b. Globulinas: Se dividen por su movilidad electroforética en: i. Alfa-1: Antitripsina, glucoproteína ácida. ii. Alfa-2: Haptoglobina, ceruloplasmina, macroglobulina. iii. Beta: Transferrina, lipoproteínas (LDL), complemento C3. iv. Gamma: Inmunoglobulinas (IgG, IgA, IgM, IgD, IgE). c. Proteínas de la coagulación: Principalmente el Fibrinógeno (factor I).
- Describa las funciones de las proteínas plasmáticas
De acuerdo con Guyton y Hall (2021) y Hernández (2019) , las funciones principales son:
a. Presión Oncótica (Coloidosmótica): La albúmina es responsable del 80% de esta presión, la cual mantiene el líquido dentro de los vasos sanguíneos y evita el edema. b. Transporte: Actúan como "taxis" para sustancias insolubles. La albúmina transporta ácidos grasos, bilirrubina y fármacos; la transferrina transporta hierro. c. Inmunidad: Las gammaglobulinas actúan como anticuerpos frente a antígenos externos. d. Coagulación y Hemostasia: El fibrinógeno y otros factores previenen la pérdida de sangre tras una lesión vascular. e. Amortiguación del pH: Ayudan a mantener el equilibrio ácido-base actuando como sistemas tampón (buffer).
- Describa la aplicación médica de las proteínas plasmáticas
En la práctica clínica (según Harrison, 2018 ), su medición es vital para:
a. Diagnóstico de Hepatopatías: Como el hígado sintetiza la mayoría de estas proteínas (excepto las inmunoglobulinas), una baja de albúmina sugiere daño hepático crónico (cirrosis). b. Evaluación de la Función Renal: La presencia de albúmina en la orina (microalbuminuria) es el primer signo de nefropatía diabética. c. Detección de Inflamación: La Proteína C Reactiva (PCR) es un marcador de fase aguda que indica inflamación o infección activa. d. Monitoreo Nutricional: Niveles bajos de albúmina o prealbúmina indican desnutrición proteico-energética severa.
- Mencione 3 patologías en donde la albúmina se encuentra elevada
Es importante notar que la elevación de la albúmina es infrecuente y generalmente no indica una enfermedad de "exceso de producción", sino una concentración relativa. Según Hernández (2019) :
a. Deshidratación Grave: (Causa más común) Al disminuir el volumen de agua en el plasma, la concentración de albúmina aumenta de forma relativa. b. Vómitos o Diarrea profusa: Por el mismo mecanismo de hemoconcentración. c. Uso prolongado de torniquete: Durante la extracción de sangre (causa de error preanalítico).
- Mencione 3 patologías en donde la albúmina se encuentra disminuida
Esta condición es muy común en medicina interna. Basado en la GPC de Enfermedad Renal Crónica (CENETEC) y Baynes (2019) :
- Síndrome Nefrótico: El riñón pierde la capacidad de filtrar proteínas y la albúmina se excreta masivamente por la orina.
- Cirrosis Hepática: El hígado está cicatrizado y pierde su capacidad funcional para sintetizar proteínas.
- Malnutrición (Kwashiorkor): Falta de ingesta de aminoácidos esenciales para la síntesis proteica.
