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Carrera de Médico Cirujano

Coordinación Área Biomédica

Microbiología e Inmunología SGC-FESZ-MC-ML

Fecha de aprobación: 29/09/2021.

DIRECTORIO FES ZARAGOZA

Dr. Víctor Manuel Mendoza Núñez Director. Dr. Vicente J. Hernández Abad Secretario General. Dra. Rosalinda Escalante Pliego Secretaría de Integración, Promoción y Desarrollo Académico. M. en C. Faustino López Barrera Secretario de planeación. Dra. Mirna García Méndez Coordinadora de trayectoria escolar de las Ciencias de la Salud y del Comportamiento.

Elaborado por: José Fernando Arellano Cobián. Yolanda García Méndez. Revisado por: Luis López Pérez. Emelina Amil Estrada. Lina Ortíz Ibarra. Evangelina López Nieto. Coordinado por: José Fernando Arellano Cobián. Coordinador de Microbiología, Parasitología e Inmunología Clínica. Primer año

ÍNDICE

• Descripción y uso del microscopio.
• Tinciones Simples
• Tinción de Gram y Ziehl-Neelsen
• Medios de cultivo y técnicas de aislamiento de bacterias
• Morfología bacteriana y colonial
• Análisis bacteriológico de aguas para la determinación de coliformes
• Microcultivo de hongos
• Requerimiento gaseoso y temperaturas para el crecimiento bacteriano
• Obtención y aislamiento de cultivos puros
• Mecanismo de patogenicidad y virulencia.
• Fisiología o metabolismo bacteriano.
• Acción de agentes físicos y químicos sobre el crecimiento bacteriano.......................................
• Antibiograma.
• Microorganismos patógenos y enfermedad
• Reacciones de precipitación en gel (OUCHTERLONY)
• Reacción de precipitación en capilar............................................................................................
• Reacciones de aglutinación
• Gonadotropina Coriónica Humana
• Fagocitosis:
• Antiestreptolisinas.
• Complemento
• Proteína C Reactiva.
• Determinación del grupo sanguíneo y pruebas cruzadas..........................................................
• Factor reumatoide
• Inmunidad específica.
• Choque Anafiláctico.
• REGLAMENTO DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA E INMUNOLOGÍA

DOCENCIA MANUAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA I Código Fecha de elaboración o revisión Versión Página SGC-FESZ-MC-ML03 29/ 09 /2021 1 2 / 160 de seres vivos que nuestros sentidos, abandonados a sus posibilidades naturales, son incapaces de manifestarnos CONOCIMIENTO DE LAS PARTES FUNDAMENTALES DEL MICROSCOPIO Un microscopio simple es un lente de aumento ordinario, con la cual se pueden observar múltiples objetos microscópicos. El microscopio compuesto (de MICROS: PEQUEÑO y SCOPIO: OBSERVAR), difiere del microscopio simple, en que tiene dos sistemas de lentes, uno conocido como objetico y el otro como ocular, montados en un tubo o cuerpo del microscopio, la imagen que ve el ojo tiene un aumento igual al producto de la multiplicación de los aumentos de los dos sistemas de lentes. Las diferentes partes del microscopio pueden clasificarse 4 cuatro sistemas: A) Sistemas de soporte El sistema de soporte comprende:

1. El pie
2. El brazo
3. El revólver (porta objetivos)
4. La platina
5. El carro (no todos los microscopios B) Sistema de aumento El sistema de aumentos. Se constituye por una combinación de lentes; el tubo, el ocular y los objetivos. Los lentes del microscopio están fijados en dos conjuntos, cada uno de la extremidad de un tubo largo. El primer conjunto de lentes abajo del tubo y arriba de la preparación a examinar es el lento objetivo El segundo conjunto de lentes está en lo alto del tubo, donde se colocan los ojos, son los lentes oculares.

DOCENCIA MANUAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA I Código Fecha de elaboración o revisión Versión Página SGC-FESZ-MC-ML03 29/ 09 /2021 1 3 / 160 LOS OBJETIVOS. ● El aumento Está indicado para cada lente, por un número que se encuentra que se encuentra grabado en su tubo.

• el objetivo 5 aumenta 5 veces
• el objetivo 10x aumenta 10 veces presentando en la circunferencia del tubo cercano a la lente una banda de color AMARILLO
• el objetivo de 40 x aumenta 40 veces presentando banda de color AZUL
• el objetivo 100x aumenta 100 veces presentando una banda de color BLANCO. Es el objetivo que utiliza en inmersión aceite de cedro. ● Distancia frontal útil de objetivo Es la distancia frontal que separa el objetivo de la preparación a examinar cuando tienes una imagen nítida. Entre más largo es la lente objetiva distancia frontal disminuye. Objetivo 5x… distancia frontal= 20-25 mm Objetivo 10x… distancia frontal= 5-6 mm Objetivo 40x… distancia frontal= 0.51.5mm Objetivo 100x … distancia frontal= 0.15-0.20mm LOS LENTES OCULARES. El aumento está indicado sobre las lentes oculares. Un aumento de 10x aumenta 10 veces la imagen producida por el lente objetivo. Para conocer el aumento del objeto observado, basta multiplicar el aumento de la lente objetiva por el aumento de la lente ocular. Los microscopios utilizados en el laboratorio médico generalmente aumenta 50 a 1000 veces las imágenes.

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2. TORNILLO MICROMÉTRICO. Tornillo de enfoque fino. Cuenta con un desplazamiento muy lento. Permite enfocar después del ajuste aproximado obtenido con el tornillo de enfoque rápido.
3. TORNILLO DE CARRO MÓVIL. Sirven para desplazar la laminilla sobre la platina. Un tornillo para desplazar hacia atrás a un tornillo para desplazar de izquierda a derecha. MANEJO DEL MICROSCOPIO El esfuerzo excesivo y la fatiga deben evitarse en la observación microscópica. Esto se consigue atendiendo a los siguientes hábitos:
4. El banco y la mesa deben estar a una altura que le permita al observador el uso del microscopio en posición vertical.
5. Encender la fuente de iluminación.
6. Montar la preparación que se va a observar
7. Separar lo binoculares. En los microscopios binoculares se ajusta la separación interpupilar y se adapta a cada conformación. Enfoque entre el ojo izquierdo y derecho. Los dos tubos porta oculares son susceptibles de ajustarse. Esto se logra tratando de enfocar la imagen, con el tornillo macrométrico y micrométrico, con el lente objetivo de menor aumento, si la imagen ni es clara subir o bajar el ocular, mediante el movimiento que rodea al tubo porta ocular, hasta que se vea nítido y el microscopio que de ajustado a su propia visión binocular.
8. Enfoque de imágenes. Para enfocar con cualquier objetivo, pero especialmente con el seco fuerte 40x y con el de inmersión 100x deberá acercarse el objetivo a la preparación observada del lado para controlar el descenso hasta que la lente frontal de dicho objetivo que de dentro de la distancia focal. Solo entonces se deberá mirar por el ocular alejando lentamente el objetivo hasta el enfoque correcto, que se afinará con movimiento cuidadosos del tornillo de enfoque lento enfoque con el objetivo de inmersión 100x. Colocar la laminilla perfectamente seca agregar una gota de aceite de inmersión sobre la parte a examinar. Bajar el objetivo 100x para que quede en contacto con el aceite lo

DOCENCIA MANUAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA I Código Fecha de elaboración o revisión Versión Página SGC-FESZ-MC-ML03 29/ 09 /2021 1 6 / 160 más cerca posible sin llegar a romperla OBSERVACIÓN DE LADO para controlar del descenso. Observa en el ocular, mover lentamente el tornillo micrométrico hasta que se vea la imagen.

6. Cambio de objetivos. Los microscopios modernos son fabricados de tal manera que se puede pasar de un objetivo a otro para ver el mismo objeto más grande. El enfoque para la nitidez de la imagen queda casi hecho.
7. Al terminar sus observaciones los alumnos deberán limpiar nuevamente los objetivos y las preparaciones. OBSERVACIÓN CON EL MICROSCOPIO A) ASEGURARSE de las características del preparado que va a observar, es decir que órgano, tejido, o bacteria se encuentra montado en la laminilla. B) Limpie la preparación, con cuidado no ejerciendo mucha fuerza sobre ella, con trapo o franela que deberá siempre traer. Si es necesario use xilol para quitar el aceite de una observación anterior, o la grasa de los dedos, en este punto es importante el asesoramiento por su profesor de laboratorio. C) Antes de colocar su preparación sobre la platina del microscopio, véase contra la luz a simple vista. Existen dos motivos para ello, en primer lugar, el cubreobjetos puedes estar cubierto de polvo, sucio o cubierto de aceite endurecido. D) El ocular y las lentes objetivas deben estar limpias la limpieza de las mismas se hará usando solo papel para este propósito, (Lens cleaning paper de kodak). Limpie con un fragmente de este papel la lente del ocular, no extraer el ocular, limpie la lente de los objetivos. E) Seleccione un campo o campos apropiados y previa observación 5x, 10x obsérvese a 40x.

DOCENCIA MANUAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA I Código Fecha de elaboración o revisión Versión Página SGC-FESZ-MC-ML03 29/ 09 /2021 1 8 / 160 SERVICIOS: ● Luz DESARROLLO:

1. Las preparaciones proporcionadas enfocarlas con los diferentes objetivos (5x, 10x, 40x y 100x).
2. Efectuar esquemas de los diferentes tipos de microscopios que existen como también las preparaciones que se proporcionaron en los diferentes objetivos. CUESTIONARIO:

1. ¿Mencione 3 microscopistas importantes en la evolución del microscopio y su obra?
2. ¿Cuál es la aplicación clínica del microscopio?
3. ¿Menciones 5 factores que dañan al microscopio y 5 cuidados?
4. ¿Mencione 5 tipos de microscopio y su funcionamiento?

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5. ¿Qué significa microscopio simple y compuesto?
6. ¿Qué es poder resolución?
7. Defina distancia frontal mínima o útil.
8. Señale las partes del microscopio

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Tinciones Simples.

OBJETIVOS:

o Conocer diversas técnicas de coloración o Observación de preparaciones a diferentes objetivos o Conocer la forma y estructura de una bacteria o Aprender a realizar un frotis con tinción en una bacteria INTRODUCCIÓN: Los colorantes se combinan químicamente con el protoplasma bacteriano: si la célula no ha muerto, el proceso mismo de la tinción la mata. El método, por consiguiente, es bastante severo y pueden producir artefactos. Los colorantes más comúnmente usados son las sales. Los básicos consisten en un catión coloreado, unido a un anión incoloro, (ejemplo, clorhidrato de azul de metileno). Los ácidos constituyen exactamente lo contrario, (ejemplo, eosinato de sodio). Las células bacterianas son ricas en ácidos nucleicos, los cuales portan cargas negativas en forma de grupos fosfato, éstos se combinan con los colorantes básicos cargados positivamente, lo cual les hace ser de los más usados en citología bacteriana. Los colorantes ácidos no tiñen a la célula bacteriana y, por lo tanto, pueden ser usados para impartir al fondo un color de contraste. Los colorantes básicos tiñen las células bacterianas uniformemente, a menos que previamente sea destruido el RNA del citoplasma. Sin embargo se pueden usar técnicas especiales para diferenciar flagelos, cápsulas, paredes celulares, membranas celulares, gránulos, núcleos y esporas, como se podrá observar en prácticas más adelante.

DOCENCIA MANUAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA I Código Fecha de elaboración o revisión Versión Página SGC-FESZ-MC-ML03 29/ 09 /2021 1 12 / 160 Para observar los microorganismos al microscopio empleamos técnicas de coloración para observarlos mejor o hacer estudios más detallados de los mismos. Las técnicas de coloración las podemos dividir de una manera general en dos grupos principales, que son: a) Técnicas de coloración simples. b) Las técnicas de coloración especial o diferentes. TÉCNICAS DE COLORACIÓN SIMPLES: S e da el nombre de técnica de coloración simple a aquellas en donde se emplea un solo colorante para teñir, ejemplo azul de metileno, safranina, verde de malaquita, etc. TÉCNICAS DE COLORACIÓN ESPECIAL: Se da el nombre de tecnica de coloracion especial o compuesta en las que se usan combinaciones de dos o más colorantes, ejemplo Gram, Ziehl-Neelsen, Giemsa, etc. MATERIALES: ● Portaobjetos ● Mechero ● Asa con porta-asa ● Microscopio ● Colorantes: Azul de metileno, KOH al 10%, Verde de malaquita ● Cultivos de: Saccharomyces cerevisiae, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans. SERVICIOS: ● Gas ● Agua corriente ● Luz DESARROLLO:

1. Colocar una gota de agua sobre un portaobjetos limpio, con el asa se toma una muestra del cultivo de una de las cepas.
2. Esta muestra se coloca sobre el portaobjetos, emulsionar sobre la gota de agua.
3. Fijar el calor.

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4. ¿Qué ventajas se tienen en una preparación entre porta y cubreobjetos y que desventajas?
5. ¿En qué consiste un colorante básico y un colorante ácido?
6. ¿Cuál es la importancia de las técnicas de coloración?
7. Enuncie tres bacilos patógenos para el humano
8. Enuncia los componentes de toda su estructura.

DOCENCIA MANUAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA I Código Fecha de elaboración o revisión Versión Página SGC-FESZ-MC-ML03 29/ 09 /2021 1 15 / 160 BIBLIOGRAFÍA: · Jawetz, J.E., MicrobiologÍa Médica. McGraw-Hill Interamericana Editores. México

· Mac Faddin, Jean F., Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica, Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires; México 2003 · Sherris, Microbiología médica McGraw-Hill Interamericana Editores. México

· Tortora, Funke, Case, Introducción a la Microbiología. 9ª edición. Editorial Panamericana. México. 2013. · Esaú Ló pez L, Herná ndez Durá n M, Colin-Castro C. Las tinciones bá sicasenel laboratorio de microbiologia. Vol. 3, Nú m. 1 Enero-Marzo 2014 pp 10 - 18 (en línea) Disponible en:.http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141.