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Detección de anticuerpo irregulares
Tipo: Exámenes
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D E P A R T A M E N T O L A B O R A T O R I O B I O M É D I C O N A C I O N A L Y^ D E R E F E R E N C I A Instituto de Salud Pública Ministerio de Salud
DICIEMBRE, 2014 DOCUMENTOS TÉCNICOS PARA EL LABORATORIO CLÍNICO
AUTOR: TM. Mg. Cs. Andrés Aburto Almonacid. Encargado Área de Inmunohematología. Sección de Hematología e Inmunohematología. Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. REVISORES INSTITUTO DE SALUD PÚBLICA DE CHILE: TM. Mg. Mitzy Celis Morales. Jefe Sección Coordinación de Redes de Laboratorios. Subdepartamento Coordinación Externa. Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. Dra. Verónica Ramírez Muñoz. Jefe Subdepartamento Coordinación Externa. Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. REVISORES EXTERNOS: TM. Mg. Cs. Leonor Armanet Bernales. Directora Escuela de Tecnología Médica. Universidad de Chile. TM. Mg. Ped. Univ. Hugo Henríquez Bello. Director Docente Escuela de Tecnología Médica. Universidad Mayor. TM. Guillermo Herrera Calderon. TM. Banco de Sangre Hospital Clínico de la Universidad Católica de Chile. Dr. Federico Liendo Palma. Jefe UMT/Banco de Sangre. Complejo Asistencial Barros Luco Trudeau. Dra. María Cristina Martínez Valenzuela. Directora Centro de Sangre Concepción. TM. Ramón Schifferli Salazar. TM. Encargado de Calificación Microbiológica e Inmunohematológica. Centro de Sangre y Tejidos de Valparaíso. TM. Carolina Villalobos Urbina. Jefe de Centro y Encargada de Calidad UMT/Banco de Sangre. Complejo Asistencial Barros Luco Trudeau. DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS 4 sospecha de crioaglutininas. Cuando se detecta la presencia de un aloanti- cuerpo, se debe determinar su especificidad me- diante la identificación y la consiguiente deducción de su significado clínico, empleando un enfoque sistemático descrito en el algoritmo (Anexo 2).
a) Abreviaciones: ACD: Ácido cítrico, citrato, dextrosa. CE: Comunidad Europea CI: Centrifugación Inmediata EDTA: Ácido Etilendiaminotetraacético. FDA: Food and Drug Administration GR: Glóbulos Rojos LISS: Solución de Baja Fuerza Iónica NISS: Solución Salina de fuerza iónica normal PA: Prueba Autóloga PBS: buffer fosfato salino pH 6.9 a 7. SAGH: Suero Antiglobulina Humana TAD: Test Antiglobulina Humana Directa TAI: Test Antiglobulina Humana Indirecta b) Definición de conceptos
a) Muestras Suero o plasma obtenido a partir de sangre total sin o con anticoagulante (EDTA, ACD), respectiva- mente, de acuerdo a las especificaciones del fabri- cante del método o reactivo que utiliza. El uso de plasma podría impedir la detección de anticuerpos irregulares que se revelan solamente por la presen- cia de complemento adherido a los eritrocitos. Para estudios automatizados se requiere plasma y en tests manuales es deseable el uso de suero. Las muestras para estudio deben ser almacenadas a 4°C y las prue- bas deben ser realizadas en el menor tiempo posible, no excediendo las 72 horas desde su obtención. b) Reactivos
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. 5 DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. 7 f) Informe de resultados La denominación recomendada para el informe del resultado de este estudio es:
(según corresponda al paciente o donante estudiado). En caso de ser positivo, se recomienda registrar las alternativas posibles de especificidades de los anticuerpos detectados de acuerdo al panel utiliza- do. Se adjunta en Anexo 4, propuesta de registro de resultados. II. IDENTIFICACIÓN BÁSICA DE ANTICUER- POS IRREGULARES a) Muestras La identificación de anticuerpos irregulares debe realizarse con muestras sanguíneas con las mismas características definidas en este documento para la Detección de Anticuerpos Irregulares, en su punto I.a). Para el estudio de mezclas de anticuerpos complejos o múltiples, es fundamental disponer necesariamente de los glóbulos rojos de la muestra para realizar estu- dios de fenotipificación, autocontrol o TAD. La solicitud de examen que acompaña a la mues- tra debe incluir al menos la identificación comple- ta del paciente (nombre con dos apellidos), fecha, procedencia, edad, sexo, pertenencia a alguna et- nia, historial médico con especial énfasis en his- toria transfusional reciente, embarazos, patologías asociadas, consumo de algún medicamento, etc., lo que será de utilidad en el proceso de identificación de anticuerpos e interpretación de resultados. b) Reactivos
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS 8 f) Las células panel no deben utilizarse más allá de la fecha de expiración indicada por el fabricante. g) Cada laboratorio de acuerdo a su realidad (frecuencia de anticuerpos irregulares, ca- racterísticas étnicas de la población que atiende, entre otras), debe definir al mo- mento de su compra, características espe- ciales del panel a utilizar.
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS 10 Cel Rh MNS Kell P Lewis Duffy Kidd Cel Resultado D C E c e M N S s K k P1 Lea^ Leb^ Fya^ Fyb^ Jka^ Jkb^ TA 37C AHG CC 1 R 1 R 1 + + 0 0 + + 0 0 + 0 + + 0 + + + 0 + 1 0 ü 2 R 1 R 1 + + 0 0 + + + + 0 0 + + 0 0 0 0 + 0 2 2+ 3 R 2 R 2 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + + 3 0 ü 4 r’r 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 4 2+ 5 r’’r 0 0 + + + 0 + + + 0 + + 0 + 0 + 0 + 5 2+ 6 rr 0 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + 0 0 + 6 2+ 7 rr 0 0 0 + + + + + + 0 + + 0 + 0 + + 0 7 2+ 8 R 0 r + 0 0 + + 0 + 0 0 0 + + 0 0 0 0 0 + 8 0 ü 9 rr 0 0 0 + + + + + + + 0 0 + 0 + 0 + + 9 2+ 10 rr 0 0 0 + + + 0 0 + + + + 0 0 0 + + 0 10 0 ü 11 R 1 R 1 + + 0 0 + + + 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + 11 0 ü PA PA 3.- Proceda a comparar el patrón de reacciones (positivas y negativas) de su columna de re- sultados con las columnas para la especifici- dad S y K. El patrón de reacción en esta etapa permite descartar la especificidad K, ya que la célula 10 positiva para Kell presenta reacción negativa. 4.- La especificidad probable del anticuerpo es anti-S, lo cual se debe demostrar por la au- sencia del antígeno S en el fenotipo de los globulos rojos. 5.- Cuando no es posible identificar los anti- cuerpos en una muestra a través del panel básico, se deben utilizar técnicas adiciona- les (fenotipo eritrocitario, panel enzimático, elución-adsorción) o derivar a laboratorio de Referencia para completar estudio. f.- Informe de resultados La denominación recomendada es: IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRRE- GULARES: anti-D, anti-K, anti-Fyb (según corresponda al paciente o donante estudiado). Aspectos a considerar en la identificación de anticuerpos
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. 11 DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS no sean omitidos. Anticuerpos múltiples sólo se pueden confirmar por la elección de las células panel negativas para la especificidad reconoci- da, pero positivas para otros antígenos capaces de producir anticuerpos clínicamente significa- tivos. El conocimiento de los fenotipos del pa- ciente puede ayudar en la selección de células para el proceso de identificación y exclusión.
a) Control de Calidad Interno: Seguir los procedimientos de control de calidad recomendados por los fabricantes de reactivos y equi- pos. Cada laboratorio debe realizar control de calidad.
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. 13 DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS Solución salina de baja fuerza iónica (LISS) Aspecto; sin turbidez, ni partículas. No hemoli- zar, ni causar aglutinación de las células. El LISS se puede utilizar de dos maneras: sus- pendiendo los glóbulos rojos de prueba en LISS (1,5 - 2%) o agregando un volumen igual de la so- lución de LISS al suero y utilizando glóbulos rojos suspendidos en salino (3%). Las células suspendi- das en LISS no se deben conservar más de 24 horas para ser usadas. b) Control de Calidad Externo: Los Centros de Sangre, Unidades de Medicina Transfusional, Bancos de Sangre y Laboratorios Clínicos del país que realizan esta determinación deben participar en algún programa de evaluación externa de la calidad, para que en conjunto con el control de calidad interno, se asegure la calidad de la detección e identificación de anticuerpos irregu- lares eritrocitarios.
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Características de los anticuerpos irregulares de significancia clínica y sus frecuencias en donantes y pacientes en dos Servicios de Sangre chilenos durante los años 2011-2013. Reactividad Asociado a Frecuencias Sistema Sanguíneo Anticuerpo^ 4°C^ 22°C^ 37°C^ AGH^ EHRN^ RHT^ Donantes^1 n % Pacientes^2 n % MNS Anti-M Anti-N Anti-S Anti-s Anti-U Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Raro Raro Mayoría Mayoría Mayoría Raro No Sí Sí Sí Raro Raro Sí Sí Sí 27 4 4 1
13 1 10
P1PK Anti-P1 Mayoría Mayoría No Raro 2 0.6 2 0. Rh Anti-D Anti-C Anti-E Anti-c Anti-e Algunos Algunos Algunos Algunos Algunos Algunos Algunos Algunos Algunos Algunos Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí 51 5 63 8
103 12 81 13 5
Lutheran Anti-Lu a Anti-Lub Mayoría Algunos Mayoría Mayoría Raro Leve No Sí 1 3
4 1. Kell Anti-K Anti-k Anti-Kpa Anti-Kpb Anti-Jsa Anti-Jsb Algunos Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí 63 18.5 63 2
Lewis Anti-Le a Anti-Leb Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría Mayoría No No Raro No 83 7
42 2
Duffy Anti-Fya Anti-Fyb Mayoría Mayoría Sí Sí Sí Sí 11 1
8 1
Kidd Anti-Jk a Anti-Jkb Mayoría Mayoría Sí Sí Sí Sí 6 1.8 13 3
Diego Anti-Di a Anti-Di, Mayoría Mayoría Sí Sí Sí Sí Yt Anti-Yta Anti-Ytb Mayoría Mayoría No No Sí No Xg Anti-Xga^ Algunos Mayoría No No Scianna Anti-Sc Anti-Sc Mayoría Mayoría No No No No Dombrock Anti-Doa Anti-Dob Mayoría Mayoría No No Sí Sí Colton Anti-Co a Anti-Cob Mayoría Mayoría Sí Sí Sí Sí TOTAL 340 100 378 100 Fuente: Manual Técnico AABB, 2011 (adaptado) 1 Datos obtenidos sobre un total de 142.812 donantes del Centro Metropolitano de Sangre y Tejidos, Santiago. 2 Datos obtenidos sobre un total de 45.584 pacientes del Hospital Guillermo Grant Benavente, Concepción.
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Intensidades de Reacción de acuerdo a las distintas técnicas de aglutinación. INTENSIDAD DE REACCIÓN AGLUTINACIÓN TUBO/MICROPLACA AGLUTINACIÓN EN COLUMNA (GEL Y ESFERAS DE VIDRIO) AGLUTINACIÓN MICROPLACA (FASE SÓLIDA) 4+ Botón único. Fondo claro. Sin células libres. Banda homogénea de aglutinados en la parte superior de la columna. La adherencia es fuerte, cubriendo por completo la monocapa. 3+ Varios aglutinados de gran tamaño. Fondo claro. Sin células libres. Banda superior de aglutinado y desplazamiento en la parte superior de la columna. El grado de adherencia es moderado a fuerte, ligera formación de células en el centro del pocillo. 2+ Muchos aglutinados de mediano tamaño. Fondo claro. Sin células libres. Aglutinados pequeños en la columna y a lo largo de la columna. El grado de adherencia es moderado, botón celular irregular con agujero. 1+ Numerosos aglutinados pequeños. Fondo turbio por GR libres. Algunos aglutinados pequeños en la columna. El grado de adherencia es ligero a pequeño, botón celular difuso. +/- Apenas la aglutinación es visible. Fondo turbio por GR libres. Escasos aglutinados de pequeño tamaño en la columna. No aplica. 0 Ausencia de aglutinación Banda de GR al fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados. No hay adherencia, botón celular central bien definido.
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública de Chile. 17 DE ANTICUERPOS IRREGULARES ERITROCITARIOS ANEXO 4 Elementos básicos de un registro recomendado para anotar los resultados de la detección de anticuerpos irregulares eritrocitarios Fecha:_______________ Tecnólogo Médico responsable:_________________ Identificación paciente/ donante Reacción Panel I (intensidad de cruces) Reacción Panel II (intensidad de cruces) PA (intensidad de cruces) Resultado Detección de Anticuerpos Interpretación (Características del o los Anticuerpos) Posibles especificidades involucradas CI 37ºC AGH CI 37ºC AGH CI 37ºC AGH Ejemplos de reacciones
Paciente XXXX 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Negativo Ausencia de anticuerpos Paciente XXXX 0 0 0 0 0 2+ 0 0 0 Positivo Aloanticuerpo Anti-c; Anti-E; anti-K….. Paciente XXXX 0 0 4+ 0 0 4+ 0 0 0 Positivo Aloanticuerpo Anti-D; …….. Paciente XXXX 2+ 0 0 2+ 0 0 2+ 0 0 Positivo Autoanticuerpo frío Paciente n…. Reactivo Lote N° de serie Marca Fecha vencimiento Panel celular Columna (soporte) AGH LISS Otro reactivo
