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Harcourt, Inc. Experimento 29 299
Sustancias separadas
11.2 (^) Frente solvente
Sustancia 2
Sustancia 1
Original Punto de muestra
Figura 29.1 • Ilustración de los cromatogramas antes y después de la elución.
Experimento
Cromatografía en columna y papel:
Separación de pigmentos vegetales
Fondo
La cromatografía es una técnica experimental ampliamente utilizada por la cual una mezcla de compuestos se puede separar en sus componentes individuales. Se explorarán dos tipos de experimentos de cromatografía. En cromatografía de columna, una mezcla de componentes disueltos en un disolvente se vierte sobre una columna de adsorbente sólido y se eluye con el mismo o un disolvente diferente. Esto es por lo tanto un sistema sólido- líquido; la fase estacionaria (el adsorbente) es sólida y la fase móvil (el eluyente) es líquida. En la cromatografía en papel, el papel adsorbe el agua de la atmósfera del cromatograma en desarrollo. (El agua está presente en el aire como vapor y puede suministrarse como un componente en la solución de elución). El agua es la fase estacionaria. El (otro) componente del disolvente de elución es la fase móvil y lleva consigo los componentes de la mezcla. Este es un sistema líquido-líquido.
La cromatografía en columna se usa más convenientemente para fines preparativos, cuando se trata de una cantidad relativamente grande de la mezcla y los componentes deben aislarse en miligramos o gramos de cantidades. La cromatografía en papel, por otro lado, se utiliza principalmente para fines analíticos. Las cantidades de microgramos o incluso picogramos se pueden separar mediante esta técnica, y se pueden caracterizar por su número de Rf. Este número es un índice de cuán lejos se movió un punto determinado en el papel.
𝑅𝑓 = 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑎𝑙 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑒𝑛 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑓𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒𝑠𝑑𝑒 𝑒𝑙 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑒𝑛 Por ejemplo, en la Fig. 29.1 los valores de Rf son los siguientes:
Rf (sustancia 1) = 3,1 cm / 11,2 cm = 0,28 y Rf (sustancia 2) = 8,5 cm / 11,2 cm = 0,
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Usando los valores de Rf, uno puede identificar los componentes de la mezcla con los componentes individuales. Los dos componentes principales del pigmento de la pasta de tomate son los pigmentos de caroteno (amarillo-naranja) y licopeno (rojo). Sus estructuras se detallan a continuación:
B-Caroteno
Los colores de estos pigmentos se deben a los numerosos dobles enlaces en su estructura. Cuando se agrega bromo a los enlaces dobles, los satura y el color cambia en consecuencia. En el experimento del “arco iris” del jugo de tomate, agregamos agua de bromo al jugo de tomate. La agitación lenta permite que el agua de bromo penetre más y más profundamente en el cilindro en el que se colocó el jugo de tomate. A medida que el bromo penetra, se saturarán cada vez más dobles enlaces. Por lo tanto, puede observar un cambio continuo, un "arco iris" de colores, comenzando con el color rojizo del tomate en la parte inferior del cilindro donde no se produjo ninguna reacción (ya que el bromo no llegó a la parte inferior). Se observarán colores más claros en la parte superior del cilindro, donde la mayoría de los dobles enlaces se han saturado.
Objetivos
1. Comparar la separación de componentes de una mezcla mediante dos técnicas diferentes. 2. 2. Para demostrar el efecto de bromación en pigmentos de las plantas de jugo de tomate.
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Figura 29. Retirar muestras con un tubo capilar.
Punteo
4. Coloque su papel cromatográfico en un área limpia (otro papel de filtro) para no contaminarlo. Use capilares separados para su extracto de pasta de tomate y para la solución de caroteno. Primero, aplique su capilar al pigmento extraído sumergiéndolo en la solución como se ilustra en la Fig. 29.3. Aplique el capilar ligeramente al papel cromatográfico tocando secuencialmente los puntos marcados con 2, 3 y 4. Asegúrese de aplicar solo puntos pequeños, de no más de 2 mm de diámetro, retirando rápidamente el capilar del papel cada vez que lo toque. (Ver Fig. 29.4.)
Figura 29. Localización.
Mientras permite que se sequen las manchas, use su segundo capilar para aplicar manchas de caroteno en los carriles 1 y 5. Regrese al primer capilar y aplique otro punto del extracto sobre los puntos de los carriles 3 y 4. Dejarlos secar (fig. 29.5). Finalmente, aplique un lugar más en la parte superior del carril 4. Deje secar las manchas. El extracto no utilizado en su cubilete debe cubrirse con papel de aluminio. Colóquelo en el cajón en la oscuridad para guardarlo para la segunda parte de su experimento.
Figura 29. Secado de manchas cromatográficas.
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Desarrollo del cromatograma en papel.
5. Curve el papel en un cilindro y engrape los bordes por encima de la línea de 2 cm, como se muestra en la Fig. 29.6.
Figura 29.6 • Grapado. Figura 29.7 • Desarrollo del cromatograma.
6. Vierta 20 ml del disolvente eluyente (éter de petróleo tolueno acetona en una proporción de 4515, suministrado por su instructor) en un vaso de precipitado de 600 ml. 7. Coloque el cromatograma grapado en el vaso de precipitados de 600 ml, las manchas se encuentran en el fondo cerca de la superficie del solvente pero no están cubiertas por él. Cubra el vaso con papel de aluminio (Fig. 29.7). Permita que el frente del solvente migre hasta 0.5–1 cm por debajo del borde del papel. Esto puede tomar desde 15 min. a 1 hr. Asegúrese de inspeccionar con frecuencia que el frente del solvente no pase por el borde del papel. Retire el cromatograma del vaso de precipitados cuando el frente del disolvente alcance 0.5-1 cm desde el borde; a continuación, vaya al paso 11.
Cromatografía de columna
8. Mientras espera que se desarrolle el cromatograma en papel (paso no. 7), puede realizar el experimento de cromatografía en columna. Tome una bureta de 25 ml. (Puede usar una columna cromatográfica, si está disponible, de 1,6 cm de diámetro y aproximadamente 13 cm de largo; vea la Fig. 29.8. Si usa la columna en lugar de la bureta, todas las cantidades subsiguientes a continuación deben duplicarse.)
Figura 29.8. Éter de petróleo añadido. Columna cromatográfica.
Mezcla de pigmentos aplicada aquí.
Columna de cromatografía
Mezcla que se separa en zonas coloreadas.
Tapón de lana de vidrio
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desvanecerán de nuevo con la exposición al aire. Mida la distancia del centro de los puntos desde el origen y calcule los valores de𝑅𝑓.
15. Registre los resultados de la cromatografía en papel en la Hoja de Informe.
Productos químicos y equipos
1. Los capilares del punto de fusión se abren en ambos extremos. 2. Bureta de 25mL o columna cromatográfica 3. Lana de vidrio 4. Papel de filtro Whatman nº1, 10 × 20 cm cortado a tamaño 5. Lámpara de calor (opcional) 6. Grapadora 7. Placa caliente (con o sin baño de agua) 8. Pasta de tomate 9. Óxido de aluminio (alúmina) 10. Éter de petróleo (b.p. 30 − 60℃) 11. Etanol al 95% 12. Tolueno 13. Acetona 14. 𝛽-Caroteno al 0,5% en éter de petróleo 15. Agua de bromo saturada 16. Cristales de yodo 17. Regla 18. Jarra de boca ancha
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NOMBRE SECCION FECHA
COMPAÑERO GRADO
Experimento 29
HOJA DE INFORMES
Cromatografía en papel
Muestra
Distancia desde el origen hasta el solvente frontal. ( cm) (a)
Distancia desde el origen hasta el centro del lugar(cm) (b)
(a)∕(b) Color 𝜷 - caroteno Carril 1
Carril 5
Extracto de tomate Carril 2 (a)
(b)
(c)
(d)
Carril 3 (a)
(b)
(c)
(d)
Carril 4 (a)
(b)
(c)
(d)
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INTEGRANTES:
HUAYTA CÁRDENAS, RUBÉN ALBINO
HUARANCCA QUISPE, IVAN ESTEBAN
