Protocolo para caracterización de respuesta inmune innata contra Malassezia furfur, Diapositivas de Análisis Complejo

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MALASSEZIA

FURFUR

INTEGRANTES ADELA AVILA FELICIDAD DIAS MICELA CADIMA BEATRIZ LASTRA DEYSI LLANOS FAVIOLA LOAYZA JIMENA MAMANI ZULMA MARCA

DISEÑO DE PROTOCOLO PARA LA CARACTERIZACIÓN

FUNCIONAL Y MOLECULAR DE LA

RESPUESTA INMUNE INNATA MEDIADA POR PMN-N

CONTRA MALASSEZIA FURFUR

ARTICULO ELABORADO:

Max Isaac Sarmiento Boada , Adriana Marcela Celis Ramírez, Augusto

Valderrama-Aguirre.

Instituto de Investigaciones Biomédicas, Departamento de Ciencias

Biológicas, Universidad de los Andes, Bogotá, Colombia

METODOLOGIA

• (^) Tipo de estudio: Construcción de un protocolo experimental, con base en un ejercicio de tipo revisión de alcance, sobre los aspectos metodológicos sobre la caracterización funcional y molecular de la respuesta inmune innata mediada a través del inflamosoma y los NETs por los PMN-N contra Malassezia furfur. Aunque el énfasis de las búsquedas se basó en aproximaciones experimentales con Malassezia spp.; en algunos casos donde los artículos para Malassezia eran limitados, se optó por añadir otros agentes infecciosos, preferiblemente levaduras
• (^) Estrategia de búsqueda y criterios de selección de artículos: La búsqueda de información se realizó en el mes de marzo de 2022. Se realizó una búsqueda en Pubmed, dado su carácter de base de datos especializada y curada.

• (^) Extracción y análisis de datos: La extracción de datos se manejó con Microsoft®-Excel identificando las siguientes variables para el caso de inflamosoma
• (^) Procedimiento operativo estándar; Los criterios utilizados para construir el protocolo aseguran que este pueda ser ejecutado en un laboratorio de investigación básica, tal como el laboratorio del grupo CeMop (Grupo de Investigación Celular y Molecular de Microorganismos Patógenos) del Departamento de Ciencias Biológicas en la Universidad de los Andes, en Bogotá DC (Colombia) y con una inversión mínima de recursos

Para determinar la cantidad de MOIs a usar, se tuvo en

cuenta que en los estudios de inflamosoma el rango de

concentración de Malassezzia es de 5 a 30 MOIs.

Por tal razón se opta por usar los MOIs de 0,1, 1, 10, 20, y 30

para ambos tipos de experimentos, inflamosoma y NETs.

Se opta por usar la cantidad de 5 x 105 PMNN por pozo, ya

que es la que se reporta con mayor frecuencia.

Para la identificación de moléculas asociadas a inflamosoma,

se realizará qRT- PCR usando la metodología y los primers

reportados por Li et al., 2022 en su estudio de inflamosoma

11 contra M. globosa.

Finalmente, se analizará la interacción de M. furfur con NETs

usando la técnica de inmunofluorescencia ya que es la más

ampliamente reportada.

DISCUSIÓN

• (^) Los resultados de búsqueda de este estudio evidencian la falta de información sobre el inflamosoma de PMN-N y NETs, tanto en M. furfur como en el género Malassezia en general. El propósito de este estudio es generar un protocolo que pueda ser empleado en un laboratorio de investigación utilizando recursos accesibles, como incubadora, shaker, medios de cultivo, lector de qRT-PCR, microscopio de fluorescencia, kit de Elisa, así como sus respectivos reactivos y materiales complementarios. Este protocolo podría ayudar a entender si M. furfur puede inducir una respuesta inmune distinta, tanto en activación de inflamosoma de PMN-N como en producción de NETs, dependiendo de su estado (hifal o levaduriforme).

IMPACTO DE LOS RESULTADOS