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Práctica realizada para el laboratorio de microbiologia II
Tipo: Monografías, Ensayos
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Práctica 4 “Género Streptococcus ” Introducción El género Streptococcus es un grupo formado por diversos cocos grampositivos que normalmente se disponen en parejas o en cadenas. La mayoría de las especies son anaerobios facultativos, y algunos crecen únicamente en una atmósfera enriquecida con dióxido de carbono. Sus exigencias nutricionales son complejas, y su aislamiento requiere el uso de medios enriquecidos con sangre de carnero (5-10%) o suero. Son capaces de fermentar carbohidratos, proceso que produce ácido láctico, y son catalasa-negativos, a diferencia de las especies del género Staphylococcus. (Murray, P. 2014) La temperatura requerida para su cultivo debe ser entre 37°C y 45°C, para su óptimo crecimiento necesitan medios enriquecidos, con tejido animal y sangre desfibrinada. Su morfología generalmente es esférica, con un diámetro de 0.5 a 1 mm, no tiene movilidad, no es formadora de esporas, pero si pueden formar cápsula. (Tortora 2012) La identificación clínica de los estreptococos está basada, en parte, en sus reacciones hemolíticas al agar sangre y a los grupos de Lancefield. Existen tres tipos de hemólisis: beta, alfa y gamma Los estreptococos beta hemolíticos son aquellos que degradan completamente los glóbulos rojos que rodean la colonia. Estas bacterias tienden a causar la mayoría de las enfermedades estreptocócicas. Se manifiesta de mejor manera en un ambiente que contenga entre 5 y 20% de CO Los estreptococos alfa hemolíticos causan una hemólisis “verdosa” o parcial, alrededor de la colonia, asociada con la reducción de hemoglobina en los glóbulos rojos. Se desempeña mejor en un ambiente que contenga entre 5 y 20% de CO2 hy un pH neutro entre 6.8 y 7.5. Gamma hemólisis es un término que, en ocasiones, se utiliza para colonias no hemolíticas. En muchos casos, el valor de distinguir entre alfa y gamma hemólisis es limitado; muchas especies se pueden describir sencillamente como "betas no hemolíticas". La hemólisis no es completamente confiable para identificar las especies. Las especies y la edad de los glóbulos rojos, otras propiedades del medio y las condiciones del cultivo también afectan la hemólisis. Algunas especies pueden ser betas hemolíticas en ciertas circunstancias, pero alfa hemolíticas o no hemolíticas, en otras. (Koneman 2003)
Prueba de la optoquina Fundamento La prueba de la Optoquina (P) se utiliza para la diferenciación de Streptococcus pneumoniae (sensible) de otros estreptococos α- hemolíticos (Murray, 2014). La optoquina (clorhidrato de etilhidrocupreina) se utiliza en una solución acuosa de 1/4000 para impregnar los discos quedando con una concentración de 5μg (MacFaddin, 2003).
Streptococcus pneumoniae y Streptococcus grupo viridans son cocos Gram positivos que presentan colonias alfa hemolíticas cuando crecen en medios sólidos suplementados con 5 - 10 % de sangre de carnero (Murray,2014). La optoquina inhibe el desarrollo de Streptococcus pneumoniae esto se debe a que los Streptococcus se lisan debido a la optoquina mientras que otros estreptococos no son inhibidos o presentan una zona pequeña de inhibición alrededor del disco (MacFaddin, 2003). Composición: Colonia pura Optoquina (5μg) Agar sangre de borrego (5- 10 %) Interpretación de resultados: Sensible : halo de inhibición del desarrollo microbiano, de diámetro mayor o igual a 15 mm es presuntivo para Streptococcus pneumoniae. Resistente: crecimiento no inhibido alrededor del disco o menor a 1 5 mm. Prueba de bilis y esculina Fundamento La esculetina reacciona con una sal de hierro (III) para formar un complejo fenólico de color castaño oscuro o negro. El citrato férrico o el citrato férrico y de amonio (50/50) es incorporado en el medio como indicador de la hidrolisis de esculina a esculetina. La hidolisis de la esculina es un proceso que ocurre en dos fases: La cepa bacteriana debe crecer en presencia de una cierta concentración de bilis (40% en el caso de los enterococos) y producir esculinasa para hidrolizar la esculina (MacFaddin, 2003). La concentración de bilis es fundamental, ya que existen estreptococos del grupo Viridans que son capaces de crecer a concentraciones menores de bilis (Sejía, 2002). Composición Peptona de caseína…17g Peptona de carne…3g Extracto de levadura…5g Esculina…1g Bilis…10g Cloruro de Sodio…5g Citrato de sodio…1g Citrato de hierro (III)…0.5g Azida sódico…0.25g Agar…15g Agua de desionizada…1000 ml pH 7.1 ± 0. Interpretación de resultados
Resistente: Ninguna zona alrededor del disco inhibido; crecimiento hasta el disco y alrededor de él. Estreptococos -hemolíticos que presuntivamente no son del grupo A por prueba de la bacitracina (MacFaddin, 2003). Prueba CAMP La -hemolisina estafilocócica (-lisina) es una proteína de estreptococos que en eritrocitos ovinos (oveja) o bovinos (buey) produce un fenómeno lítico denominado reacción de CAMP (por las iníciales de sus autores originales) con lo cual determina la capacidad de microorganismos como los estreptococos de provocar un agente lítico que se manifiesta como una zona hemolítica. Esto se debe a que la -hemolisina actúa de manera sinérgica en medio agar sangre. Por consiguiente, se pueden diferenciar e identificar cepas de Streptococcus agalactie de otras especies de Streptococcus cuando se incuban en aerobiosis o en condiciones reducidas de oxígeno (MacFaddin, 2003). El sinergismo es una acción coordinada o correlacionada por dos o más microorganismos; el sinergista (factor CAMP), es un adyuvante de la acción de otro microorganismo (MacFaddin, 2003). Composición Se utiliza sangre citrada o desfibrinada de oveja o buey al 5% ya que no reacciona con otro tipo de sangre por ser microorganismos exigentes. Cepa pura. Probar dos cepas de control de calidad. Interpretación de resultados Positivo: Producción de una zona hemolizada en toda la profundidad del agar, en forma de punta de flecha, zona clara (hemolisis sinérgica) rodeada por una zona más grande oscurecida (-lisina estafilocócica alteró, pero no produjo la lisis de eritrocitos). Streptococcus agalactiae Negativo: Streptococcus pyogenes Bibliografía: Koneman, E. etc. al. (2003). “Diagnóstico microbiológico” Argentina, 5ª edición. Editorial Médica Panamericana. pp 641. Tortora. G. (2017) “Introducción a la microbiología” Buenos Aires, 9ª edición. Editorial Médica Panamericana. pp 332 Murray P.R, Rosenthal K.S, Pfaller M.A. (2014). Microbiologia Médica. 7ma (ed). Barcelona, España: Elsevier. MacFaddin J.F. (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. 3ra (ed). Buenos Aires, Argentina: Panamericana. Sejía V. (2002). COCOS GRAM POSITIVOS: Aspectos prácticos. [PDF]. Recuperado de: http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2019.pdf Integrantes Maya Calderón Irene Joceline Martínez Rodríguez Yunuen Ivonne Hernández Gaona Andrea