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Informe de Bioquímica, tema de Electroforesis
Tipo: Monografías, Ensayos
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La electroforesis es una técnica de separación de moléculas cargadas por migración en un campo eléctrico. Las moléculas se separan en función de su carga eléctrica, desplazándose al electrodo de carga contraria y a mayor velocidad cuanto mayor es la carga de la molécula. Cada molécula se desplaza en el campo eléctrico alcanzando una velocidad constante. En el estado estacionario, la fuerza impulsora (fuerza del campo eléctrico) se equilibra con la resistencia al avance (fuerza de fricción hidrodinámica) en el medio en que se desplaza. Se define la movilidad electroforética como la velocidad de desplazamiento por unidad de campo eléctrico. En unas condiciones determinadas de electroforesis, la diferente movilidad de cada molécula define su comportamiento y separación en el espacio. Diferentes moléculas tendrán diferente movilidad electroforética en un medio determinado.(Alcalá, 2013)
Los geles de poliacrilamida son el resultado de la polimerización química de una mezcla de acrilamida y bisacrilamida. Controlando la concentración de ambas obtenemos geles de diferente grado de reticulación (diferente diámetro de poro). (Alcalá, 2013)
Uno de los métodos de electroforesis más comúnmente aplicado para proteínas es el que emplea geles de poliacrilamida (PAGE = polyacrylamide gel electrophoresis) en presencia del detergente aniónico dodecilsulfato sódico (SDS). Esta técnica es conocida como SDS-PAGE. Para ello se prepara un gel en placa vertical.(Alcalá, 2013)
En la electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS, la separación de proteínas se hace en función de la masa molecular. Tanto es así que la representación del logaritmo de la masa molecular frente a la distancia migrada obedece a una línea recta para gran número de proteínas. Para que esta dependencia sea correcta, es preciso romper los puentes disulfuro intra- e intercatenarios, para lo cual es frecuente añadir durante la preparación de la muestra un agente reductor, generalmente 2- mercaptoetanol. De este modo, la masa molecular observada corresponde a la de cada subunidad de una proteína, no a la proteína completa, al existir una relación lineal(Alcalá, 2013)
Proceso de Electroforesis.
- Preparación de los geles: - Añadimos agua destilada, el tampón del gel separador con un ph de 8.8 la mezcla de acrilamida/ bis-acrilamida al 30% y el sds que nos va a permitir notar a las proteínas de una relación carga masa constante la polimerización del gel se inicia añadiendo persulfato de amonio un generador de radicales libres y por último el reactivo de TEMED que completa la polimerización la mezcla debe agitarse bien para una completa homogeneización una vez homogénea se añade al espacio que queda entre los cristales la mezcla debe ocupar una tercera parte del volumen total en la parte superior se la añade una fina capa de agua con el fin de evitar el contacto de la mezcla con el aire favoreciendo asi su polimerización al poco tiempo nuestra mezcla de gel separador habrá polimerizado completamente en este momento podemos retirar el agua que nos ayudó. - Después hacemos el gel concentrador de la misma forma que se preparó el gel separador las proporciones de los componentes cambian agua, acrilamida/ bis-acrilamida al 30%, SDS al 10% para generar un tamaño de poro mayor el ph también se reduce a 6.8 el gel concentrador se sitúa en la parte superior y su función es la de concentrar las proteínas antes de su separación finalmente colocamos el peine esta pequeña pieza de plástico permite dar forma los pocillos en donde cargaremos las muestras, de esta forma el sistema discontinuo está terminado con el gel concentrador en la parte superior y el separador en la parte inferior el gel se sitúa en una serie de soportes que nos permite fijarlo a la cubeta de electroforesis el soporte central contiene los electrodos que nos permitirán suministrar corriente eléctrica en el sistema una vez en contacto con el tampón de electroforesis. Una vez en la cubeta se añade el tampón de electroforesis de tal forma que cubran la totalidad del gel el peine se retira para acceder a los pocillos y cargar las muestras. Se le coloca una guía que nos va a permitir identificar, una vez situada en la parte superior la posición de los pocillos. -Aplicación de las muestras:
la estructura tisular, así como su relación con la textura y calidad de la carne, tanto de animales terrestres como marinos. También es una herramienta que puede ayudar a evidenciar la presencia de proteínas potencialmente alérgenas.ure la calidad de los reactivos y el estado de las so
6. BIBLIOGRAFÍA. - https://youtu.be/_8xftsCIwYo - https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Electroforesis - https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-express ion-and-regulation/biotechnology/a/gel-electrophoresis - Muñoz, M. (n.d.). Informe de prácticas INFORME DE PRÁCTICAS Biotecnología. Retrieved from website: https://facultadbiologia.usal.es/documentos/practicasempr/M emoriasPracEmpresas/CSIC_CIC_DrGSarmiento_08_MonicaBe nito.pdf - Alcalá, U. (2013). Electroforesis SDS. 1–5. http://www3.uah.es/jcdiez/biologia sanitaria/metodos biologia molecular/practicas.pdf - karenvargas141. (2019, November). Informe electroforesis. Retrieved February 16, 2021, from Slideshare.net website: https://es.slideshare.net/karenvargas141/informe-electrofore sis - http://peces.ens.uabc.mx/bcym/practica/PRACTICA13.html - https://bvs.ins.gob.pe/insprint/SALUD_PUBLICA/NOR_TEC/ .pdf - By Mauricio Rivera Container: Scribd Year: 2021 URL: https://es.scribd.com/doc/38342154/Informe-Electroforesis-
