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Universidad Arturo Michelena
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Patología Médica
Carrera de Citotecnología
Inmunofluorescenci
a
Profesor: Estudiantes:
Davide Mobili Yackeline Hallak C.I. 26.580.
Jenny Ramírez C.I. 27.095.
Angy Torrealba C.I. 20.952.
Maira Carrero C.I.
Jesús Apostol C.I. 24.457.
Oshin Estraño C.I.26.642.
Mariajose Valera C.I. 28.275.
San Diego, Junio de 2019
Anticuerpo: Se trata de moléculas sintetizadas por linfocitos B y capaces de reconocer y
unirse con alta afinidad a otras moléculas. Las inmunoglobulinas se encuentran formadas
por 4 cadenas polipeptídicas: 2 cadenas pesadas (55 000 Dalton) y 2 cadenas livianas (
000 Dalton). Cada cadena posee regiones variables que permiten el reconocimiento
específico de antígenos y otra región Constante.
Antígeno: Un antígeno es cualquier sustancia capaz de interaccionar con el sistema
inmunológico y susceptible de iniciar una respuesta. El antígeno es reconocido por la región
variable del anticuerpo. La parte del antígeno reconocida se denomina epitope.
Es una técnica que se utiliza para la detección de estructuras subcelulares que nos permiten
estudiarlas con la utilización de anticuerpos acoplados a fluoróforos.
Una molécula que fluoresce puede ser fijada en el anticuerpo para ser detectada usando luz UV.
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La inmunofluorescencia, como técnica de tinción, puede ser utilizada en cortes de tejidos,
secreciones que contengan células en suspensión (por ejemplo, esputo) con la finalidad de
analizar la presencia y distribución de proteínas, glúcidos y moléculas pequeñas tanto de
origen biológico como no.
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Sin Estímulo
Con Estímulo
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Fundamento:
Su fundamento radica en la capacidad que muestran algunos elementos o compuestos
fluorescentes, denominados fluorocromos, en fijarse a los anticuerpos mediante un enlace
químico estable que no puede romperse durante el curso de la reacción inmunológica.
Aplicaciones:
- (^) Las técnicas directas han sido adaptadas para el diagnóstico bacteriológico, viral, en
inmunopatología, en la investigación de depósitos de complemento o inmunoglobulinas o
complejos Ag-Ac sobre determinadas estructuras.
- Las técnicas indirectas se usan también ampliamente para diagnóstico indirecto en
múltiples campos y como técnicas cuantitativas en múltiples sistemas.
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La principal diferencia del Microscopio de Fluorescencia es que permite irradiar al
espécimen con la luz de excitación y separar la luz fluorescente emitida.
Microscopio de Fluorescencia:
Fue desarrollado en el Siglo 20 August Kohler, Carl Reichert y
Heinrich Lehman.
Partes del Microscopio de Fluorescencia:
- (^) Fuente luminosa.
- (^) Los filtros: Excitación, de barrera y espejos
dicroicos.
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Fijación:
Preservar la localización, composición y estructura del material biológico a analizar
manteniendo lo más fielmente posible a la situación que existe in vivo. Existen distintos métodos
de fijación de material biológico. Esto dependerá de distintos factores como: el tipo de
microscopia a utilizar, la estructura subcelular que se quiera detectar, entre otras. Los más
utilizados son el glutaraldehído, paraformaldehído y el metanol/acetona.
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Permeabilización:
Consiste en la producción de poros en las membranas celulares, lo que permite el ingreso de
los anticuerpos a la célula. Se utilizan generalmente detergentes no iónicos que solubilizan los
lípidos de la membrana produciendo de manera irreversible o reversible poros en la membrana.
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Tipos de inmunofluorecencia:
Existen fundamentalmente 2 técnicas de Inmunofluorescencia: Primaria o IFD
(Inmunofluorescencia Directa) y Secundaria o IFI (Inmunofluorescencia Indirecta).
Inmunofluorescencia Directa:
- (^) Consiste en el uso de un anticuerpo primario marcado con fluorocromo.
- (^) Este anticuerpo marcado se une al antígeno y se observa su fluorescencia al microscopio de
fluorescencia.
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Biopsia de piel en paciente con lupus
- (^) La muestra seleccionada donde se quiere
determinar el microorganismo, bacteria o
tejido se extiende en el portaobjeto.
- Se añade el anticuerpo, y tras ser lavado se
observa al microscopio de fluorescencia.
- (^) Permite la detección del antígeno
de interés en un solo paso.
- (^) Reducción de problemas.
- (^) Tiene como limitación producir un
anticuerpo marcado con fluorocromo
para cada anticuerpo necesario.
- (^) Menor sensibilidad.
- (^) El anticuerpo puede perder afinidad.
Ventajas
Desventajas
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Limitaciones de la Inmunofluorescencia:
- (^) Alto costo de los equipos y reactivos.
- (^) Personal estrictamente especializado.
- (^) Fotoblanqueo o perdida de la actividad fluorescente.
- Imposibilidad de identificar Ag intracelulares in vivo.
- (^) Unión inespecífica de las proteínas.
- (^) Normas de seguridad estrictas.
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