INMUNOFLUORESCENCIA
Profesora: Priscila Mamani Zapana
Carlos Enrique Namó Asencio 18100049
T. EXPERIMENTALES
INMUNOLOGIA
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Inmunofluorescencia directa e indirecta, Guías, Proyectos, Investigaciones de Inmunología
se describe los origenes, asi como ambas tecnicas propias del ensayo, teniendo en cuenta las ventajas y desventajas una vez realizada o por realizar, concluyendo con ejemplos ilustrativos de la tecnica mencionada
Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones
2019/2020
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INMUNOFLUORESCENCIA
Profesora: Priscila Mamani Zapana
Carlos Enrique Namó Asencio 18100049
T. EXPERIMENTALES
INMUNOLOGIA
ANTECEDENTES
II GUERRA MUNDIAL
- Fue desarrollada como un método rápido para la
detección de antígeno “in situ”, como tejidos y células
infectadas
- considerada una prueba de unión primaria
TECNOLOGIA
Avances de la inmunología y la química fueron decisivos
en el desarrollo de esta técnica.
- Las moléculas de anticuerpo se
conjugan a los fluorocromos y al
contacto con su antígeno
homologo se produce la reacción.
Fundamentos básicos
Fluoróforos más utilizados
Los derivados de la fluorescencia
Isocianato de fluorescencia
Isotiocianato de fluorescencia
Derivados de la rodamina. Isocianato e isotiocianato
Cloruro de 1 dimetil-amino-aftaleno-5-sulfónico
Entre otros colorantes, que no han sido ampliamente aceptados por no estar
disponibles comercialmente y ofrecer un color pobre
las sondas marcadas con el fluorocromo interactúa directamente con el antígeno presente en la
muestra, poniéndolo en evidencia.
Métodos para esta técnica
Indirecto
Directo
Son aquellas en las que la sonda marcada sirve para detectar a los anticuerpos que, a su vez, se
han unido al antígeno
No es necesario conjugar inmunoglobulinas especificas contra
distintos antígenos.
Tiene una alta sensibilidad a comparación del ensayo ELISA.
A comparación con el MAT, no requiere el mantenimiento de un
gran cepario
El clínico puede definir el diagnostico de una enfermedad con
síntomas tan inespecíficos
Ventajoso en pruebas que detectan IgM
Ventajas
Técnicas revolucionarias
Observación a gran detalle de la morfología de células vivas, marcadas con diversas sondas
fluorescentes
Citometría de flujo
Microscopía Confocal
Son aquellas en las que la sonda marcada sirve para detectar a los anticuerpos que, a su vez, se
han unido al antígeno
Actualmente el análisis de una suspensión de células vivas
marcadas con un fluorocromo se realiza mediante un
citómetro de flujo
Citometría de flujo
Procesamiento de Citometría de flujo
Imagen de dos dimensiones de
citometría de flujo (Dot – Plot)
Imagen en dos dimensiones de citometría de
flujo. Detalle de las subpoblaciones linfocitarias
definidas mediante inmunofluorescencia
Aplicaciones
En aspectos de Microbiología y Parasitología
Estudios de replicación, patogénesis y diagnostico
Secuencias de formación de antígenos
Identificación de colonias de micoplasmas obtenidos de cultivos
primarios
Esencialmente se usa en la detección de autoanticuerpos y
anticuerpos
Aplicaciones
El sustrato antigénico utilizado es una
suspensión de Toxoplasmosis gondii
Fluorescencia utilizando mas de un
fluorocromo