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Laboratorio de Medicina: Determinación de Glicemia, Guías, Proyectos, Investigaciones de Bioquímica

El procedimiento para determinar el nivel de glucosa en la sangre mediante un laboratorio químico. Se explica la importancia de mantener la glicemia estable, los tipos de diabetes mellitus y cómo se realiza el procedimiento de ensayo. Se incluyen instrucciones para el uso de un equipo de ensayo virtual.

Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones

2020/2021

Subido el 03/11/2021

camila-dominguez-rodriguez
camila-dominguez-rodriguez 🇵🇪

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bg1
LABORATORIO N° 7
CUANTIFICACIÓN DE GLICEMIA
1. Introducción
La glucosa es degradada por la vía glicolítica o almacenada como
glucógeno en el hígado, músculo y otros tejidos, siendo exclusiva fuente de
energía para el cerebro (salvo en ayuno de tres días que puede usar
cuerpos cetónicos) y los glóbulos rojos, de ahí la importancia de mantener
la glicemia entre ciertos límites que no afecten a esos tejidos. Esta
regulación la realizan órganos como el hígado y riñón, que liberan glucosa
en ayuno, o la conservan como glucógeno en el postprandial(hígado
principalmente); por hormonas hipoglicemiantes como la insulina que
actúa en el postprandial e hiperglicemiantes o antinsulínicas como el
glucagon, hormona de crecimiento, cortisol, catecolaminas, ACTH que son
hormonas del ayuno o del stress.
La hiperglicemia se observa principalmente en la Diabetes mellitus y la
hipoglicemia en diversas entidades como insulinoma, tratamiento con
insulina o hipoglicemiantes, recién nacidos ,etc.
La determinación de la glucosa sanguínea es el análisis bioquímico más
frecuente en el laboratorio clínico. Se puede realizar en condiciones
basales o ayunas de 8 horas, o en cualquier instante (al azar) , durante
una tolerancia a la glucosa o 2 horas después de los alimentos
(postprandial)
Indicaciones: Su indicación y su aplicación más importante es el
diagnóstico y evaluación de la diabetes mellitus (DM) en pacientes con
síntomas o pacientes con factores de riesgo de DM, o en programas de
despistaje de DM en la población general o en el riesgo quirúrgico.
Igualmente en neonatología en la evaluación metabólica del RN.
La diabetes mellitus afecta al 5 % de la población y aumenta con la edad.
Se reconocen cuatro tipos de acuerdo a la OMS:
DM tipo 1 por menor secreción de insulina que puede ser secundario a
problemas inmunitarios o ser idiopática. Afecta generalmente a niños
DM tipo 2: varía entre resistencia a la insulina predominante con
déficit relativo de insulina y defecto secretor de insulina predominante con
resistencia a la insulina. Es la más frecuente, afecta generalmente a
adultos
Otros: A. Defectos genéticos de la función de las células beta: MODY
1-6, DNA mitocondrial, subunidades de conducto de potasio sensible al
ATP B: Defectos genéticos en la acción de la insulina C: Defectos de
páncreas exocrino D: Endocrinopatías E: Fármacos F: Infecciones G:
Formas infrecuentes H: Otros síndromes genéticos.
DM gestacional.
2. Fundamento.
El esquema de reacción es el siguiente:
GOD
glucosa + O2 + H2 O --------ácido glucónico + H2O2
pf3
pf4
pf5

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¡Descarga Laboratorio de Medicina: Determinación de Glicemia y más Guías, Proyectos, Investigaciones en PDF de Bioquímica solo en Docsity!

LABORATORIO N° 7

CUANTIFICACIÓN DE GLICEMIA

  1. Introducción La glucosa es degradada por la vía glicolítica o almacenada como glucógeno en el hígado, músculo y otros tejidos, siendo exclusiva fuente de energía para el cerebro (salvo en ayuno de tres días que puede usar cuerpos cetónicos) y los glóbulos rojos, de ahí la importancia de mantener la glicemia entre ciertos límites que no afecten a esos tejidos. Esta regulación la realizan órganos como el hígado y riñón, que liberan glucosa en ayuno, o la conservan como glucógeno en el postprandial(hígado principalmente); por hormonas hipoglicemiantes como la insulina que actúa en el postprandial e hiperglicemiantes o antinsulínicas como el glucagon, hormona de crecimiento, cortisol, catecolaminas, ACTH que son hormonas del ayuno o del stress. La hiperglicemia se observa principalmente en la Diabetes mellitus y la hipoglicemia en diversas entidades como insulinoma, tratamiento con insulina o hipoglicemiantes, recién nacidos ,etc. La determinación de la glucosa sanguínea es el análisis bioquímico más frecuente en el laboratorio clínico. Se puede realizar en condiciones basales o ayunas de 8 horas, o en cualquier instante (al azar) , durante una tolerancia a la glucosa o 2 horas después de los alimentos (postprandial) Indicaciones: Su indicación y su aplicación más importante es el diagnóstico y evaluación de la diabetes mellitus (DM) en pacientes con síntomas o pacientes con factores de riesgo de DM, o en programas de despistaje de DM en la población general o en el riesgo quirúrgico. Igualmente en neonatología en la evaluación metabólica del RN. La diabetes mellitus afecta al 5 % de la población y aumenta con la edad. Se reconocen cuatro tipos de acuerdo a la OMS:
    • DM tipo 1 por menor secreción de insulina que puede ser secundario a problemas inmunitarios o ser idiopática. Afecta generalmente a niños
    • DM tipo 2: varía entre resistencia a la insulina predominante con déficit relativo de insulina y defecto secretor de insulina predominante con resistencia a la insulina. Es la más frecuente, afecta generalmente a adultos
    • Otros: A. Defectos genéticos de la función de las células beta: MODY 1 - 6, DNA mitocondrial, subunidades de conducto de potasio sensible al ATP B: Defectos genéticos en la acción de la insulina C: Defectos de páncreas exocrino D: Endocrinopatías E: Fármacos F: Infecciones G: Formas infrecuentes H: Otros síndromes genéticos.
    • DM gestacional.
  2. Fundamento. El esquema de reacción es el siguiente: GOD glucosa + O 2 + H 2 O --------ácido glucónico + H 2 O 2

POD

2 H 2 O 2 + 4-AF + 4-hidroxibenzoato ------quinonimina roja GOD: glucosa oxidasa POD: peroxidasa

  1. Muestra Suero. En ayunas de 8 horas (basal) o en cualquier momento (al azar) o muestras del test de tolerancia a la glucosa o después de dos horas de comida (postprandial)
  2. Reactivos. Materiales Estándar : solución de glucosa 100 mg/dl (1 g/l). Reactivo A: solución conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa (POD), 4 - aminofenazona (4-AF), buffer fosfatos pH 7,0 y 4 - hidroxibenzoato en las siguientes concentraciones: GOD (microbiana) ≥ 10 kU/l POD (rábano). ≥ 1 kU/l 4 - AF 0,5 mmol/l Fosfatos 100 mmol/l, pH 7, Hidroxibenzoato 12 mmol/l
  3. Procedimiento Blanco Standard Desconocido Estandar 10 ul Muestra 10 ul Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml Incubar 5 minutos a 37 ° en baño maría Luego leer a 505 nm en espectrofotómetro llevando a cero con el blanco
  4. Resultados Paciente 1 Absorbancia del Blanco: 0, Absorbancia del Estándar= 0, 250 Absorbancia del Desconocido= 0, 400 Cálculos: Factor= 100 mg/dl 0, Factor= Concentración de glucosa del paciente = 0,400 x factor Concentración de glucosa del paciente= mg/dl Paciente 2 Absorbancia del Desconocido= 0, 300 Concentración de glucosa del paciente:
  5. Interpretación Paciente 1: Paciente 2
  6. Valores de referencia  Una glicemia basal o en ayunas se considera normal de acuerdo al ADA de 70 a 99 mg/dl, en cambio la OMS señala de 70 a 110 mg/dl.

10)Pulse en Incubar (Incubate) para incubar el contenido de los tubos. La plataforma

agitará suavemente los tubos de manera uniforme, mezclando así su contenido a lo largo de la incubación.

11) Pulse en Ajustar (Set Up) en el espectrofotómetro para calentarlo y dejarlo listo

para las lecturas de las muestras.

  1. Arrastre el tubo 1 hasta el espectrofotómetro.

13) Pulse en Analizar (Analize) para analizar la muestra. Aparece un punto en la

pantalla que representa los valores de densidad óptica y concentración de glucosa en

la muestra. Estos valores también aparecen en los indicadores de densidad óptica

(Optical Density) y de glucosa (Glucose mg/deciliter).

14) Pulse Guardar Datos (Record Data) para mostrar los resultados en la pantalla;

el tubo se colocará automáticamente en el lavador de tubos de ensayo. Se analizarán las muestras en los tubos restantes siguiendo el mismo procedimiento.

15) Pulse en Gráfica de Glucosa Estándar (Graph Glucose Stándar) para que

aparezca la curva de glucosa estándar en la pantalla. Utilizarás esta gráfica en el

procedimiento 2

: Determinación de los Niveles de Glucosa Plasmática en ayunas. PROCEDIMIENTO

  1. Arrastre un tubo de ensayo hasta la ranura (1) de la unidad de incubación, los demás tubos se colocan automáticamente.
  2. Arrastre el tapón cuenta gotas del frasco de la muestra de sangre del primer paciente hasta el primer tubo de la unidad de incubación y añade tres gotas. Las otras gotas de cada una de las muestras se colocan automáticamente.

3) Arrastre el tapón cuentagotas del frasco de agua destilada (Deionized Water)

hasta el primer tubo de la unidad de incubación y añada cinco gotas en cada uno de los tubos.

  1. Arrastre el tapón cuentagotas del frasco de hidróxido de Bario hasta el primer tubo de la unidad de incubación y añada cinco gotas en cada uno de los tubos.
  2. Arrastre el tapón cuentagotas de heparina hasta el primer tubo de la unidad de incubación y añada una gota en cada uno de los tubos.

6) Pulse en Mezclar (Mix) para mezclar el contenido de los tubos.

7 ) Pulse en Centrifugar (Centrifugate) para centrifugar el contenido de los tubos,

Cuando haya finalizado el proceso de centrifugación, los tubos subirán automáticamente.

8) Pulse en Eliminar precipitado (Remove Pellet) para eliminar el precipitado que se

ha formado durante el proceso.

9) Arrastre el tapón cuentagotas del frasco del Reactivo enzimático de color (Enzime

Color Reagent) hasta el primer tubo de la unidad de incubación y añade cinco gotas

a cada uno de los tubos.

10) Pulse en Incubar (Incubate) para incubar el contenido de los tubos. La plataforma

agitará suavemente los tubos de manera uniforme, mezclando así su contenido a lo largo de la incubación.

11) Pulse en Ajustar (Set Up) en el espectrofotómetro para calentarlo y dejarlo listo

para las lecturas de las muestras.

12) Pulse en Gráfica de Glucosa Estándar (Graph Glucose Stándar) para que

aparezca en pantalla la curva de glucosa estándar obtenida en el procedimiento 1.

  1. Arrastre el tubo 1 hasta el espectrofotómetro.

14) Pulse en Analizar (Analize) para analizar la muestra. Aparece una línea

horizontal en el monitor para mostrar el valor de densidad (Optical Density) de la

muestra. Este valor también aparece en el indicador de densidad óptica).

  1. Arrastre la regla móvil (línea roja vertical en el extremo derecho del monitor) hasta el lugar donde se cruzan la línea amarilla horizontal (densidad óptica de la

muestra) y la curva de glucosa estándar. Observe lo que ocurre en el indicador de

Glucosa (Glucose) a medida que se mueve la regla. La glucosa plasmática en ayunas

de este paciente será la concentración de glucosa que corresponda a la intersección

de las líneas.

16) Pulse Guardar Datos (Record Data) para mostrar los resultados en la pantalla;

el tubo se colocará automáticamente en el lavador de tubos de ensayo y el monitor se borrará (a excepción de la curva estándar de glucosa que permanece en la pantalla). Se analizarán las muestras en los tubos restantes siguiendo el mismo procedimiento.

17) Pulse en Gráfica de Glucosa Estándar (Graph Glucose Stándar) para que

aparezca la curva de glucosa estándar en la pantalla. Repite este paso hasta que

analice los cinco tubos.

  1. Cuestionario