Diagnóstico de Parásitos Intestinales: Coprológico y Parasitología, Transcripciones de Parasitología

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Corporación para

Investigaciones

Biológicas

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Primera edición 2011

ISBN 978-958-9076-57-

Dirección General

Dr. Diego Miguel Sierra Botero, MBA.

Dirección del Fondo Editorial Dra. Lina María González Duque, MD., MSc.

Corrección de texto Dra. Natalia Rendón Ñungo, MD.

Diseño, diagramación y carátula Diana Cecilia Molina Molina

Corrección sobre pruebas Dra. Lina María González Duque, MD., MSc.

índice analítico Dra. Natalia Rendón Ñungo, MD.

Impresión y terminación PANAMERICANA formas e impresos S.A.

Hecho en Colombia/Manufactured in Colombia Corporación para Investigaciones Biológicas Teléfono: +57 (4) 441 08 55. Fax: +57 (4) 441 55 14 Internet: http://www.cib.org.co/fec Correo-e: [email protected] Medellín, Colombia.

U n id a d I

Protozoos intestinales

• 1. Diagnóstico de los parásitos intestinales por el coprológico UNIDAD I - Protozoos intestinales
• 2. Enlamoeba histolytica/dispar
• 3. Entamoeba c o li
• 4. Entamoeba hartm anni
• 5. Enclolimax nana
• 6. Iodamoeba bulschlii
• 7. Blastocystis hom inis
• 8. Balantidium c o li
• 9. Giardia intestinalis, duodenalis o la m b lia
  • 10. Chilomastix mesnili
  • 11. Cryptosporidium sp
  • 12. Cyclospora cayetanensis
  • 13. Isospora belli
  • 14. Microsporidios
  • 15. Ascaris lum bricoides UNIDAD II - Helmintos
  • 16. Trichuris trich iu ra
  • 17. Uncinadas...............................................................................................................................
  • 18. Strongyloides stercoralis
  • 19- Enterobius vermicularis (oxiuros)
  • 20. Taenia solium o saginata
  • 21. Hymenolepis sp
  • 22. Paragonimus sp
• 23. Fasciola hepática
  • 24. Schistosoma sp
  • 25. Diagnóstico de los parásitos tisulares..................................................................................... UNIDAD III - Protozoos tisulares
  • 26. Plasmodium fa lcip a ru m
  • 27. Plasmodium v iv a x
  • 28. Toxoplasma g o n d ii
  • 29- Leishmania sp
  • 30. Trypanosoma cru zi
    • intestinales por el coprológico 1. Diagnóstico de los parásitos
• 2. Entamoeba histolytica/dispar
• 3. Entamoeba c o li
• 4. Entamoeba hartmanni
• 3. Endolimax nana
• 6. Iodamoeba butschlii
• 7. Blastocystis hom inis
• 8. Balantidium c o li ........................................................................
• 9. Giardia intestinalis, duodenalis o lam blia
  • 10. Chilomastix mesnili
  • 11. Cryptosporidium sp
  • 12. Cyclospora cayetanensis
  • 13. Isospora b elli
  • 14. M icrosporidios

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D iagnóstico de los parásitos

mu intestinales por el coprológico

J

L

os parásitos son agentes biológicos que viven a expensas de otro agente bioló gico de diferente especie denominado hospedero. Están constituidos por agru paciones moleculares (virus) o por una sola cé lula (bacterias, ricketsias, hongos y protozoos) o por millones de células agrupadas en órga nos y sistemas (artrópodos y metazoos). Para facilitar su conocimiento e investigación, el es tudio de los agentes biológicos se ha separado en disciplinas; la Parasitología se encarga del estudio de los subreinos protozoo y metazoo (artrópodos y helmintos). Los protozoos son organismos unicelulares eucariotas, heterótrofos, de vida libre o pueden ser parásitos de plantas y animales vertebrados e invertebrados. Durante su ciclo biológico pa san por los estadios de quiste y trofozoíto. Los protozoos que infectan al ser humano se clasi fican en cuatro phyla: Sarcomastigophora (los que tiene movimiento por seuclópodos o flage los), Ciliophora (movimiento por cilios), Api- complexa (sin estructuras de movimiento pero con complejo apical y fases de reproducción asexual y sexual) y Microspora (sin estructuras para moverse pero con reproducción asexual por esporas). Los helmintos son animales invertebrados de vida libre o parásita, conocidos como gusa nos. Durante su ciclo biológico pasan por los estadios de huevo, larva y adulto. Los helmintos de importancia para el hombre se clasifican en dos phyla: Phalyhelminthes que incluye todos los gusanos aplanados, sin cavidad corporal y aparato digestivo muy rudimentario. A este phylum pertenecen dos clases la Cestoda que incluye todos los gusanos en forma de cinta y la Digenea o gusanos en forma de hoja con ex cepción del Schistosoma sp. que es un platel- minto de forma cilindrica; y el phylum Nemato- da , son gusanos cilindricos con cavidad corpo ral y tubo digestivo simple pero completo. Los

parásitos de ambos phyla tienen reproducción ovovivípara con excepción de las filarías que se reproducen por microfilarias. Los protozoos y los helmintos pueden tener diferentes hábitats en el hospedero y localizar se dentro o fuera de las células. Sitios como el tubo digestivo, cavidades abiertas, órganos y te jidos profundos incluyendo la sangre, pueden ser infectados por parásitos. Cuando los pará sitos tienen como hábitat el tubo digestivo, el diagnóstico se puede hacer con la observación de cualquiera de sus estadios en las materias fe cales, (coprológico directo). Es importante te ner en cuenta que parásitos como Fascioia spp. y Paragonimus spp., que están alojados en el hígado o en pulmón respectivamente, también se pueden observar en las heces. Los protozoos a pesar de ser células peque ñas de 3 a 100 ^m pueden ser identificados a ni vel de género e incluso de especie, en muestras en fresco con el microscopio óptico, debido a que la morfología de los estadios del ciclo vi tal, varían de un género a otro y aun dentro de una misma especie. No obstante para llegar a la identificación de especie de algunos parásitos se hace necesario realizar tinciones especiales, que permiten la observación detallada de algu nas estructuras que no se pueden ver en el co prológico directo. Los helmintos tienen mayor tamaño que los protozoos y la mayoría de sus adultos se pue den observar a simple vista; sin embargo, los estadios de huevos y larvas son más pequeños y requieren del microscopio de luz para hacer la identificación de género y en muchos de ellos hasta la especie; aunque en algunos casos para llegar a este último taxón se requiere realizar coloraciones especiales. El coprológico es el método de elección para el diagnóstico de los parásitos intestina les, es un examen simple y específico que per mite la visualización de los diferentes estadios

Diagnóstico

de (^) los

parásitos

intestinales

por (^) e l coprológico

Atlas de Parasitología

También se debe registrar la presencia de restos alimenticios (materia fecal lientérica), sangre, moco o algún parásito macroscópico como adultos de nematodos o proglótides de cesto- dos, además se debe consignar los colores de la muestra que tengan alguna significancia clí nica como el negro (melenas), blanco (ácolia) o amarilla brillante (esteatorréica).

Examen microscópico. Antes de montar la placa para el examen microscópico, la mate ria fecal debe ser muy bien homogenizada con un palillo de madera o plástico para asegurar una distribución uniforme de los parásitos. Si la muestra presenta varías consistencias se debe hacer una preparación de cada una de las partes de la misma. Seguidamente se prepara la placa con una gota de solución salina isotónica (0,85%) y una gota de lugol, teniendo la precaución de mar car la placa en un extremo y dejar espacio en el otro extremo para manipularla y evitar con taminarse. En cada gota se ponen aproximada mente 2 mg de materia fecal, se homogeniza muy bien para que no queden grumos y se co loca la laminilla evitando que se formen bur bujas. Se deben descartar las placas muy grue sas o muy delgadas porque las primeras impi den la lectura y las segundas pueden contener escasas formas parasitarias que dan resultados falsos negativos. El extendido debe permitir leer a través de él. La lectura de la placa se hace de abajo a arriba o de derecha a izquierda, en 10X y 40X, tanto en solución salina como en lugol; en solución salina se pueden ver pará sitos móviles como larvas (10X) o trofozoítos (40X). El lugol mata las formas móviles pero resalta las estructuras internas de los quistes (40X) coloreando los núcleos y resaltando el contenido de glucógeno. La lectura debe in vertir un mínimo de 15 minutos. El examen coprológico también puede ha cerse mezclando la materia fecal con una o dos gotas de eosina, la cual permite observar las formas móviles y ofrece un buen contraste para observar los parásitos sobre un fondo rosado. Además de las formas parasitarias en el exa men microscópico es indispensable informar otras estructuras como leucocitos, eritrocitos, levaduras, grasas, fibras musculares y vegetales, y cristales de Charcot-Leyden, las cuales se aso cian con estados patológicos del tracto gastroin testinal. Estas estructuras deben ser informadas

de manera cualitativa como cantidad abundante, media o escasa.

L e u c o c it o s

El examen de leucocitos en materia fecal se hace en muestras que no tengan más de media hora de emitidas, de la porción del moco o de la parte líquida y para su mejor observación se monta una preparación con dos gotas de azul de metileno de Loeffler. La identificación de los leucocitos en mate ria fecal proporciona información muy valiosa con respecto a la ubicación anatómica de la lesión y la extensión o magnitud del proceso inflamatorio; son abundantes en colitis por in vasión de la mucosa colónica por infecciones bacterianas; las causas más frecuentes de este evento son infecciosas como Shigella, Salmo- nella, Campylobacter, Escberichia c o li , Yersi- nia enterocolitica, Clostridium difficile y oca sionalmente Vibrio parahaemolyticus y causas no infecciosas como la colitis ulcerativa y en fermedad de Crohn. La ausencia de leucocitos en heces sugiere más la posibilidad de una infección por bacterias enterotoxigénicas, por virus o por parásitos. Se pueden encontrar po cos leucocitos en los casos de colitis por Enta moeba histolytica, excepto si existe infección bacteriana sobreagregada, en cuyo caso serian abundantes. La muestra se considera positiva cuando se observan más de diez leucocitos por campo de 40X en al menos cinco campos (fi gura 1-1), solo se cuentan las células intactas y hay que precisar el predominio de las células, para esto se hace un recuento diferencial en 100 ó 200 células, después de agregar el azul de metileno.

E r it r o c it o s

Se observan cuando hay disentería bacilar o ame- biana, úlceras sangrantes del tracto gastrointesti nal inferior, hemorroides o fisuras (figura 1-2).

L evaduras

Las levaduras son un grupo de hongos que for man estructuras llamadas blastosporos (blas- toconidias) y seudohifas. A este grupo per-

Diagnóstico

de (^) los (^) parásitos

intestinales

por

el coprológico

Diagnóstico

de

los

parásitos

intestinales

por

el coprológico

Atlas de Parasitología

Figura 1-1. Acúmulo de leucocitos. Solución salina, 400X.

Figura 1-2. Eritrocitos. Solución salina, 400X.

Diagnóstico

de

los

parásitos

intestinales

por

el coprológico

Alias de Parasitología

Figura 1-4. Grasa. Solución salina, 400X.

Figura 1-5. Cristales de Charcot-Leyden. Solución salina, 400X.

Atlas de Parasitología

Figura 1-6. Fibra muscular. Solución salina, 400X.

Figura 1-7. Almidones. Solución salina, 100X.

Diagnóstico

de (^) los (^) parásitos

intestinales

por (^) e l coprológico

Entamoeba histolytica/dispar

E

ntamoeba histolytica y Entamoeba dis pa r son dos especies del género Enta moeba , morfológicamente indistingui bles al microscopio de luz, por lo tan to el hallazgo de quistes, trofozoítos o ambos debe ser reportado como Entamoeba histolyti- ca/Entamoeba dispar. Se hace diagnóstico de Entamoeba histolytica , únicamente cuando se visualizan en la materia fecal trofozoítos con glóbulos rojos fagocitados.

Q uiste

Solución salina Estructura ovoide o esférica, de 10 a 15 jam de diámetro; pared gruesa y bien definida que le da resistencia a los cambios ambientales (figu ra 2-1). En fresco se puede observar con cito plasma liso y sin ningún tipo de estructura citoplasmática, lo que permite llegar sólo a un

Figura 2-1. Quiste de Entamoeba spp. Solución salina, 400X.

Entamoeba

histolytica/dispar

Entamoeba

histolytica/dispar

Alias de Parasitología

U

Figura 2-2. Quiste de Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar con cuerpo cromatoidal. Solución salina, 400X.

diagnóstico de género ( Entamoeba ). Cuando se aprecian uno o más cuerpos cromatoidales de extremos romos o en forma de cigarrillo se llega hasta el diagnóstico de especie, Entamoe ba histolytica/Entamoeba dispar (figura 2-2).

Tinción con lugol Se observan esféricos u ovales con citoplasma ligeramente granuloso y núcleos característicos del género Enlamoeaba o sea con membrana definida, tapizada internamente de granulos de cromatina y un cariosoma pequeño (figura 2-3). El número de núcleos hace el diagnóstico de especie, que para Entamoeba histolytica/Enta moeba dispar pueden ser de uno a cuatro de pendiendo del grado de maduración del quiste, mientras más inmaduro menor número de nú cleos (uno o dos) (figura 2-4) y además pueden presentar una vacuola de glucógeno que se tiñe de calé oscuro, la cual desaparece en los quistes maduros, (figura 2-5).

T r o f o z o í t o

El trofozoíto vivo tiene dimensiones variables, que según el grado de actividad y la cepa del organismo, fluctúa entre 10 y 60 /xm de diáme tro mayor, siendo de mayor tamaño el trofo zoíto de cepas patógenas. Presenta forma inde finida con clara diferencia entre el ectoplasma hialino y el endoplasma finamente granuloso, membrana plasmática delgada y un núcleo con membrana definida, tapizada internamente de gránulos de cromatina y un cariosoma peque ño. El citoplasma posee numerosas vacuolas que pueden contener bacterias o detritos y si es Entamoeba histolytica también glóbulos rojos (figura 2-7). El movimiento del trofozoíto, se produce por prolongaciones del ectoplasma que lleva a la formación de seudópodos digitiformes largos o anchos y romos, que se dan uno a

Entamoeba

histolytica/dispar

Atlas de Parasitología

Figura 2-5. Quiste de Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar. Lugol, 400X.

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Figura 2-6. Trofozoíto de Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar. Solución salina, 400X.

Atlas de Parasitología

Figura 2-8. Trofozoíto de Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar. Lugol, 400X.

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Figura 2-7. Trofozoíto de Entamoeba histolytica. Solución salina, 400X.

Entamoeba

histolytica/dispar

uno y generan un desplazamiento explosivo y unidireccionado.

Solución salina Se observa redondo o de forma indefinida por la presencia de seudópodos. El citoplasma pre senta numerosas vacuolas y menor número de gránulos. Si el trofozoíto está muerto (sin mo vimiento) se hace aparente el núcleo, el cual se observa en forma de rueda punteada y refrin- gente (figura 2-6 y 2-7).

Tinción con lugol Con esta coloración, el trofozoíto pierde la motilidad, puede adquirir forma redonda o conservar la forma indefinida con clara dife rencia entre ectoplasma y endoplasma y ade más observarse con mayor claridad numerosas vacuolas e inclusiones citoplasmáticas como

Atlas de Parasitología

Figura 2-11. Trofozoíto de Entamoeba histolytica. Hematoxilina férrica, 1000X. Con glóbulos rojos fagocitados.

gránulos, material fagocitado, que en el caso de Entamoeba histolytica puede ser glóbulos rojos y en algunas oportunidades presencia de vacuola de glucógeno. Puede verse o no, el núcleo característico del género Entamoeba (figura 2-8 y 2-9).

Hematoxilina férrica Para un diagnóstico seguro de especie del géne ro Entamoeba se debe hacer coloraciones espe ciales que permitan observar las características del núcleo de cada una de ellas. En el caso de Entamoeba histolytica/dispar tiene un núcleo de membrana definida, delicada, con cromatina regularmente distribuida en la parte interna de la membrana y un pequeño cariosoma central; se observa el citoplasma vacuolado con o sin partículas y presencia o no de glóbulos rojos fagocitados (figura 2-10 y 2-11).

Entamoeba

histolytica/dispar

Entamoeba coli

Q u is t e

Solución salina Estructura redonda u ovalada, de pared gruesa y definida, de 10 a 35 /xm de diámetro, citoplas ma liso o con pocas inclusiones, lo cual no per mite hacer el diagnóstico de especie. La obser vación de una o más barras cromatoidales que terminan en puntas o puntas astilladas, permi ten hacer el diagnóstico en fresco de quistes de

Entamoeba co li , pero esta característica solo la presentan los quistes inmaduros (figura 3-1).

Tinción con lugol El quiste en lugol se caracteriza por tener un citoplasma más granuloso que el de Entamoeba histolytica / Entamoeba dispar. El diagnóstico lo hace la presencia de cinco o más núcleos ca racterísticos del género Entamoeba (figuras 3- y 3-3). La mayoría de los quistes tienen de cinco

Figura 3-1. Quiste de Entamoeba coli. Solución salina, 400X.