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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
CENTRO DE ESTUDIOS CIENTÍFICOS Y
TECNOLÓGICOS 15
“Diódoro Antúnez Echegaray”
INSTRUCTIVO DE PRÁCTICAS DE
ANÁLISIS HEMATOLÓGICOS
PROFESOR TITULAR: _______________________________________
PROFESOR (ES) DE LABORATORIO: __________________________
__________________________________________________________
NOMBRE DEL ALUMNO: ____________________________________
No. DE BOLETA: _____________ GRUPO: _______ EQUIPO No: ___
CICLO ESCOLAR:___________________________________________
ELABORADO POR REVISADO POR APROBADO POR AUTORIZADO POR
Lic. Odont.
Angélica Cadena R.
Q.B.P. Julio Aquino
Aquino
MVZ Francisco
Jurado Silva
M.C.P Salvador
Vázquez Martínez
Q.B.P. Gil Moisés
López Iñiguez
Dr. Rafael Alfonso
Meza Villanueva
Docentes Presidente de
Academia
Jefe de Área
Académica
Subdirector
Académico
Clave: AH-I Revisión: 29/07/2019 Fecha de emisión: 05/08/2019 Página: 2 de 74
ÍNDICE DE PRÁCTICAS Pág. INTRODUCCIÓN…………………..………………………………………………………………… (^) 3 REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE PARASITOLOGÍA……………………………………. 4 PRACTICA^ No. NOMBRE DE LA PRÁCTICA (^1) TOMA DE MUESTRA SANGUÍNEA CON DIFERENTES TIPOS DE ANTICOAGULANTES (^) 6
2 TOMA DE MUESTRAS^ SANGUÍNEA CAPILAR, VENOSA^ Y ARTERIAL^ Y PREPARACIÓN DE FROTIS SANGUÍNEO
18 3 ELABORACIÓN DE UN FROTIS SANGUÍNEO PARA REVISAR LAS CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE GLÓBULOS ROJOS 22 4 CUANTIFICACIÓN DE LA HEMOGLOBINA (HB). (^) 28 5 CUANTIFICACIÓN DEL HEMATOCRITO E ÍNDICES HEMÁTICOS 32 6 RECUENTO DE RETICULOCITOS. 37 EXAMEN PRACTICO “A” 7 ELABORACIÓN DE FROTIS SANGUÍNEOS CON DIFERENTES TÉCNICAS TINTORIALES PARA LA OBSERVACIÓN MORFOLÓGICA DE LOS LEUCOCITOS (^) 40 8 CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y TINTORIALES DE LOS LEUCOCITOS 44 9 CUENTA TOTAL DE LEUCOCITOS POR DIFERENTES TÉCNICAS EN EL LABORATORIO CLÍNICO 50 10 CUENTA DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS Y SUS VALORES ABSOLUTOS. 54 11 CITOLOGÍA HEMÁTICA (FÓRMULA ROJA Y BLANCA) 58 EXAMEN PRACTICO “B” 12 CUANTIFICACIÓN DE PLAQUETAS POR EL MÉTODO DIRECTO O INDIRECTO 61 13 DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE PROTROMBINA (TP) Y DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA) 64 14 DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE SANGRADO, TIEMPO DE COAGULACIÓN Y PRUEBA DEL TORNIQUETE 68 EXAMEN PRACTICO “C” ANEXO NO.1 PREPARACIÓN DE REACTIVOS……………………………………………………….………….^ 73 BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………………………………… 75
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
CENTRO DE ESTUDIOS CIENTÍFICOS Y TECNOLÓGICOS 15
“DIÓDORO ANTÚNEZ ECHEGARAY “
ACADÉMICA DE: TÉCNICO LABORATORISTA CLÍNICO
LABORATORIO DE: ANÁLISIS HEMATOLÓGICOS
REGLAMENTO
- Entrar al laboratorio con bata puesta y abotonada solo podrán quitársela al salir de este
“Alumno que no traiga bata no podrá realizar la práctica”.
- Se impartirá una sesión por semana a cada grupo, pasando asistencia en cada una de
ellas.
- Existirá una tolerancia de 15 minutos para entrar al laboratorio si es a la primera hora y de
5 minutos a la segunda hora.
- La puerta se mantendrá cerrada durante el desarrollo de la práctica y no podrá ser abierta
a amenos que el profesor lo autorice.
- Si se el alumno abandona el laboratorio sin autorización del profesor aunque la práctica
se haya terminado se considerara como falta.
- Se anotaran las inasistencias con todo rigor y por ningún motivo se pondrán retardos
después de la tolerancia.
- Las faltas al laboratorio se calificaran con cero ya que si no se realiza una práctica no se
puede evaluar y la justificación de inasistencia no implica que la práctica se pueda
evaluar.
- La entrega del reporte de la práctica se hará en la siguiente sesión de laboratorio y por
motivo razón o circunstancia no se recibirá dicho reporte posterior al día indicado (a
menos que se consensé el hecho de restar dos puntos por día de retraso).
- Colocar mochila y todos los objetos personales (MP3, Laptop, iPOD, PSP y celulares) en
los anaqueles, dejando fuera solo lo que van a utilizar para su práctica.
- Cada alumno deberá durante todo el curso en el equipo y mesa de trabajo que sea
asignada al inicio del curso.
- Aquel equipo que no revise su material y lo entregue en mal estado o incompleto lo
repondrá dentro de los primeros 15 días posteriores a la práctica en caso contrario no
tendrán derecho a examen práctico.
- Es obligación de los alumnos guardar el orden, disciplina y atención durante su estancia
en el laboratorio; con el fin de prevenir accidentes y daños al equipo.
Clave: AH-R Revisión: 29/07/2019 Fecha de emisión: 05/08/2019 Página: 4 de 74
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CENTRO DE ESTUDIOS CIENTÍFICOS Y TECNOLÓGICOS No. 15
“DIÓDORO ANTÚNEZ ECHEGARAY “
ACADEMICA DE: TÉCNICO LABORATORISTA CLÍNICO
LABORATORIO DE: ANÁLISIS HEMATOLÓGICOS
- Queda estrictamente prohibido comer, fumar o beber dentro del laboratorio. QUIEN NO
CUMPLA CON ESTAS DOS ULTIMAS DISPOSICIONES TENDRA QUE ABANDONAR
EL LABORATORIO ANULANDOSE LA PRÁCTICA.
- Mantener siempre limpia su área de trabajo colocando la basura en los cestos que se
encuentran en cada mesa y no en las tarjas cónicas de las mismas.
- Cando todo el grupo deje de asistir a alguna práctica y no existe causa justificada
oficialmente esta se dará por visita y será tema de cualquier examen.
- Colocar los bancos sobre la mesa al terminar la sesión.
- Manejar adecuadamente los RPBI.
- La evaluación del laboratorio será de la siguiente manera:
- Criterios y puntaje para el reporte de la práctica.
a) Número y título de la práctica b) Fecha en que se realizó la práctica c) Competencia y Fundamento d) Introducción a través de un organizador gráfico e) Desarrollo o procedimiento (esquemas) (1 punto) f) Resultados con fórmulas, cálculos e imágenes según sea el caso (2 puntos) g) Análisis o interpretación de los resultados (2 puntos) h) Conclusiones (2 Puntos ) i) Cuestionario (1 punto ) j) Referencias bibliográficas (1 punto)
Firma de conformidad (Nombre y rubrica del alumno)
Actualmente existen en el mercado una serie de dispositivos que están diseñados para facilitar la toma de muestras, identificación y transporte, minimizando el error humano. Uno de ellos es el Sistema de tubos múltiples (vacutainer) al vacío que asegura la esterilid ad de los materiales, la proporción adecuada sangre anticoagulante, evita la hemólisis causada por tomas con jeringa, entre otras ventajas. La punción venosa con jeringa es también una opción, cuando las venas del paciente son muy delgadas y no se desea someter a la succión de los tubos al vacío, etc. La longitud y calibre de la aguja tanto del Sistema Vacutainer como de la jeringa datos importantes a considerar. El adecuado lavado de manos, el uso de guantes y el uso de yodopovidona 10%, alcohol a 70% o tintura de yodo a 2% son las mejores medidas para la preparación de la piel previa a una punción.
Fig. 1 Venas del antebrazo adecuadas para la punción venosa
a) Equipo vacutainer b) Equipo vacutainer alado c) Jeringa Fig. 2 Materiales de uso común para la punción.
TOMA DE MUESTRA SANGUÍNEA CON DIFERENTES ANTICOAGULANTES . Los anticoagulantes utilizados en Hematología deben cumplir con las siguientes características:
No alterar el tamaño de los hematíes. No producir hemólisis. Evitar al máximo la agregación plaquetaria. No alterar la morfología de los leucocitos. La sangre tratada con anticoagulante debe procesarse lo antes posible. El tiempo máximo entre la extracción de la sangre y su proceso depende del coagulante de elección y no debe ser más de 4 horas, a excepción del anticoagulante EDTA (etilendiaminotetracético) que puede ser hasta 24 horas conservando la muestra en refrigeración (4 a 8ºC). Los anticoagulantes pueden emplearse en forma sólida o líquida. Los primeros están indicados para la determinación de los parámetros hematológicos, ya que no producen, como los anticoagulantes líquidos, dilución de la sangre.
Los anticoagulantes más utilizados son: EDTA (^) (C10H16N2O8) o sal disódica, dipotásica o tripotásica del ácido etilendiamino tetraacético, actuando mediante un efecto quelante (captura) sobre el calcio (Ca++), impidiendo el proceso de la coagulación. Este anticoagulante se utiliza fundamentalmente para la realización de recuentos celulares, sobre todo en los autoanalizadores y permite además la realización del hematocrito y del frotis sanguíneo hasta dos horas después de la extracción de la muestra al mismo tiempo que impide la aglutinación de las plaquetas.
MATERIALES, EQUIPO Y REACTIVOS
Material de laboratorio 2 Tubos de ensaye de 13X100 mm Equipo 1 Pipeta Pasteur con bulbo Microscopio Tubos al vacío con diferentes anticoagulantes. Centrífuga Equipo vacutainer Ligadura o tubo látex Torundas de algodón con alcohol etílico al 70% Gradilla Franela Escobillón chico
PROCEDIMIENTO 4.1 Obtención de sangre venosa con jeringa o sistema al vacío
- Antes de tomar la muestra; solicitar al paciente se ponga cómodo, puede ser sentado o recostado, apoyando bien el brazo en posición horizontal
- Verificar que los materiales requeridos estén listos.
- Elegir la vena adecuada, de preferencia la vena la cefálica o basílica, de la muñeca, tobillo o mano, ya que se palpan fácilmente.
- Enroscar la aguja al adaptador vacutainer o la aguja a la jeringa adecuada. Asegurarse de la jeringa no contenga aire (el émbolo de la jeringa debe estar hasta el fondo).
- Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por encima de la flexión del codo. Figura 3.
- Solicitar al paciente que estire el brazo con la palma de la mano hacia arriba; que abra y cierre la mano varias veces, para visualizar las venas superficiales.
- Una vez elegida la vena a puncionar; el técnico debe colocarse frente al paciente; en dirección a la vena del brazo a puncionar.
- Desinfectar la piel en un área de 2 pulgadas con una torunda de algodón mojada con alcohol al 70%, de arriba hacia abajo y girando la torunda. Figura 4.
- Sujetar el brazo del paciente con la mano libre (normalmente la izquierda), estirando ligeramente para sujetar la vena. El adaptador o la jeringa se mantiene entre el dedo pulgar derecho y los tres últimos de la mano, con el bisel de la aguja hacia arriba y en dirección de la vena en un ángulo de 15º.
- Introducir la aguja con el bisel hacia arriba perforando la piel hasta llegar a la vena a una profundidad de entre 0.5 a 1 cm. Figura 5 y6.
- Retirar la ligadura jalando del extremo doblado e indicar al paciente que abra la palma de la mano.
- Con la jeringa jalar lentamente el émbolo hasta obtener el volumen de sangre requerido. Con el sistema al vacío, una vez que la aguja este en la vena; introducir el tubo en el adaptador; el volumen de sangre obtenido está definido por el vacío del tubo. Figura 7.
- Una vez concluida la extracción de sangre; sacar la aguja de la vena. En el sistema al vacío, primero se retira el tubo y después se retira la aguja con el adaptador. Si se requiere mayor volumen de sangre, se retira el tubo y se inserta otro nuevo.
- Colocar una torunda de algodón seco en el sitio de la punción; puede también colocar un parche.
- Pedir al paciente que presione firmemente el algodón durante 5 minutos, con el brazo extendido o doblado.
- En el caso de la extracción con jeringa, separar la aguja y la jeringa. Descargar la sangre por las paredes del tubo para evitar hemólisis y formación de espuma. Figura 8.
- Separar las agujas de la jeringa o adaptador con precaución para evitar picarse accidentalmente.
- Depositar las agujas en el contenedor de punzocortantes. Figura 9.
Figura 3. Aplicación de torniquete
PROCEDIMIENTO PARA LA VENOPUNCION DE RUTINA
Fundamento: la punción venosa permite extraer una mayor cantidad de sangre para las
pruebas necesarias. Las venas de elección suelen ser las de la cara anterior del antebrazo
porque resulta fácil acceder a ellas. Las cifras hemáticas permanecen constantes no obstante
el sitio seleccionado para obtener la punción venosa.
Metodología empleando el sistema al Vacío:
1. La toma deberá hacerse en un lugar totalmente iluminado.
2. El paciente deberá colocarse en una posición cómoda, de preferencia acostado, si esto
no es posible se deberá realizarse en la posición de sentado.
3. Preparar el material a utilizar antes de proceder a realizar la toma de muestra, rotular o
identificar los tubos con los datos correctos del paciente.
4. Utilizar material estéril el cual se deberá mostrar al paciente.
5. Lavarse las manos de acuerdo al procedimiento establecido y colocarse los guantes.
6. Desinfectar el área que se va a puncionar con una torunda (algodón con alcohol al
70%). Este procedimiento se realiza 3 veces de arriba hacia abajo girando la torunda
15° en cada ocasión.
7. Mientras se seca el exceso de alcohol en el brazo retirar el capuchón blanco de aguja
vacutainer y enroscarla en el adaptador o camisa.
8. En caso de ser necesario, colocar el torniquete (ligadura) aproximadamente 4 cm por
encima del sitio que se va a puncionar (plexo superior del codo) para que la vena sea
más visible.
9. Solicitar al paciente que cierre el puño y extienda su brazo colocando aproximadamente
en un ángulo de 180°.
10. Localizar (palpar) la vena mediante inspección con el dedo índice. A veces se le pide al
paciente que abra y cierre el puño. Se tendrá que localizar: dirección, grosor y
profundidad de la vena.
11. Colocar la aguja con el bisel hacia arriba y en un ángulo de 30 a 45°, introducir la aguja
(aproximadamente 1 cm) en dirección contraria al flujo sanguíneo. Retirar el torniquete
cuando la sangre empiece a brotar dentro de los tubos.
12. Introducir el tubo recolector apoyando los dedos índices y medio en las orejas del
adaptador y con el dedo pulgar presionar el tubo.
13. Si la sangre no fluye espontáneamente y si está empleando equipo al vacío presionar el
tubo hacia arriba.
14. Recoger la sangre hasta que se agote el vacío del tubo.
15. Una vez que se hayan obtenido los tubos necesarios con la cantidad de sangre
requerida, retirar la aguja, colocar una torunda seca o gasa limpia sobre el sitio de
punción e indicarle al paciente que presione aproximadamente 5 minutos para detener
la hemorragia.
16. Si la toma se efectuó con jeringa, retirar la aguja y verter la sangre en un tubo estéril,
dejándola resbalar lentamente por la pared para evitar hemolisis.
17. Tapar cuidadosamente el tubo.
18. Desechar apropiadamente el material utilizado, depositar exclusivamente la aguja en el
recolector de punzocortantes, si se utilizan eclipse, colocar el protector, retirarla del
sistema vacutainer y depositarla en el contenedor para residuos urbanos.
NOTA: Este procedimiento está basado en la rutina realizada por el personal que labora en
instituciones de salud (IMSS. ISSSTE, SSA, HNM, etc.), en instituciones de enseñanza deberá
ser supervisado por los docentes a cargo de cada grupo, ningún estudiante deberá realizarlo
por iniciativa propia.
TOMA DE MUESTRA SANGUÍNEA CON DIFERENTES ANTICOAGULANTES . Los anticoagulantes utilizados en Hematología deben cumplir con las siguientes características:
No alterar el tamaño de los hematíes. No producir hemólisis. Evitar al máximo la agregación plaquetaria. No alterar la morfología de los leucocitos. La sangre tratada con anticoagulante debe procesarse lo antes posible. El tiempo máximo entre la extracción de la sangre y su proceso depende del coagulante de elección y no debe ser más de 4 horas, a excepción del anticoagulante EDTA (etilendiaminotetracético) que puede ser hasta 24 horas conservando la muestra en refrigeración (4 a 8ºC). Los anticoagulantes pueden emplearse en forma sólida o líquida. Los primeros están indicados para la determinación de los parámetros hematológicos, ya que no producen, como los anticoagulantes líquidos, dilución de la sangre.
Los anticoagulantes más utilizados son: EDTA (^) (C10H16N2O8) o sal disódica, dipotásica o tripotásica del ácido etilendiamino tetraacético, actuando mediante un efecto quelante (captura) sobre el calcio (Ca++), impidiendo el proceso de la coagulación. Este anticoagulante se utiliza fundamentalmente para la realización de recuentos celulares, sobre todo en los autoanalizadores y permite además la realización del hematocrito y del frotis sanguíneo hasta dos horas después de la extracción de la muestra al mismo tiempo que impide la aglutinación de las plaquetas.
HEPARINA SÓDICA. HEPARINA DE LITIO, es un anticoagulante fisiológico que actúa impidiendo que la protrombina se transforme en trombina. Estructuralmente es un mucopolisacárido ácido. Los frotis realizados con muestras sanguíneas anticoaguladas con heparina producen en las tinciones un color azulado y una pseudovacuolización celular por lo tanto no se lo recomienda para tal fin. La proporción adecuada es de 15-20 UI (0.1-0.2 mg) de heparina por ml de sangre.
- Una vez tomada la muestra, observar las características de las muestras con los diferentes anticoagulantes.
- Centrifugar las muestras obtenidas y separar el plasma de cada muestra en tubos limpios.
- Observar las características que presenta el plasma en cada uno de ellos.
4.2 Trabajo a desarrollar por el alumno
1.-los alumnos realizaran un reconocimiento de todos los códigos de colores de los tubos Vacutainer así como el anticoagulante en cada uno de ellos
5. CUESTIONARIO
- ¿Porque deben ser estériles las agujas y las jeringas utilizadas en la extracción de sangre venosa?
- ¿Qué recomendaciones se deben hacer al paciente antes de la extracción de la muestra?
- ¿Dónde se efectúa la punción venosa en los niños?
- ¿Porque al poner la sangre en el tubo con anticoagulante debe quitarse la aguja?
- Mencione los factores que intervienen para una punción venosa adecuada.
- ¿Qué función tienen los tubos al vacío con tapón azul, morado, amarillo, rojo y tapón rojo con gel?
- ¿Qué ventajas tiene la extracción de sangre con tubos al vacío con respecto a la extracción con jeringa.
- ¿Cuáles son los equipos mínimos necesarios para llevar a cabo una punción venosa?
9.- ¿Qué otros tipos de anticoagulantes existen?
10.- ¿De los anticoagulantes antes mencionados, cual es el que más se utiliza en Hematología?
11.- ¿Por qué la cantidad de anticoagulante debe ser proporcional a la cantidad de sangre?
12.- ¿Menciona porque no se debe de emplear la heparina como anticoagulante en la realización de frotis sanguíneos
13.- ¿Cuál es la diferencia entre suero y plasma?
ACTIVIDAD A ELABORAR EN EL LABORATORIO
1.- Realiza un flujo grama sobre los pasos esenciales para llevar a cabo una toma de muestra venosa.
Figura 1. Sitio de elección para la punción capilar.
MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS Material de laboratorio 1 Tubo de ensaye de 13 X 100 mm Torundas con alcohol al 70% Gradilla Lancetas desechables 1 Pipeta Pasteur con bulbo Franela Escobillón chico Equipo vacutainer Equipo 10 Portaobjetos Centrífuga 2 tubos capilares
PROCEDIMIENTO
Punción capilar
- Producir un flujo sanguíneo libre mediante calentamiento o ligero masaje de la zona elegida.
- Limpiar el lugar de punción con una torunda impregnada de alcohol al 70%.
- Con una lanceta desechable se practica un pinchazo limpio y rápido de unos 2 a 2.5 mm de
profundidad en el sitio elegido. Fig. 2-4.
- La primera gota de sangre se elimina con una gasa estéril o una torunda de algodón seca; las
siguientes gotas se colectaran para la realización de la prueba. Figura 5-7. Evitar comprimir la
extremidad para obtener sangre porque se altera la composición sanguínea.
- Una vez concluida la extracción; con una torunda, ejercer una ligera presión en el lugar de la
punción hasta que cese la hemorragia.
- Figuras 5, 6,
- Figuras 2 , 3 y
