GUÍA DE LABORATORIO 2022-1
1
Departamento de Ciencias
de la Vida y de la Salud
MANUAL DE PRÁCTICA
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Departamento de Ciencias de la Vida y la Salud
Carrera de Medicina Humana
Lima – Perú
2022-2
MORFOFISIOLOGÍA GENERAL
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Manual morfo 1 ucsur, Guías, Proyectos, Investigaciones de Morfología y Sintaxis
Ucsur manual morfo 1 2022 2 asaaaaa
Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones
2021/2022
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GUÍA DE LABORATORIO 202 2 - 1 1
Departamento de Ciencias
de la Vida y de la Salud
MANUAL DE PRÁCTICA
Departamento de Ciencias de la Vida y la Salud
Carrera de Medicina Humana
Lima – Perú
MORFOFISIOLOGÍA GENERAL
Coordinador: del curso de Morfofisiología General
Blga. Coca Calderón, Marie - Claudia
Profesores Responsables de Histología
Blga. Coca Calderón Marie-Claudia
Blga. De la Cruz Anticona Shirley Mirna
Blgo. Farfán Hernández Kevin Jhony
Blga. Neira Alatrista Elizabeth María
Blga. Samanéz Urrunaga María Carolina
Profesores Responsables de Fisiología
Mg. Villalobos Pacheco Eduardo
MC. Astorga Guerrero Bryan Alexander
NORMAS GENERALES PARA EL ESTUDIANTE DEL CURSO DE MORFOFISIOLOGÍA GENERAL
1. Ingresar puntual al horario que le corresponda, junto con el docente a cargo.
2. Respetar un código de vestimenta apropiado para la universidad.
3. Revisar los saberes previos de cada sesión de práctica, para estar preparado al
desarrollo de esta.
4. Permanecer durante todo el desarrollo de clase, una vez que se solicite su
participación y el estudiante no responda, se tomará en cuenta para su
evaluación.
5. Revisar previamente los documentos generales del curso como Syllabus, Ficha
y Plan de actividades para conocimiento de las fechas de las evaluaciones, así
como también los criterios de las mismas.
NORMAS PARA EL ESTUDIANTE DEL CURSO MOROFISIOLOGIA GENERAL EN LA PRESENCIALIDAD DURANTE LA PANDEMIA
1. Es obligatorio presentar el carné de vacunación contra el covid-19, con
sus dosis completas para ingresar al laboratorio.
2. Respetar el distanciamiento social antes, durante y después del ingreso a
los laboratorios.
3. Usar doble mascarilla quirúrgica y/o mascarilla KN95, que le cubra la
nariz, boca y mentón.
4. Convierta el uso de la mascarilla en una parte normal de su interacción
con otras personas.
5. Bajo ninguna circunstancia debe de retirarse la mascarilla o utilizarla de
forma incorrecta.
6. De presentar algún síntoma como tos, fiebre, malestar general u otros,
relacionados con el COVID-19, comunicarlo inmediatamente a los
docentes a cargo.
INTRODUCCIÓN
La vida empieza en una sola célula fecundada, el huevo o cigoto, al final del
desarrollo han de producirse más de cincuenta millones como resultado de
divisiones repetitivas, estas luego de especializarse, van a formar tejidos. Un
Tejido es un grupo de células similares en estructura y especializadas para una
función particular, los tejidos formarán los órganos y estos a su vez los sistemas
que componen la maravillosa maquinaria del ser humano. La ciencia que estudia
la estructura microscópica de los tejidos se denomina Histología y la ciencia que
estudia su función Fisiología.
El avance de la histología se debe al desarrollo de los microscopios. Los primeros
microscopios se hicieron alrededor de los 1600. Galileo un científico italiano hizo
un microscopio con el que observó insectos, éste era un microscopio compuesto
(con dos lentes). Los fabricantes holandeses de lentes Jans y Zacharias Jansen,
desarrollaron los primeros microscopios compuestos.
Hooke, científico inglés mejoró en algo el diseño del microscopio y con este pudo
observar muchos objetos, incluyendo un corte muy fino de corcho, donde
observó unas celdas muy pequeñas, él para describirlas en su libro Micrographia
(1665) utilizó por primera vez la palabra célula. Años después AntonVan
Leeuwenhoek, comerciante holandés vio también infinidad de células, su
microscopio aumentaba 30 veces los objetos, él construyó lentes simples con un
aumento de 200 veces con los que pudo observar, células sanguíneas, bacterias,
protistas, etc.
En el año 1839, se estableció la “Teoría Celular”. Matthew Schleiden observando
tejidos vegetales y Theodor Schwann observando tejidos animales establecieron
que “Todos los seres vivos están compuestos por células y que dentro de ellas
ocurren los procesos para la vida” Virchov añadió a los conocimientos de
histología los de Patología al demostrar que los procesos patológicos tienen
lugar en la célula y en los tejidos. En el año 1941 Henle publicó la primera
descripción de la histología humana.
La histología se ha convertido en estos días en una ciencia dinámica y funcional
dejando de ser meramente descriptiva, gracias a los avances obtenidos con la
microscopía de campo claro, la microscopía electrónica de transmisión y a
numerosas técnicas morfológicas y químicas, podernos ofrecer un conocimiento
más completo (autorradiografía, histoquímica, cultivo de tejidos, congelación-
fractura-criograbado, microscopía electrónica de barrido, etc.).
MORFOFISIOLOGÍA GENERAL: HISTOLOGÍA
INSTRUCCIONES PARA EL DESARROLLO DE LAS EXPERIENCIAS PRÁCTICAS
En cada clase práctica el alumno recibirá preparados histológicos, coloreados con Hematoxilina y Eosina (H-E) y cuando sea necesario con coloraciones especiales. Luego de la identificación de los tejidos o estructuras correspondientes a la clase el alumno, debe realizar esquemas representativos de lo observado en su cuaderno de prácticas. Como la mayoría de las preparaciones histológicas serán observadas con H-E, les damos en esta guía el método histológico para su preparación: Fijación Luego de haber obtenido una pieza de tejido por cualquiera de los métodos empleados como: biopsia por aguja, biopsia endoscópica, biopsia por escisión directa u otros, la muestra debe ser fijada inmediatamente para preservar la estructura celular lo más aproximada a lo que fue in vivo. La fijación detiene la actividad metabólica de la célula evitando la autolisis, o por microorganismos. Los fijadores más usados para la microscopía de luz son el Formaldehído al 10% (formol), líquido de Bouin y de Helly; para la microscopía electrónica el Glutaraldehido al 3% y tetraóxido de Osmio.
1. Lavado Luego de fijadas las muestras deben ser lavadas para quitar los restos de fijador, se puede hacer en agua corriente o en solución tampón. 2. Deshidratación El agua de las células debe ser desalojada por completo, para esto se usa una batería de deshidratación compuesta por etanol en grado ascendente de 70% hasta alcohol absoluto para terminar aclarando la muestra con el xilol. 3. Embebido Consiste en remplazar el agua de las células por un material que permita cortarlas este puede ser parafina, paraplast, celoidina, resinas epoxis o metacrilatos. 4. Inclusión La parafina o cualquier sustancia de inclusión, da firmeza al tejido para hacer cortes delgados de unas 4 μm o menos, en un micrótomo, para que los tejidos puedan ser observados al microscopio. 5. Coloración Existen diversos métodos de coloración siendo el más usado el de Hematoxilina-Eosina. Con esta técnica el núcleo se tiñe de azul o púrpura oscuro, y el citoplasma y otras estructuras celulares se tiñen de diferentes matices de rojo. Existen otras técnicas para diferenciar estructuras celulares o intersticiales; como las coloraciones de Mallory-Azan, Orceína, Resorcina, Fucsina y Wilder para el estudio de fibras colágenas, elásticas y reticulares. Para el sistema nervioso son preferidas las técnicas denominadas de impregnación Argéntica.
INSTRUCCIONES PARA EL DESARROLLO DE LOS INFORMES DE EXPERIENCIAS PRÁCTICAS
Los estudiantes deben presentar un portafolio como parte de su trabajo
académico dentro de la rotación de histología, donde incluirán los dibujos de
cada una de sus observaciones de las láminas presentadas en clase u obtenidas
de otras fuentes bibliográficas; así como también resolver el cuestionario de las
prácticas.
Al realizar la actividad, le sugerimos tomar en cuenta los siguientes puntos:
- Los dibujos deberán ser hechos a mano.
- Cada dibujo debe estar correctamente señalado y nominado, con una
leyenda que describa a la imagen y datos importantes para la
identificación de la célula y/o tejido.
- Se debe respetar el orden de la presentación, indicando a qué semana o
tema pertenecen los dibujos
- Se debe incluir las referencias bibliográficas utilizadas para la realización
de los dibujos.
La entrega del trabajo tendrá una fecha límite. Trabajo no entregado, tendrá una
calificación de cero (00) sin lugar a recuperación. Esta actividad es realizada de
forma individual.
Pautas para la entrega de trabajo:
- La carátula del informe debe incluir: Curso y Sección + Apellidos y
Nombres de docentes + Apellidos y Nombres del estudiante.
- La fecha y hora de la entrega máxima de la tarea académica, depende del
horario en el cual está matriculado el estudiante.
PRÁCTICA N°1: “OBSERVACIÓN, CONOCIMIENTOS, MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO” INTRODUCCIÓN AL TEMA La invención del microscopio abrió todo un campo de investigación, conforme fue avanzando la tecnología, en microscopía, fueron avanzando los conocimientos sobre las células. La curiosidad científica hizo que cada vez surgiera el deseo por observar más y cómo las células no tienen color, hubo la necesidad de emplear colorantes y esto llevó a nuevos descubrimientos y al desarrollo de nuevas técnicas que permitieran encontrar más estructuras dentro de las células y ver cómo estaban constituidos los tejidos, surgiendo una nueva ciencia, la Histología. COMPETENCIAS
- Identifica sin error cada una de las partes del sistema óptico del microscopio convencional.
- Reconoce correctamente cada una de las partes del sistema mecánico del microscopio compuesto.
- Enumera sin error los procedimientos establecidos para el uso del microscopio convencional.
- Diferencia Poder de Resolución de Límite de Resolución.
- Describe las formas en que podemos aumentar el Poder de Resolución de un microscopio compuesto.
- Señala el Límite de Resolución del ojo humano, del microscopio compuesto de luz y del microscopio electrónico de transmisión.
- Define correctamente el concepto de Magnitud.
- Describe las imágenes que se forman en el microscopio compuesto de luz. MATERIALES Materiales del laboratorio Materiales del estudiante Detalle Cantidad Detalle Cantidad Microscopio compuesto. (^) 1 x alumno Hojas de papel bond Lo necesario Laminas histológicas: Lápiz de dibujo^1 Frotis sanguíneo 6 x mesa Lápices de colores Todos los colores
- Papel lente
- Alcohol isopropílico
- Algodón
- Aceite de inmersión
- 1 hoja/alumno
- 10 ml
- 1/alumno
- 1 por aula
PROCEDIMIENTO Microscopio compuesto.
1. Enfocar el microscopio con el objetivo de menor aumento, abrir completamente el diafragma, de tal manera que pasen a través de él la mayor cantidad de rayos de luz, obteniéndose así el campo del microscopio totalmente iluminado. El condensador debe estar colocado en el punto en el cual desaparezca completamente la imagen de la fuente luminosa y se consiga observar el campo del microscopio iluminado con uniformidad. La platina debe de estar **horizontal.
- Observar una lámina permanente (coloreada) con el objetivo de menor** aumento, luego cambiar al objetivo de mayor aumento e ir graduando la apertura del diafragma en cada caso hasta observar los detalles estructurales nítidamente. 3. Antes de usar el objetivo de inmersión, debe estar seguro de que el condensador debe estar totalmente elevado y el diafragma completamente abierto el condensador está totalmente elevado y el diafragma abierto. Debe colocar una gota de aceite de inmersión sobre la lámina enfocada y moviendo suavemente el revólver del microscopio, sin modificar la posición del tubo y cuidando que el microscopio no patine sobre la mesa de trabajo corrija el foco por medio de movimientos suaves del tornillo micrométrico solamente hasta diferenciar detalles estructurales nítidamente. 4. Terminada las observaciones al microscopio convencional, limpie con papel lente el objetivo de inmersión hasta retirar completamente el aceite de inmersión. Deje el microscopio con el objetivo de menor aumento en el eje óptico y con el tubo bajo. Recomendaciones.
- Al iniciar sus observaciones al microscopio, con el objetivo de menor aumento, ilumine el campo del microscopio con el diafragma completamente abierto.
- Al disponerse a trabajar en el microscopio es recomendable iniciar sus observaciones en el objetivo de menor aumento, observar y analizar la lámina, y cambiar a la lente de mayor aumento al encontrar algo que llame su atención y/o se precise visualizar con mayor detalle.
- Limpie la parte óptica del microscopio, solamente, con papel lente frotando muy suavemente. La parte mecánica debe de limpiarla con un lienzo suave.
- Al mover el revólver del microscopio, para trabajar con un objetivo de mayor aumento, mire por el costado y asegúrese de que la lente frontal del objetivo no roce con la laminilla. Tenga más cuidado, aún, si va a trabajar con el objetivo de inmersión. Es preferible que levante un poco el tubo del microscopio con la finalidad
de alejar el objetivo de la preparación.
PRÁCTICA N° 1 (continuación): CÉLULAS Y ORGANELAS INTRODUCCIÓN AL TEMA La célula constituye la unidad morfológica y fisiológica de la estructura de los seres vivos. El tamaño, la forma de las células es variable y están relacionadas a la función que desempeñan, por ejemplo, la forma ramificada de las neuronas permite que estas tengan un mayor número de puntos de comunicación con otras células. La célula contiene una serie de estructuras rodeadas de membrana llamada organelas, las cuales cumplen funciones específicas y esenciales para la célula. COMPETENCIAS
- Reconoce una célula y sus partes.
- Identifica las diferentes organelas al microscopio de luz y en fotografías al microscopio electrónico.
- Diferencia algunas formas de núcleos en leucocitos de frotis sanguíneo teñido con solución Wright.
- Valora la importancia de la ausencia de un núcleo en los eritrocitos.
- Describe las estructuras del núcleo en micrografías electrónicas. MATERIALES Materiales del laboratorio Materiales^ del^ estudiante Detalle Cantidad Detalle^ Cantidad Microscopio compuesto 1 x alumno Hojas de papel Lo necesario Fotos de Láminas histológicas: (^) Lápiz de dibujo 1 Riñon con Hematoxilina fosfotungstica. 6 x mesa Lápices de colores Todos los colores Epidídimo con Ahoyama Elftman 6 x mesa Médula espinal con H/E 6 x mesa Frotis cérvico-vaginal- Papanicolau 6 x mesa Frotis sanguíneo 6 x mesa PROCEDIMIENTO
- En el laboratorio, cada estudiante se dirigirá a su microscopio y el profesor le proveerá con láminas histológicas para su observación.
- Con ayuda de la guía de práctica, el estudiante identificará los diferentes componentes celulares.
- Durante el proceso el estudiante realizará anotaciones y dibujos de lo observado en clase.
- Se motivará la participación activa del estudiante y se le evaluará al final de la práctica.
OBSERVACIONES DE MITOCONDRIAS:
En un corte de riñón (coloración hematoxilina fosfotúngstica), a menor aumento, ubique la zona cortical donde observará los corpúsculos renales y los túbulos. Pase a mayor aumento y localice la parte basal de las células de los túbulos proximales donde observará unos “filamentos” transversales de color morado o azul oscuro los cuales corresponden a las mitocondrias. Se observan dos mitocondrias de un fibroblasto por microscopía electrónica (en rojo). http://www.histologyguide.com/ OBSERVACIÓN DEL APARATO DE GOLGI En corte de epidídimo (coloración Ahoyama Elftman
- HE), a menor aumento, se observan túbulos cortados transversalmente los cuales están tapizados por un epitelio seudoestratificado cilíndrico con estereocilios. Cambie el objetivo a mayor aumento y ubique las células cilíndricas que presentan manchas de color marrón oscuro o negruzco en la parte apical de las células, las cuales corresponden al aparato de Golgi.
GLÓBULOS BLANCOS GRANULOCITOS
http://www.histologyguide.com/ Se observa un fibroblasto por microscopía electrónica, núcleo (azul), mitocondrias (rojo), retículoendoplasmático (celeste), golgi (en amarillo) y citoplasma (verde). NÚCLEO El núcleo es la estructura de mayor tamaño en las células eucarióticas. Es el centro de control genético, enél se encuentran los genes los cuales son los responsables de fijar los rasgos y características del organismo. Es así que el núcleo dirige la actividad celular, el desarrollo y funcionamiento de la célula. Es la sede de la replicación del ADN y la transcripción que forma el ARN mensajero. La forma no es única, en muchos casos está relacionada con la célula a la que pertenece predominando laforma esférica. El volumen guarda cierta proporcionalidad con el del citoplasma. Se pueden encontrar núcleos de forma irregular como los de los leucocitos. Su tamaño es mayor en células diploides que en haploides. La mayoría de las células son mononucleadas, aunque existen algunas binucleadas como las células hepáticas y cartilaginosas, multinucleadas como en los músculos estriados. Envoltura nuclear: Se basa en una doble bicapa, reforzada por fibras del citoesqueleto. En la estructura de la membrana se pueden diferenciar varios complejos proteicos que forman poros, a través de los cuales el interior del núcleo se comunica con el citosol. La envoltura también presenta ribosomas por la cara externa Nucleoplasma: También llamado carioplasma, nucleosol, jugo nuclear y cariolinfa. Se trata del medio interno que llena el núcleo, es un gel semejante al hialoplasma o citosol. Contiene principalmente agua, sales y proteínas, sobre todo enzimas relacionados con el metabolismo de los ácidos nucleicos. Nucléolo: El nucléolo es una estructura electrodensa y no está rodeado por una membrana. El Nucléolo puede ser una o más estructuras generalmente esferoidales, pero puede adoptar otras formas irregulares.Suelen encontrarse en el centro del núcleo o ligeramente desplazados hacia la periferia. Se distinguen dosporciones del nucléolo, la región granular, formada por gránulos de ARN, y la región fibrilar formada por filamentos de ARN. Una tercera región, muy difícil de observar es la denominada porción cromosómica delnucléolo, en esta se encuentran filamentos de ADN. Cromatina. El término cromatina proviene de la palabra griega "khroma", que significa coloreado. Esta cromatina es la forma en que normalmente se encuentra la molécula de ADN dentro de la célula, cuando presenta actividad biológica. La cromatina se divide en dos tipos: Eucromatina y Heterocromatina. La
heterocromatina es un tipo de cromatina que no altera su nivel de condensación o compactación a lo largo del ciclo celular, mientras que,por el contrario, la eucromatina se descondensa durante la interfase. La heterocromatina se localiza principalmente en la periferia del núcleo y la eucromatina, en el interior del nucleoplasma. Fuente: http://www.histologyguide.com/ Se observa el núcleo de la célula por microscopía electrónica, donde: No: nucleolo Eu: Eucromatina He: heterocromatina Ca: Carioteca o envoltura nuclear FORMAS NUCLEARES A menor aumento distinguir los eritrocitos de los leucocitos. Observar con la lente de 400 X las características de los eritrocitos
- Los eritrocitos se distinguen por ser células anucleadas. Con la misma lente observar las diferentes formas de los leucocitos. 1. Neutrófilos: tienen núcleo lobulado (2 a 5 lóbulos). 2. Eosinófilos: núcleo bilobulado. 3. Basófilos: núcleo lobulado. 4. Monocitos: núcleo varía de redondo a reniforme. 5. Linfocitos: núcleo ocupa casi toda la célula.