Melanie Alvarez –Clases particulares
Técnicas histológicas y manejo del microscopio óptico
Un microscopio, sea simple (una sola lente) o compuesto (lentes múltiples), es un
instrumento que aumenta el tamaño de una imagen y permite ver más detalles que
a simple vista.
Cuando la luz atraviesa un preparado histológico, cambian sus características, y
estas modificaciones se hacen visibles mediante los sistemas de lentes. El ojo
puede diferenciar variaciones de intensidad de la luz (contraste entre luz y
sombras) y de color (distintas longitudes de onda). Por eso, es necesario modificar
la luz. Las células y tejidos no coloreados se suelen captar con el microscopio como
transparentes. Con la ayuda de tinciones histológicas se logra una absorción
diferencial de la luz.
Para determinar la utilidad de un microscopio se utilizan los siguientes conceptos:
- Aumento: Es la relación entre el tamaño de la imagen y del objeto, en valores
lineales
-Poder de resolución (d): Distancia mínima que debe existir entre dos puntos
del objeto para que se visualicen separados. La calidad de una imagen (claridad
y riqueza de detalles) depende del poder de resolución de un microscopio. El
poder de resolución del ojo humano es de 0,2 mm ; el del microscopio óptico (M/
O) es de 0,2 m (micras); y el del microscopio electrónico (M/E) es de 0,2 Å
(Ångström). Se puede expresar así:
La capacidad de refracción o índice de refracción es la relación entre la
velocidad de la luz en el vacío y en el medio en cuestión. Es una medida de la
velocidad de dispersión de una onda luminosa a través del medio. La luz se
refracta al atravesar un objeto. El ángulo de refracción será tanto mayor cuanto
más finos sean los detalles.
La apertura numérica (NA) es una medida de capacidad del microscopio de
agrupar las refracciones de la luz producidas por los detalles finos del objeto.
Se expresa como NA=n x sen (n es el índice de refracción del medio que
separa el cubreobjeto del preparado de la lente frontal del objetivo, y es la
mitad del ángulo superior del haz de luz.
El poder de resolución es función de de la NA y de la longitud de onda de la luz
utilizada,
(lambda).
Cuanto menor sea d, tanto mayor será el poder de resolución. Dado que u no
puede superar 90°, el seno de u debe ser inferior a 1. En consecuencia, el NA
máximo será de 1,4 (se puede
acercar a 1,5 si se cambia el aire
que separa el cubreobjeto y el
objetivo con aceite).
El microscopio óptico (M/O)
enfoca luz visible (haz de fotones).
Está compuesto por partes
mecánicas y ópticas. Los
componentes ópticos constan de
tres sistemas de lentes:
-Condensador: Produce un haz de
luz que ilumina el objeto y proyecta
la imagen sobre el ocular.
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