LABORATORIO DE QUIMICA ANALITICA II
PRACTICA No. 1
CROMATOGRAFIA CUALITATIVA EN COLUMNA:
SEPARACION DE LOS COMPONENTES DE UNA MEZCLA DE AMINOÁCIDOS
INTRODUCCIÓN. La cromatografía es una de las técnica mas utilizadas entre los métodos instrumentales de
separación, ya que identifica de manera sencilla y rápida el número de componentes de una mezcla. El único
requisito de su implementación es que las sustancias a separar sean estables a las diferentes fases móviles. Por
sus características analíticas, la cromatografía puede ser: a) Cualitativa, que consiste solamente en la separación
de los componentes de una mezcla; b) Cuantitativa o analítica, que permite identificar y cuantificar cada uno de
los componentes de una mezcla. De acuerdo con la naturaleza de la fase estacionaria el soporte sólido ideal no
debe tener efecto en el proceso cromatográfico, solo debe servir como matriz mecánica para la fase líquida. El
soporte más común es la tierra de diatomeas o materiales que contengan grupos oxidrilo en su superficie. Así se
puede colocar una muestra de ciertas características y la separación de sus componentes se puede efectuar a
través de un gradiente de polaridad, provocado por la fase móvil, los componentes con la misma característica
serán arrastrados y separados porque son cromóforos o no.
OBJETIVO: Que el alumno comprenda los efectos de la separación de los componentes de una muestra
aminoácidos, por la aplicación de la cromatografía en columna empacada.
MATERIALES
1 Columna de Vidrio
Algodón
Papel filtro
1 Piceta con Agua
1 Vaso de Precipitados de 500 mL
1 Varilla de Vidrio
1 Embudo de vidrio
10 Tubos de ensaye con tapa rosca
1 Gradilla
4 Vaso de precipitado de 100 mL
1 Mortero con pistilo
2 Pipetas Pasteur
1 Soporte Universal
1 Pinzas de tres dedos
1 Nuez de sujeción
REACTIVOS
Silica Gel 60 GF 254 (Kieselgel 60)
Eluyentes
Agua Destilada
Acido Acético
Butano
PROFESOR
Preparar una mezcla de diferentes aminoácidos los
cuales se van a separar.
METODOLOGÍA
Lavar y secar la columna de vidrio y colocar dentro de la columna una capa muy pequeña de algodón y un
circulo de papel filtro de tamaño diametral igual a esta columna. Preparar en un vaso de precipitados de 500 mL,
una suspensión de Silica Gel 60 GF254 en agua destilada que será agitada constantemente. El preparado de esta
suspensión, será el calculado para llenar poco más la mitad del volumen de la columna. Adicionar con cuidado y
con agitación constante a través de un embudo de vidrio de boca ancha, ésta mezcla a la columna, dejar que se
sedimente el sólido (fase estacionaria), permitiendo que el agua destilada fluya por la salida de la columna (fase
móvil). Se debe evitar que el la fase estacionaria se seque, ya que el soporte se cuarteara, por lo cual se
adicionará constantemente el liquido (observe la figura).
Mediante una pipeta Pasteur, tomar una cantidad dela mezcla de aminoácidos a separar y colocarla con cuidado
en la parte superior de la fase estacionaria. Inmediatamente adicionar volúmenes pequeños de agua hasta
completar 20mL, posteriormente y de la misma forma, 20 mL de ácido acético y 20 mL de butano. En cada etapa
colectar en tubos de ensaye cada fracción eluída por fase móvil utilizada. Las muestras será conservadas y se
llevaran a sequedad, mediante evaporación, para utilizarlas en la practica 2.
