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PRACTICA 10 DE MICROBIOLOGIA, Guías, Proyectos, Investigaciones de Microbiología

IDENTIFICACION DE MICROORGANISMO POR PRUEBAS BIOQUIMICAS

Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones

2019/2020

Subido el 20/09/2020

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UNIVERSIDA DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
INFORME DE LABORATORIO
CARRERA DE QUÍMICA FARMACIA
MICROBIOLOGIA I PRÁCTICA
DOCENTE:
QF MARIANITA RENDÓN M. MS
QUINTO SEMESTRE
Práctica Nº 10
TEMA: IDENTIFICACION DE ENTEROBACTERIAS
NOMBRE: POZO REAL JOSUE ALEJANDRO
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA:
1. Sembrar en medios selectivos para el crecimiento de las Enterobacterias
2. Realizar la técnica de Gram para la identificación microscópica de bacilos negativos
INTRODUCCIÓN
Las Enterobacterias son una familia heterogénea y amplia de bacilos Gram negativos que residen en el
colon del hombre sin causar enfermedad aunque con frecuencia son causantes de un número
considerable de infecciones, tanto en pacientes con inmunidad conservada como en inmunodeprimidos
ya que en el paciente hospitalizado las enterobacterias colonizan el tubo digestivo, la orofaringe, el
aparato genitourinario y la piel mientras que en el ambiente hospitalario pueden aislarse del agua,
catéteres, sondas, sueros, antisépticos, equipos de respiración mecánica, etc., nichos ambientales con
los que pueden entrar en contacto los pacientes hospitalizados y debido a su ubicuidad dentro y fuera
del cuerpo a menudo causan infecciones oportunistas, siendo causa frecuente de infecciones
nosocomiales.
Algunas enterobacterias de importancia clínica son:
PRUEBA DE HIERRO TRIPLE AZUCAR
El agar triple azúcar hierro contiene tres carbohidratos (glucosa, lactosa y sacarosa). Cuando dichos
carbohidratos se fermentan, la producción resultante de ácido es detectada por el indicador rojo fenol.
. Dado que la lactosa y la sacarosa se encuentran presentes en concentraciones mucho más elevadas
que la glucosa, la formación de ácido en la base del tubo se debe a dichos azúcares, mientras que la
formación de ácido a partir de la glucosa
PRUEBA DEL CITRATO
Es uno de los test del IMVIC (Indol, Rojo de metilo, Vogues-proskauer y Citrato) usado para
diferenciar enterobacterias. Hay microorganismos capaces de utilizar el citrato como única fuente de
carbono produciendo alcalinidad, se detecta en un medio de cultivo con 57 citrato como única fuente
de carbono mediante el crecimiento y la alcalinización del medio Este aumento de pH se visualiza con
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Proteus mirabilis
Shigellasonnei
Salmonella typhi
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¡Descarga PRACTICA 10 DE MICROBIOLOGIA y más Guías, Proyectos, Investigaciones en PDF de Microbiología solo en Docsity!

UNIVERSIDA DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

INFORME DE LABORATORIO

CARRERA DE QUÍMICA FARMACIA

MICROBIOLOGIA I PRÁCTICA

DOCENTE:

QF MARIANITA RENDÓN M. MS

QUINTO SEMESTRE

Práctica Nº 10 TEMA: IDENTIFICACION DE ENTEROBACTERIAS NOMBRE: POZO REAL JOSUE ALEJANDRO OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA:

  1. Sembrar en medios selectivos para el crecimiento de las Enterobacterias
  2. Realizar la técnica de Gram para la identificación microscópica de bacilos negativos INTRODUCCIÓN Las Enterobacterias son una familia heterogénea y amplia de bacilos Gram negativos que residen en el colon del hombre sin causar enfermedad aunque con frecuencia son causantes de un número considerable de infecciones, tanto en pacientes con inmunidad conservada como en inmunodeprimidos ya que en el paciente hospitalizado las enterobacterias colonizan el tubo digestivo, la orofaringe, el aparato genitourinario y la piel mientras que en el ambiente hospitalario pueden aislarse del agua, catéteres, sondas, sueros, antisépticos, equipos de respiración mecánica, etc., nichos ambientales con los que pueden entrar en contacto los pacientes hospitalizados y debido a su ubicuidad dentro y fuera del cuerpo a menudo causan infecciones oportunistas, siendo causa frecuente de infecciones nosocomiales. Algunas enterobacterias de importancia clínica son: PRUEBA DE HIERRO TRIPLE AZUCAR El agar triple azúcar hierro contiene tres carbohidratos (glucosa, lactosa y sacarosa). Cuando dichos carbohidratos se fermentan, la producción resultante de ácido es detectada por el indicador rojo fenol. . Dado que la lactosa y la sacarosa se encuentran presentes en concentraciones mucho más elevadas que la glucosa, la formación de ácido en la base del tubo se debe a dichos azúcares, mientras que la formación de ácido a partir de la glucosa PRUEBA DEL CITRATO Es uno de los test del IMVIC (Indol, Rojo de metilo, Vogues-proskauer y Citrato) usado para diferenciar enterobacterias. Hay microorganismos capaces de utilizar el citrato como única fuente de carbono produciendo alcalinidad, se detecta en un medio de cultivo con 57 citrato como única fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinización del medio Este aumento de pH se visualiza con Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Proteus mirabilis Shigellasonnei Salmonella typhi

el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH 7,6. Cuando el resultado es positivo el medio de cultivo se vuelve azul y cuando es negativo se mantiene verde. (Vullo D., M. Wachsman, L. Alche,

PRUEBA DE LA UREA Permite evidenciar la presencia de la enzima ureasa en la bacteria. Se utiliza un medio de color naranja que por medio de un indicador de pH vira a fucsia cuando existe esta enzima que hidroliza la urea presente en el medio. PRUEBA DE LIA Este medio evidencia si las bacterias descarboxilan la lisina o desaminan la lisina. También permite ver la formación de gas y de ácido sulfhídrico. La descarboxilación de la lisina se observa por un color violáceo en la profundidad del medio y la desaminación de la lisina por un color rojo en la superficie. PRUEBA DE MIO Este medio es semisólido, a diferencia de los anteriores que son sólidos. Permite el estudio de indol a partir de triptófano, por ser semisólido permite ver la movilidad de la bacteria, ya que cuando es así el medio se vuelve muy turbio, porque la bacteria puede crecer en todo el medio. También permite observar la descarboxilación de la ornitina que se evidencia por un color violáceo en el medio. El indol se visualiza agregando un reactivo que provocará la formación de un anillo color rojo. TODAS LAS PRUEBAS SE REPRESENTAN EN TABLAS LIA (Agar lisina-fierro) POSIBLES RESULTADOS

INFORME INTERPRETACION

Morado/Morado K/K Lisina desaminasa negativa y Lisina descarboxilasa positiva Morado/Amarillo K/A Lisina desaminasa negativa y Lisina descarboxilasa negativa Rojo/Morado R/A Lisina desaminasa positiva y lisina descarboxilasa positiva PRUEBA TSI (AGAR TRIPLE AZÚCAR-FIERRO) Amarillo/ Amarillo A/A Fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa Rojo/Amarillo K/A No fermentación de Lactosa, Fermentación de glucosa y sacarosa Rojo/Rojo K/K No fermentación de glucosa, ni lactosa, ni sacarosa PRUEBA UREA POSIBLES RESULTADOS INTERPRETACION

PROCEDIMIENTO

RESULTADOS

PRUEBA RESULTADO

Observar y anotar Caract. Macroscópicas de placa de estudio Identificar género y especie de la bacteria en estudio Incubar a 37º C por 18 a 24 h Observar y anotar resultados Realizar la siembra en los medios de identificación  Inocula en medio TSI por picadura y estría en la superficie.  Inocula el medio SIM por picadura.  Inocula el medio Citrato de Simmons por estría en la superficie.  Inocula el medio LIA por picadura paralela.

AGAR HIERRO TRIPLE AZUCAR

FERMENTA:

 GLUCOSA(-)

 SACAROSA(-)

 LACTOSA(-)

 H2S(+)

 K/K

UREASAUreasa negativo(-)  No hay cambio de color del medio CITRATOCitrato negativo (-)  Se mantiene el color verde del medio, no utiliza el indol como única fuente de carbono PRUEBA MIO

RESULTADO

 No presencia del anillo color rosa: indol (-)  No hay turbidez en donde se realizo el punto de inoculacion: Movilidad(-)  Se fermento la glucosa produciendo un color amarillo en el fondo: ornitina descarboxilasa (-) LIA (Agar lisina-fierro)  se observa acidificación (A) con viraje hacia el amarillo en la columna del tubo, y alcalinización (color púrpura) en la zona inclinada: Lisina decarboxilasa(-)

CONCLUSIONES

 En conclusión; cada Enterobacteria posee características macroscópicas similares pero no iguales y sus caracteres microscópicos son de gran importancia para su reconocimiento y su clasificacion pertinente las pruebas bioquímicas para la identificación de enterobacterias son de suma RECOMENDACIONES  No utilizar el Medio L.I.A. para aislamiento general o selectivo, ni para manutención de cepas.  Luego de comprobar el resultado de la movilidad y la ornitina agregar el Indol reactivo en la prueba MIO. BIBLIOGRAFÍA  Eisenstein BI, Zaleznik DF. Enterobacteriaceae. En: Mandell GL, Bennett JE, Dolin R, editors: Principles and Practice of Infectious Diseases. New York: Churchill Livingstone; 2000; p. 2294-  J. Parker, 2003. Brock. Biología de los microorganismos. 10ªEd. Prentice Hall Iberia. España  Vullo, D., M. Wachsman, L. Alche. 2000. Microbiología en Práctica. Manual de laboratorio para la enseñanza de Microbiología básica y aplicada. 1ª edición. Atlante S. R. L. Argentina  MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. 1, Williams & Wilkins, Baltimore.