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IDENTIFICACION DE MICROORGANISMO POR PRUEBAS BIOQUIMICAS
Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones
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Práctica Nº 10 TEMA: IDENTIFICACION DE ENTEROBACTERIAS NOMBRE: POZO REAL JOSUE ALEJANDRO OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA:
el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH 7,6. Cuando el resultado es positivo el medio de cultivo se vuelve azul y cuando es negativo se mantiene verde. (Vullo D., M. Wachsman, L. Alche,
PRUEBA DE LA UREA Permite evidenciar la presencia de la enzima ureasa en la bacteria. Se utiliza un medio de color naranja que por medio de un indicador de pH vira a fucsia cuando existe esta enzima que hidroliza la urea presente en el medio. PRUEBA DE LIA Este medio evidencia si las bacterias descarboxilan la lisina o desaminan la lisina. También permite ver la formación de gas y de ácido sulfhídrico. La descarboxilación de la lisina se observa por un color violáceo en la profundidad del medio y la desaminación de la lisina por un color rojo en la superficie. PRUEBA DE MIO Este medio es semisólido, a diferencia de los anteriores que son sólidos. Permite el estudio de indol a partir de triptófano, por ser semisólido permite ver la movilidad de la bacteria, ya que cuando es así el medio se vuelve muy turbio, porque la bacteria puede crecer en todo el medio. También permite observar la descarboxilación de la ornitina que se evidencia por un color violáceo en el medio. El indol se visualiza agregando un reactivo que provocará la formación de un anillo color rojo. TODAS LAS PRUEBAS SE REPRESENTAN EN TABLAS LIA (Agar lisina-fierro) POSIBLES RESULTADOS
Morado/Morado K/K Lisina desaminasa negativa y Lisina descarboxilasa positiva Morado/Amarillo K/A Lisina desaminasa negativa y Lisina descarboxilasa negativa Rojo/Morado R/A Lisina desaminasa positiva y lisina descarboxilasa positiva PRUEBA TSI (AGAR TRIPLE AZÚCAR-FIERRO) Amarillo/ Amarillo A/A Fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa Rojo/Amarillo K/A No fermentación de Lactosa, Fermentación de glucosa y sacarosa Rojo/Rojo K/K No fermentación de glucosa, ni lactosa, ni sacarosa PRUEBA UREA POSIBLES RESULTADOS INTERPRETACION
Observar y anotar Caract. Macroscópicas de placa de estudio Identificar género y especie de la bacteria en estudio Incubar a 37º C por 18 a 24 h Observar y anotar resultados Realizar la siembra en los medios de identificación Inocula en medio TSI por picadura y estría en la superficie. Inocula el medio SIM por picadura. Inocula el medio Citrato de Simmons por estría en la superficie. Inocula el medio LIA por picadura paralela.
UREASA Ureasa negativo(-) No hay cambio de color del medio CITRATO Citrato negativo (-) Se mantiene el color verde del medio, no utiliza el indol como única fuente de carbono PRUEBA MIO
No presencia del anillo color rosa: indol (-) No hay turbidez en donde se realizo el punto de inoculacion: Movilidad(-) Se fermento la glucosa produciendo un color amarillo en el fondo: ornitina descarboxilasa (-) LIA (Agar lisina-fierro) se observa acidificación (A) con viraje hacia el amarillo en la columna del tubo, y alcalinización (color púrpura) en la zona inclinada: Lisina decarboxilasa(-)
En conclusión; cada Enterobacteria posee características macroscópicas similares pero no iguales y sus caracteres microscópicos son de gran importancia para su reconocimiento y su clasificacion pertinente las pruebas bioquímicas para la identificación de enterobacterias son de suma RECOMENDACIONES No utilizar el Medio L.I.A. para aislamiento general o selectivo, ni para manutención de cepas. Luego de comprobar el resultado de la movilidad y la ornitina agregar el Indol reactivo en la prueba MIO. BIBLIOGRAFÍA Eisenstein BI, Zaleznik DF. Enterobacteriaceae. En: Mandell GL, Bennett JE, Dolin R, editors: Principles and Practice of Infectious Diseases. New York: Churchill Livingstone; 2000; p. 2294- J. Parker, 2003. Brock. Biología de los microorganismos. 10ªEd. Prentice Hall Iberia. España Vullo, D., M. Wachsman, L. Alche. 2000. Microbiología en Práctica. Manual de laboratorio para la enseñanza de Microbiología básica y aplicada. 1ª edición. Atlante S. R. L. Argentina MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. 1, Williams & Wilkins, Baltimore.