Práctica#7
Pasos:
Solución de sustrato
Disolver 10 µl de peróxido de hidrógeno al 30% y 40 µl de Guayacol en 20 ml de buffer
fosfato pH 6
- De la solución de sustrato, sacar diferentes cantidades y variar la cantidad de H2O2
llevándolo a un volumen máximo de 2ml (volumen de un eppendorf) como se muestra
en la tabla 1.
Muestra sustrato(mL) H2O2 30% (mL)
blanco 2 0
1 1,8 0,2
2 1,6 0,4
3 1,4 0,6
4 1,2 0,8
5 1 1
6 0,8 1,2
7 0,6 1,4
8 0,4 1,6
9 0,2 1,8
Tabla 1. Cantidades de sustrato y h2o2
- Calibrar el espectrofotómetro con el blanco a una longitud de 470nm.
- Para medir la absorbancia tomar 10microlitros de la enzima con una dilución 1/50 y
adicionar los 2 ml de cada muestra
- Repetir procedimiento de la práctica anterior, realizando una gráfica de abs vs tiempo,
determinando la actividad enzimática, seguido a esto, realizar una gráfica de actividad
enzimática vs concentración de sustrato.