INSTITUTO POLÍTECNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
3IM2
PRÁCTICA No.2 “DETERMINACIÓN DE AMINOACIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO
LIBRES, MÉTODO DE SANGER”
Introducción:
Las proteínas se dividen en cuatro niveles de
estructuras: primaria, secundaria, terciaria y
cuaternaria.
Estructura primaria.- Est/ constituida por la
secuencia de amino/cidos de la cadena
polipeptídica. Las proteínas se diferencian por:
El número de amino/cidos, el tipo de
amino/cidos y el orden en que se encuentran
los amino/cidos dispuestos.
Estructura secundaria.- Es el plegamiento
que forma la cadena polipeptídica debido a la
formación de puentes de hidrógeno entre los
/tomos que forman el enlace peptídico, las
siguientes estructuras son las m/s frecuentes:
Hélice y Lamina.
Estructura Terciaria.- Ocurre cuando existen
atracciones entre L/minas β y Hélices-. Esta
estructura es específica para cada proteína y
determinar/ la función de dicha proteína.
Da lugar a dos tipos de proteínas: 1) Fibroso:
las hélices- o l/minas que lo conforman,
mantienen su orden y no tienen grandes
modificaciones, solo ligeros giros
longitudinales.>
2) globular su forma es aproximadamente
esférica. En este tipo de estructuras se forman
regiones con estructuras al azar, hélices- y
l/minas y acodamientos.
Estructura Cuaternaria.- La interacción de
m/s de una cadena polipeptídica. Es la
asociación de diferentes subunidades para
formar complejos funcionales, en forma de
dímeros, (unión de dos monómeros) trímeros
(unión de tres monómeros), etc.
La secuenciación de proteínas es la
Organización de los amino/cidos en una
proteína. Las proteínas pueden producir 20
clases diferentes de amino/cidos. La
estructura y la función de cada tipo de proteína
est/n determinadas por el tipo de amino/cidos
usados en su producción y por la forma en que
estos se organizan.
Sanger demostró que las proteínas tenían una
estructura específica, una composición
química definida. Para lograrlo, utilizo el
«reactivo de Sanger»: el fluorodinitrobenceno
(FDNB), un derivado amarillento del benceno
reacciona con los grupos amino expuestos de
la proteína y, en particular, con el grupo amino
N-terminal de un extremo de la cadena.
Edman es un método de secuenciación de
amino/cidos en un péptido el residuo amino
terminal se etiqueta y se separa del péptido sin
afectar a los enlaces peptídicos entre los otros
residuos.
Objetivos
conocer el método Sanger y Edman
identificar el amino/cido alfa-amino
terminal en las cadenas de hemoglobina
observar la hidrólisis de la hemoglobina
aprender a calcular los Rf
Análisis de técnica
Para realizar la identificación del aa N-terminal
de la hemoglobina, se har/ una técnica
conocida como “método de Sanger” la cual
necesita una serie de soluciones de vital
importancia para funcionar; se comienza con
agregar NaHCO₃ 4.2% a la muestra de
hemoglobina ya que el DNFB debe de
funcionar en un medio b/sico adem/s que el
NaHCO₃ tiene la función de desprotonar el
grupo amino de esta proteína para después
unirse a la molécula del DNFB. Esta no es una
reacción espont/nea, así que deber/ agitarse
y/o para acelerar dicha reacción ponerse a
baño maría hasta alcanzar los 35°.
Posteriormente, se obtendr/ la proteína
dinitrofenilada y para detener la reacción se
agregar/ HCl [3N] produciendose un cambio
de color , aquí tenemos dos productos m/s, el
DNFB sin reaccionar y la proteína no
