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El propósito de esta práctica es adquirir destreza en el manejo del microscopio óptico compuesto, comprendiendo la función de sus componentes (sistema mecánico, óptico y de iluminación) y logrando un enfoque nítido de muestras biológicas a diferentes aumentos. 2. Metodología y Preparación Se procedió a la preparación de muestras en fresco utilizando la técnica de montaje húmedo. El proceso incluyó: Colocación de la sección delgada de la muestra sobre el portaobjetos. Adición de una gota de reactivo (agua destilada o tinción específica como azul de metileno o lugol).
Tipo: Apuntes
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El desarrollo de la biología celular se produce en forma paralela a la invención de instrumentos y técnicas biofísicas y bioquímicas que extienden los sentidos a nuevos límites para acrecentar el conocimiento de la estructura y funcionamiento de la célula. El acceso a este tipo de conocimiento resulta dificultoso por las células que son pequeñas y transparentes. El ojo humano solo puede discriminar dos puntos separados por más de 0.1mm o 100um, considerado su límite de resolución. La mayoría de las células son mucho más pequeñas y se necesita del microscopio óptico para estructuras más pequeñas, que miden entre 0.4 y 200nm se requiere del microscopio electrónico. Es importante que se reconozca que, el microscopio es la principal herramienta de trabajo del que estudia la célula y los tejidos. De aquí que los primero conocimientos teóricos prácticos de la biología celular deben estar dirigidos a conocer y utilizar correctamente el microscopio óptico. El microscopio es un instrumento básico para el estudio de la biología, ya que nos permite percibir detalles de organismos y de estructuras que no podrían ser observados directamente, por simple inspección ocular. Para observar elementos tan pequeños es necesario disponer de lentes de aumento. Estos elementos se conocen desde el tiempo de Arquímedes, pero la óptica como microscopio no solo depende de su capacidad de aumento sino, lo más importante es su capacidad para resolver detalles. Para el estudio del material biológico se dispone de varios tipos de microscopio los cuales se pueden clasificar básicamente de acuerdo al tipo de fuente luminosa que usan, siendo el microscopio de campo claro, de uso común. Este es un microscopio compuesto que utiliza dos sistemas de lentes; el primero produce una imagen amplificada del objeto, y el segundo agranda la imagen formada por el primero. Para formar una imagen a partir de un corte histológico usa luz visible, por esto la muestra debe ser lo bastante fina como para que los haces de luz puedan atravesarla. También se usan métodos de tinción, según las necesidades, con el fin de aumentar los detalles en la imagen. El campo del microscopio esta intensamente iluminado, mientras que los objetos observados aparecen más detalles oscuros. En general con este microscopio se pueden alcanzar los 1000 aumentos, pudiendo llegar con ciertas modificaciones a 2000 - aumentos. El ojo humano no logra distinguir objetos de menos de 50um de diámetro ni consigue resolver dos líneas separadas por menos de 100um (es decir, la ve como una sola línea). Esta tecnología muy útil en el estudio de la célula ha tenido una evolución en el tiempo mejorando su capacidad resolutiva.
Curso de la luz en el microscopio: El condensador proyecta un cono de luz sobre el espécimen que está siendo examinado en el microscopio. Después de atravesar la muestra, ese haz luminoso en forma de cono, penetra en el objetivo ; esta lente proyecta una imagen aumentada en el plano focal del ocular, que nuevamente la amplía. Por fin la imagen provista por el ocular puede ser percibida por la retina del ojo como una imagen situada a 25cm de la lente ocular. La ampliación total dada por un microscopio es igual al aumento del objetivo multiplicado por el aumento del ocula r. Sistema óptico: el lente que se encuentra más cercano al espécimen se denomina objetivo , tiene una distancia focal corta y, forma una imagen real y aumentada que es el objeto del segundo sistema de lentes denominado ocular. El condensador tiene la función de condensar la luz sobre el espécimen. Se compone de un sistema óptico de observación y un sistema óptico de iluminación; los cuales constan de:
Objetivo: está formado por un sistema de pequeños lentes ubicados muy cercanas una de la otra la que se halla en el extremo distal del objetivo se denomina lente frontal. Los objetivos pueden ser objetivos en seco (no hay ninguna sustancia interpuesta entre la lente frontal y el preparado), u objetivos de inmersión (entre la lente frontal y el preparado se coloca una sustancia cuyo índice de refracción es muy similar al del vidrio.
Poder de penetración: es la propiedad de permitir la observación simultánea de varios planos del preparado. Es inversamente proporcional a la escala de reproducción o aumento. Distancia focal: es la distancia de la lente frontal al preparado colocada en la platina, cuando está enfocado. Disminuye cuando aumenta la escala de reproducción del objetivo. Aumento total: debemos notar que el ocular también tiene un aumento, por lo tanto el aumento total de la imagen que observamos es el producto entre el aumento del objetivo y el del ocular. Apertura numérica: (AN) este valor corresponde a la capacidad de un lente objetivo de utilizar más o menos rayos luminosos para formar la imagen este valor se encuentra gravada en la manga del lente siendo de 0.25 para el objetivo de 10X, de 0.65 para el de 40X y 1.25 para el de 100X. Donde, n es el índice de refracción que atraviesa el haz y a es el ángulo de apertura. Poder y límite de resolución: el poder de resolución (PR) es la capacidad de un instrumento para producir imágenes distintas de puntos situados muy cerca al uno del otro en el objeto. Depende la longitud de onda (λ) de la luz utilizada y de la (AN) del objetivo utilizado. El límite de resolución (LR) es la distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que puedan ser discriminados como tales. El PR está dado por: En donde 0.61 es una constante, λ es la longitud de onda de la luz utilizada y AN es la apertura numérica del objetivo en uso.
El límite de resolución es la inversa del poder de resolución, de manera que cuando mayor sea el poder de resolución de un instrumento menor será el límite de resolución. El máximo PR de un microscopio óptico es aproximadamente 0.15um, con la cual puede deducirse que para aumentar el PR de instrumento o disminuir el LR, se puede disminuir λ y aumentar la AN. Disponer de corpúsculos, que al imprimirles grande velocidades se comportan como ondas, este es el caso de los electrones en los microscopios electrónicos.
1. Identificar las partes mecánicas y ópticas de un microscópico óptico. 2. Precisar la función de cada componente mecánico y óptico. 3. Manejar el microscopio óptico, observando una lamina de un tejido preparado con la técnica histológica de rutina y coloreada con hematoxilina-eosina (H.E).
Microscopio óptico:
Las células son las unidades básicas de los seres vivos. La mayoría de ellas son de pequeño tamaño por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su visualización. La exigencia del estudio de las
estructuras celulares a llevado a la invención y mejoramiento practico de esta herramienta muy utilizada en las disciplinas de la biología y la medicina incorporándose ahora en las ciencias exactas para la caracterización de muestras químicas. En la tabla siguiente se muestra el rango de resolución comparados con otras técnicas.
mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
Aplicaciones: Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticas. También se le conoce como microscopio de luz, microscopio fotónico (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Antoni van Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una única lente pequeña y convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra o espécimen). Este uso de una única lente convexa se conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros aparatos ópticos.
01 microscopio óptico compuesto. Muestra de glóbulos rojos.
1. Identifique cada una de las partes de un microscopio óptico compuesto escribiendo el nombre de cada una de las partes. 1. Ocular →Primer aumento 2. Revolver → Cambia de objetivos 3. Platina → Lugar donde se pone la muestra 4. Desplazador de la platina → Desplaza platina sentido en el eje anteroposterior y latero-lateral 5. Tornillo macrométrico → Sube o baja la platina de forma brusca 6. Tornillo micrométrico → Sube o baja la platina de forma lenta 7. Abertura del condensador o palanca del diafragma (Regula la intensidad de luz entrada) 8. Condensador 9. Ajuste de la altura del condensador 10. Ajuste del condensador 11. Toma corriente 12. Encendido-Apagado 13. Diafragma de campo(Regulador de luz) 14. Control de etapas(Regulador de luz) 15. Regulador de luz (Regulador de luz) 2. Con sumo cuidado realice las siguientes maniobras: Observé un lente ocular y precise el número que muestra la superficie ocular, que es de X15.
Seguidamente llenamos el siguiente cuadro de medidas de los objetivos (lambda=0.5um)
3. Cálculos del LR: Para el aumento medio seco: Calculando el LIMITE de resolución (PR): Calculando el PODER de resolución (LR): Para el aumento alto seco: Calculando el LIMITE de resolución: