UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
PRACTICA Nª01 : ESPECTOFOTOMETRIA
DOCENTE : Dra. HILDA VICTORIA COILA DE LA CRUZ
ALUMNA : ISABELLE CASANOVA LEDEZMA
CICLO: 03
AÑO :2021
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practica nº1 ESPECTOFOTOMETRIA, Apuntes de Bioquímica
practica nº1 ESPECTOFOTOMETRIA
Tipo: Apuntes
2020/2021
1 / 7
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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
PRACTICA Nª01 : ESPECTOFOTOMETRIA
DOCENTE : Dra. HILDA VICTORIA COILA DE LA CRUZ ALUMNA : ISABELLE CASANOVA LEDEZMA CICLO: 03 AÑO :
OBJETIVOS:
Conocer el funcionamiento del espectrofotómetro. Conocer la diferencia entre un fotocolorímetro y un espectrofotómetro. Graficar el espectro de luz. Indagar la relación matemática entre la absorbancia y tramitación. MARCO TEORICO La espectrofotometría tiene relación con el tamaño de porciones relativas de luz absorbida por una muestra, en funcionalidad de la longitud de onda. Cada elemento de la solución tiene su jefe de absorción de luz característico comparando la longitud de onda y la magnitud del mayor de absorción de luz de una muestra versus resoluciones estándar, es viable establecer la identidad y la concentración de elemento disueltos en la muestra (solución incógnita). Los procedimientos espectrofotométricos se fundamentan en el tamaño de la radiación electromagnética emitida o absorbida por la materia; los procedimientos de emisión usan la radiación emitida una vez que un analito es excitado por energía térmica, eléctrica o radiante; los procedimientos de absorción permanecen basados en el decrecimiento de la potencia de la radiación electromagnética como resultado de la absorción que se genera en su relación con el estudio. Si se aplica energía a un átomo, esta podría ser absorbida y un electrón externo podría ser promovido a una configuración famosa como estado excitado; ya que aquel estado es desequilibrado, el atomo retornara rápidamente al estado importante, emitiendo energía. La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas es dependiente de la composición de las moléculas, y es característica para cada sustancia química. Por consiguiente se plantea que la espectrofotometría es importante en el análisis de sustancias desconocidas. Una vez que la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida. El color de las sustancias se debería a que estas absorben ciertas longitudes de onda de luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasan a nuestros propios ojos esas longitudes de onda no absorbidas. Ley de Bourguer-Lambert- Beer: Bourguer, Lambert y Beer, por medio de sus visualizaciones establecieron interacciones de la alteración de la magnitud de luz transmitida por una muestra con el espesor de ella o con la concentración de la sustancia, para materiales translúcidos. Estas interrelaciones son conocidos como la ley de Bourguer-Lambert-Beer o ley general de la espectrofotometría que posibilita encontrar la concentración de una especie química desde el tamaño de la magnitud de luz absorbida por la muestra. Esta ley se puede manifestar en términos de potencia de luz o de magnitud de luz, aceptando luz monocromática, como: It/ I0= 10-e bc Donde: It, es la magnitud de la luz transmitida por la muestra.
DISCUSION DE LOS RESULTADOS
Los resultados logrados en la curva de calibración presentaron una baja linealidad y pendiente desigual, lo cual proporcionó un bajo nivel de confianza en su sensibilidad al K2Cr2O7 presente en la solución jefe. Se infiere que los valores de absorbancia fueron incorrectos, debido a que como se sabe, la concentración y la absorbancia son valores de manera directa proporcional, a más grande concentración más grande absorbancia y a la inversa (Química analítica, GaryD. Christian.2° ed. Ed. Limusa.1981)El Dicromato de Potasio se emplea para medir la precisión de la longitud de onda (340 nm) así como la función de contestación de los espectrofotómetros. Esta solución es usada para la calibración de sistemas ópticos (Wiener, Lab,2000). Otros estudios de medicina veterinaria usan el cromo para elaborar curvas de calibración para medición espectrofotométrica en pruebas de digestibilidad, en determinaciones de tasa de pasaje gastrointestinal y consumo voluntario de rumiantes en estudios de nutrición animal. (Sandoval-Castro et.al.,2001) CONCLUSIONES Se ha llegado a la conclusión de que la espectrofotometría es un procedimiento analítico indirecto ya que se fundamenta en la medición de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de enorme utilidad actualmente para la identificación de un analito en una muestra problema. La espectrofotometría es el procedimiento más utilizado, ya que es sencillo, específico y sensible. CUESTIONARIO 1.- Explique el mecanismo de funcionamiento de un espectrofótometro Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos. Hay varios tipos de espectrofotómetros, puede ser de absorción atómica o espectrofotómetro de masa y visuales. Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones:
- Dar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra
- Indicar indirectamente qué cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en la muestra
Componentes de un espectrofotómetro Cubetas de espectofotometría. En un primer plano, dos de cuarzo aptas para el trabajo con luz ultravioleta; en segundo plano, de plástico, para colorimetría (es decir, empleando luz visible). Fuente de luz La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes condiciones: estabilidad, direccionalidad, distribución de energía espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de wolframio (también llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón y lámpara de deuterio que es utilizada en los laboratorios atómicos. Monocromador El monocromador aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática. Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida. Compartimiento de Muestra Es donde tiene lugar la interacción, R.E.M con la materia (debe producirse donde no haya absorción ni dispersión de las longitudes de onda). Es importante destacar, que durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su máxima expresión, con base en sus leyes de absorción, en lo que concierne al paso de la molécula de fundamental-excitado. Detector El detector, es quien detecta una radiación y a su vez lo deja en evidencia, para posterior estudio. Hay de dos tipos: a) Los que responden a fotones; b) Los que responden al calor. Fotodetectores En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para percibir la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes móviles del equipo. 2.- ¿Que diferencias existen un fotocolorímetro y un espectrofotómetro? Los espectrofotómetros son espectrómetros que permiten medir la relación entre la energía radiante de dos rayos, lo cual es necesario para medir la absorbancia. Los fotocolorímetros emplean filtro para seleccionar las longitudes de onda en combinación con un transductor de radiación adecuado, a diferencia de los espectrofotómetros en los que la longitud de onda se puede modificar continuamente, por lo que es posible registrar espectros de absorción. Otra diferencia radica en que la mayoría de los modelos de espectrofotómetros pueden cubrir la región UV/visible y a veces la infrarroja cercana, mientras los foto colorímetros se emplean más comúnmente en la región visible.
5.- Construya una curva de calibración con los siguientes valores: Standard 1 Standard 2 Standard 3 Standar4 Estándar 5 Concentración 5 mg/d 10 mg/d 20 mg/d 30 mg/d 40 mg/d Absorbancia 0.025 0.050 0.100 0.150 0. Con la curva obtenida halla la concentración de las siguientes muestras, sabiendo que sus absorbancias fueron: Muestra A…………………. 0. Muestra B………………….. 0. Muestra C………………….. 0. BIBLIOGRAFIA https://repositorio.innovacionumh.es/Proyectos/P_22CursoMateriales/ Miguel_Angel_Sogorb/Wimba/Espectroscopia_05.htm https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/colorImetro-y- espectrofotOmetro#:~:text=La%20diferencia%20fundamental%20entre %20un,onda%20determinada%20mediante%20filtros%20fijos. https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/ 08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf