Prácticas de Microbiología: Técnicas de Siembra y Morfología Bacteriana | Ejercicios de Microbiología

PRÁCTICA NO. 4 “TÉCNICAS DE SIEMBRA PARA HONGOS Y BACTERIAS”

Objetivos: Practicar las diferentes técnicas de siembra para el desarrollo de cultivos y subcultivos de

hongos y bacterias, en medios de cultivo dispensados en tubos y cajas Petri, así como, en medios

de diferente composición y estado. Así como desarrollar en los estudiantes la capacidad de selección

de una metodología específica, de acuerdo a los criterios proporcionados, para la aplicación correcta

de las técnicas de siembra de acuerdo al microorganismo y al objetivo de la prueba.

Introducción: El objetivo de esta práctica fue identificar diferentes técnicas de siembra para el

desarrollo de cultivos y sus cultivos de hongos y bacterias, en medios de cultivo como las cajas Petri.

Resumen: Para realizar la siembra (proceso de colocar las bacterias en medios de cultivo), hoy en

el caso de esta práctica usamos modo de jitomate, sin embargo, el cultivo se puede realizar a partir

de muestras biológicas (orina, pus, secreciones, etc.), hoja de análisis de control de calidad

(alimentos, agua, cosméticos, medicamentos, etc.), así como también procedentes de muestras

ambientales (agua, suelo, etc.) Con esta práctica logramos conocer la morfología microscópica y

macroscópica a partir de su crecimiento en los medios de cultivo. Para el desarrollo de esta práctica

también fue necesario aprender técnicas de siembra, además de la importancia del uso de material

adecuado.

Elementos importantes:

• Mechero (de alcohol o bunsen)

• Asa bacteriológica

• Cámaras de flujo laminar o espacio adecuado

• medios de cultivo ya preparados a 37 °C

Se entiende por medio de cultivo puro a una población de células las cuales todas proceden de una

misma célula. Existe una gran variedad de técnicas por medio de las cuales las diferentes especies

pueden ser aisladas en cultivo puro. En nuestro caso, para la elaboración de la práctica usamos la

técnica de estudio cruzada por la cual se busca tener colonias separadas a partir de un inóculo.

Actividad Práctica:

Materiales y equipos.

• 1 caja de Petri con agar PDA

• 4 cajas de Petri con agar Nutritivo

• 1 tubo con 5mL de Caldo Nutritivo

• 1 tubo con agar SIM

• 2 tubos con agar Nutritivo en bisel

• 1 tubo con agar PDA en bisel

• 2 hisopos estériles en tubo taparrosca

• 1 asa bacteriológica

• 1 asa micológica

• 1 mechero Bunsen

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PRÁCTICA NO. 4 “TÉCNICAS DE SIEMBRA PARA HONGOS Y BACTERIAS”

Objetivos: Practicar las diferentes técnicas de siembra para el desarrollo de cultivos y subcultivos de hongos y bacterias, en medios de cultivo dispensados en tubos y cajas Petri, así como, en medios de diferente composición y estado. Así como desarrollar en los estudiantes la capacidad de selección de una metodología específica, de acuerdo a los criterios proporcionados, para la aplicación correcta de las técnicas de siembra de acuerdo al microorganismo y al objetivo de la prueba. Introducción: El objetivo de esta práctica fue identificar diferentes técnicas de siembra para el desarrollo de cultivos y sus cultivos de hongos y bacterias, en medios de cultivo como las cajas Petri. Resumen: Para realizar la siembra (proceso de colocar las bacterias en medios de cultivo), hoy en el caso de esta práctica usamos modo de jitomate, sin embargo, el cultivo se puede realizar a partir de muestras biológicas (orina, pus, secreciones, etc.), hoja de análisis de control de calidad (alimentos, agua, cosméticos, medicamentos, etc.), así como también procedentes de muestras ambientales (agua, suelo, etc.) Con esta práctica logramos conocer la morfología microscópica y macroscópica a partir de su crecimiento en los medios de cultivo. Para el desarrollo de esta práctica también fue necesario aprender técnicas de siembra, además de la importancia del uso de material adecuado. Elementos importantes:

Mechero (de alcohol o bunsen)
Asa bacteriológica
Cámaras de flujo laminar o espacio adecuado
medios de cultivo ya preparados a 37 °C Se entiende por medio de cultivo puro a una población de células las cuales todas proceden de una misma célula. Existe una gran variedad de técnicas por medio de las cuales las diferentes especies pueden ser aisladas en cultivo puro. En nuestro caso, para la elaboración de la práctica usamos la técnica de estudio cruzada por la cual se busca tener colonias separadas a partir de un inóculo. Actividad Práctica: Materiales y equipos.
1 caja de Petri con agar PDA
4 cajas de Petri con agar Nutritivo
1 tubo con 5mL de Caldo Nutritivo
1 tubo con agar SIM
2 tubos con agar Nutritivo en bisel
1 tubo con agar PDA en bisel
2 hisopos estériles en tubo taparrosca
1 asa bacteriológica
1 asa micológica
1 mechero Bunsen

1 cultivo bacteriano en caja Petri con agar
Nutritivo de 24 h
1 cultivo fúngico en caja Petri con agar PDA de 3 dias - Etariol al 70% - Toallas desechables - 1 rollo de papel para sellar cajas Petri - 1 rollo de cinta de papel - 2 incubadoras de 35 ÷ 2 'C y 25 'C Procedimiento para la realización de las siembras

Siembre por picadura en tubos de agar sin inclinar (rectos - bacteria)
Siembre por estría en tubos de agar inclinado (bacteria)
Siembre por técnica mista en tubos de agar inclinado (bacteria,
Siembre por agotamiento (aislamiento o estría cruzada) en cajas Petri conteniendo agar Nutritivo (bacteria)
Siembre por la técnica de cuadrantes, en cajas Petri conteniendo agar Nutritivo (bacteria)
Siembre por la téchica masiva y con hisopo, en la superfície de una caja Petri con agar Nutritivo Siembre en tubos de Caldo Nutritivo, utilizando asa bacteriológica (bacteria)
Siembre por punción cajas de agar PDA (hongo)
Siembre por punción tubos de agar PDA inclinado (hongo) Cuestionario:
¿Cuál es el objetivo o finalidad de una siembra por agotamiento? Es un buen método para el aislamiento de colonias; mediante esta técnica buscamos obtener colonias separadas a partir de un inóculo.
Mencione brevemente el proceso de purificación de un aislamiento bacteriano obteniendo en agares.

Seleccionar las colonias tipo individualmente bajo microscopio estereoscópico.
En una cámara de transferencia, realizar la resiembra de la colonia seleccionada por estría simple en medio semi selectivo o selectivo (consultar bibliografía especializada), incubar por 48 h a 28 °C.
Realizar las resiembras necesarias hasta obtener la cepa pura.

Explique brevemente la metodología para realizar siembras en placa profunda y placa en superficie

Siembra en placa profunda: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos aerobios.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.

Describe el objetivo de utilizar agar Nutritivo y agar PDA, así como el tipo de microorganismos que pueden cultivarse en él. El agar nutritivo se utiliza para el cultivo de bacterias y para el recuento de organismos en agua, alcantarillado, heces y otros materiales. Mientras que el agar PDA es un medio recomendado para la detección y enumeración de hongos a partir de alimentos como productos lácteos, cárnicos y frutos secos.

PRÁCTICA NO. 5 “MORFOLOGÍA BACTERIANA"

Objetivo: reconocer la morfología celular bacteriana, así como las diferentes agrupaciones y otros aspectos morfológicos de las bacterias. Introducción: Las bacterias en condiciones normales se desarrollan con formas definidas, las cuales son proporcionadas por la rigidez de la pared celular; estas formas son esféricas, ovaladas, en forma de bastón o como espirales. Por ello es importante realizar una correcta observación de estas características, dado que, dicha forma se convierte en uno de los principales marcadores para la identificación inicial de géneros bacterianos. Del mismo modo, los rasgos de las colonias y la disposición o agrupación bacteriana son criterios taxonómicos que deben ser descritos correctamente para aislamientos no identificados, como parte de la identificación primaria. Resumen: Observación de la morfología bacteriana en muestras teñidas: gracias a esta práctica nos fue posible identificar la morfología de los microorganismos a partir de preparados frescos o fijos y teñidos por algunos de los métodos de tinción conocidas; ya que por su misma estructura son difíciles de visualizar en su estado natural. Algunas consideraciones generales en la morfología de las bacterias son el tamaño (algunas se miden por micrómetros); Forma, la forma de una bacteria viene determinada por la rigidez de su pared celular. Las bacterias poseen una de las tres formas fundamentales: esféricas, cilíndricas y espiral. Las células esféricas, se denominan cocos. A las de forma cilíndrica se les denomina bacilos. A las de forma espiral o helicoidal, se les denomina espirilos. De acuerdo a la disposición, forma y tamaño, las bacterias se clasifican en: diplococos, streptococos, tétradas, estafilococos, sarcina, bacilos (Espiroquetas, espirilos, vibrios o vibriones), bacterias filamentosas y ramificadas, etc. Dentro de la morfología debe tenerse en cuenta la presencia de cápsula, flagelos y endospora (no todas las bacterias formas estas estructuras). También se debe tener en cuenta, la posición de la endospora dentro de la célula (terminal, suterminal, central), y la distribución de los flagelos si están presentes. Morfología de la colonia bacteriana: cuando los microorganismos crecen sobre medios de cultivo exhiben diferencias en la apariencia macroscópica de su crecimiento, estas diferencias llamadas características culturales, son la base para la separación de ellas en grupos taxonómicos. La morfología colonial, es una característica indispensable a tener en cuenta en el aislamiento primario de una bacteria y, en la cual se debe considerar el borde y la elevación de la misma. Adicionalmente, es importante apreciar la consistencia y la textura de la masa celular, pues también son características distintivas. La consistencia va desde la colonia seca que, tocada con un asa se desplaza en la superficie del medio, hasta las colonias viscosas que se pegan al asa y se separan de la colonia formando un hilo (generalmente son bacterias con cápsulas gruesas). así como, también la pigmentación de la colonia, las películas continuas de crecimiento (bacterias motiles), colonias lisas (generalmente virulentas) o colonias rugosas (generalmente avirulentas). Actividad práctica: ACTIVIDAD PRÁCTICA Materiales y equipos.

1 asa bacteriológica
1 bandeja para tinción
1set de papel para óptica
5 portaobjetos
5 cubreobjetos
Colorante Azul de Metileno
Colorante Tinta china
- 1 microscopio compuesto binocular
- Aceite de inmersión
- 1 mechero Bunsen o de Alcohol
- Colorante Fucsina
- Colorante Verde de Malaquita
- Colorante Safranina

Procedimiento:

Con los cultivos bacterianos suministrados, realizar la descripción morfológica de la colonia o tipo de crecimiento observando; así como también: forma, elevación, borde, tamaño, superficie, consistencia, aspecto y presencia de pigmentos.
Tabule los datos recolectados. Recuerde que las observaciones deben hacerse en colonias aisladas, no en zonas de crecimiento abundante de la bacteria; concluya al respecto.
Una vez finalizada la caracterización de la colonia bacteriana, proceda a realizar la caracterización de la morfología y agrupación bacteriana; para esto, elabore un frotis y sobre él realice una tinción simple.
Una vez coloreada la preparación, llévela a observación bajo del microscopio binocular compuesto, siguiendo las instrucciones correctas de manejo del equipo y con las indicaciones de su tutor. Cuestionario:
Investigue el fundamento de cada una de las tinciones incluidas en la práctica, así como la forma de realizarlas. Tinción de Gram. Esta tinción es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios donde se manejan pruebas microbiológicas. Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas. Tinción de Wright. La tinción de Wright es una técnica que se emplea generalmente para la diferenciación de elementos celulares de la sangre y es clasificada como una tinción policromática, dado que puede teñir compuestos ácidos o básicos presentes en una célula. Tinción de Ziehl-Neelsen. La tinción de Ziehl-Neelsen es la técnica comúnmente usada en el diagnóstico rutinario de tuberculosis. Es una técnica rápida, fácil y de bajo costo, lo que permite que se pueda realizar en casi cualquier laboratorio clínico. Esta tinción permite diferenciar a las bacterias en dos grupos: aquellos que son capaces de resistir la decoloración con alcohol-ácido y aquellos que no lo son. Tinción negativa. La tinción negativa fue desarrollada originalmente para microscopia de luz con el fi n de rodear y delinear las bacterias no teñidas u otros materiales biológicos. Utilizamos diferentes métodos de tinción negativa para evaluar estructuras individuales, tan pequeñas como las vesículas sinápticas e incluso de gran tamaño, como los microorganismos unicelulares. Este método es muy útil, aunque está limitado por la presencia de un fondo oscuro que no permitirá la correcta identificación de forma nítida y detallada de los componentes de dichas estructuras. Tinción de azul algodón de lactofenol. El examen microscópico es de gran importancia en micología para la observación de las diferentes especies de hongos de interés clínico. Se deben utilizar tinciones que logren preservar la integridad de las estructuras fúngicas. Para la correcta identificación de hongos de interés clínico, ya sea con fines de diagnóstico o estudios taxonómicos, es necesario observar las estructuras fúngicas con una alta calidad y contraste; para ello se utilizan diversos compuestos químicos que permitan la tinción entre la pared y el citoplasma de las células fúngicas.
Investigue al menos 4 microorganismos de interés para su área de estudio dando una breve descripción del mismo, así como una amplia descripción de su morfología bacteriana, morfología de su colonia y morfología de su crecimiento en placa o tubo.
Escherichia coli. Son los microbios causantes de enfermedades como diarrea hemorrágica o insuficiencia renal. Habitan en los intestinos.

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