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Describe las técnicas cuantitativas para una cromatografía
Tipo: Diapositivas
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¡No te pierdas las partes importantes!
En 1906 , Martin Tswett publico
un articulo sobre la
Cromatografia. Tswett separó los
componentes de la Clorofila
utilizando Carbonato de Calcio
como Absorbente y Eter de
Petróleo como eluyente.
En 1931 , Kuhn y sus
colaboradores aislaron y
carotenos de la zanahoria,
empleando el mismo método de
Tsweet.
Por los años de 1940, Martin y
Synge trabajaron en las bases
Teóricas de la Cromatografia, lo
cual hizo posible definir Métodos
que habilitan la eficiencia de la
separación cromatografica. Ello
hizo posible que la Cromatografia
tuviera una amplia aceptación.
En la decada de 1950, el método
cromatografico fue aplicado a la
Cromatografia de Gases.
En 1957, Golay propuso el uso de
Columnas Capilares para la
Cromatografia de Gases.
Técnica de separación (al
igual que la destilación).
Cromatografia es “Separar
y Cuantificar” analitos en
mezcla (por lo general en
matrices complejas).
Que es la Cromatografia?
La separación ocurre por
migración de los analitos en
mezcla a diferentes velocidades
a lo largo del sistema
cromatográfico.
La velocidad de migración esta
gobernada por diferentes
interacciones entre la muestra
(conducida por un líquido o gas
en movimiento) y el Absorbente
(sólido o líquido).
Definimos así a la “Fase Móvil”
y la “Fase Estacionaria”.
Solventes
para HPLC
Columnas
y
Fases
Estacionaria
s
Un “Cromatograma” debe de
presentar Picos de forma
simétrica y bien definidos.
Debe de presentar alturas de
Pico dentro de la escala de
registro.
Debe de tener una línea base
consistente.
No debe de presentar bandas
anchas.
Para obtener Picos bien
definidos deben de controlarse
una serie de factores, en caso
contrario ocurrirán los
ensanchamientos de bandas.
El Factor de Capacidad es un valor númerico que nos indica el
grado de separación que puede tener una columna en función del
volumen retenido de un analito y el volumen retenido del solvente.
El factor de capacidad se expresa en función del volumen por
que:
El tiempo de retención depende de la razón de flujo y las
dimensiones de la columna, por ello no es un valor apropiado
para la comparación de Cromatogramas.
El Factor de Capacidad es independiente de la razón de flujo
y de las dimensiones de la columna.
El valor de el Factor de Capacidad utilizando razones de
Volumen por lo general debe de oscilar entre 1 a 5
(preferentemente).
Injección
1 2 3 4
V
0
V
r
V
o
k´ = 0
k
V V
V
r
'
0
0
V
r
= Volumen de Retención del
Pico de un Soluto.
V0 = Volumen del Solvente (Pico
no retenido)
N = 15000
Columna con buena eficiencia,
alto valor de N
El Número de Platos Teóricos es un indice númerico que nos
indica el grado de eficiencia de la columna cromatográfica.
Columna con pobre eficiencia,
bajo valor de N
N = 2500
Los picos de los analitos deben de ser simétricos y de bandas
delgadas.
Los Picos de los analitos que presenten bandas anchas y que
además se encuentren muy cercanos entre si no podrán ser
resueltos y serán coeluidos.
Altura Equivalente a un Plato Teórico (HETP)
Una altura Equivalente a un Plato Teórico es otro indice númerico
que nos indica el grado de eficiencia de la columna
cromatográfica.
Matematicamente se expresa como:
HETP = L / N
L = Longitud de la Columna
N = Número de Platos Teóricos
El valor de una HETP se traduce como el Plato Teórico mas corto
que puede colocarse dentro de la longitud de columna. Esto
significa que mientras mas pequeño sea una HETP, podemos
colocar mas HETP y la eficiencia de la columna sera mayor.
