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E, 58 PROGRAMA DE BIOLOGIA UNIVERSIDAD DEL TOLIMA PROGRAMA DE BIOLOGIA UNIVERSIDAD DEL TOLIMA | Laboratorio No. 3 Carbohidratos y Lípidos E 58 PROGRAMA DE BIOLOGIA UNIVERSIDAD DEL TOLIMA [A Competencias de la práctica El estudiante identifica características de la estructura química de los glúcidos y los lípidos. Desarrolla habilidades y destrezas en el montaje de experimentos empleando recursos no convencionales. Relaciona los resultados obtenidos con su función e importancia en el metabolismo celular de los organismos. lll. Metodología 1. Reconocimiento de glúcidos Materiales: Tubos de ensayo, gradilla, pinzas, mechero, pipetas, solución de Lugol, solución de Fehling A y B, solución alcalina (sosa, potasa, bicarbonato, etc.), HCI diluido, soluciones al 5% de glucosa, maltosa, lactosa, fructosa, sacarosa y almidón. Técnica: 1. Poner en los tubos de ensayo 3ml de la solución de glucosa, maltosa, lactosa fructosa o sacarosa (según indique el profesor). 2. Añadir 1ml de solución de Fehling A (contiene CuSO4) y 1ml de Fehling B (lleva NaOH para alcalinizar el medio y permitir la reacción) 3. Calentar los tubos a la llama del mechero hasta que hiervan. 4. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo y será negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso. 5. Observar y anotar los resultados de los diferentes grupos de prácticas con las distintas muestras de glúcidos. 2. Hidrólisis de la sacarosa Fundamento: E 58 PROGRAMA DE BIOLOGIA UNIVERSIDAD DEL TOLIMA sacarosa es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres, por lo que caree poder reductor y la reacción con el reactivo de Fehling es negativa, tal y como ha quedado demostrado en el experimento 1. Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molécula de agua y se descompone en los monosacáridos que la forman, glucosa y fructosa, que sí son reductores. La prueba de que se ha verificado la hidrólisis se realiza con el reactivo de Fehling, y si el resultado es positivo, aparecerá un precipitado rojo. Si el resultado es negativo, la hidrólisis no se ha realizado correctamente y si en el resultado final aparece una coloración verde en el tubo de ensayo se debe a una hidrólisis parcial de la sacarosa. Técnica: 1. Tomar 3ml de solución de sacarosa y añadir 10 gotas de HCI diluido. 2. Calentar a la llama del mechero durante unos 5 minutos. 3. Dejar enfriar. 4. Neutralizar añadiendo 3ml de solución alcalina. (NaOH al 20%) 5. Realizar la prueba de Fehling como se indica en el experimento 1. 6. Observar y anotar los resultados. Para mayor información sobre la hidrólisis de la sacarosa escanear el código QR. 3. Investigación de polisacáridos (almidón) Fundamento: El almidón es un polisacárido vegetal formado por dos componentes: la amilos y la amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo debido no a una reacción química sino a la adsorción o fijación de yodo en la superficie de la molécula de amilosa, lo cual sólo ocurre en frío. Como reactivo se usa una solución denominada lugol que contiene yodo y yoduro potásico. Como los polisacáridos no tienen poder reductor, la reacción de Fehling da negativa. Técnica: E 58 PROGRAMA DE BIOLOGIA UNIVERSIDAD DEL TOLIMA MY MN 3. Investigación de polisacáridos (almidón) e 4. Determinación de glucosa en orina por el método de Benedict Fundamento EY 58 orina se pueden encontrar ARENA ROO el más común es la gluc menes apreciables, constituye el fenómeno conocido como glucosuria o glicosuri e consecuencia de un aumento de glucosa en la sangre (hiperglicemia). Puede presentarse glucosuria producto de emociones violentas (ira, temor, ansiedad) lo cual obedece a una mayor secreción de adrenalina, con la movilización consiguiente a la glucosa almacenada anteriormente como glucógeno. Después de un largo y difícil examen, puede aparecer glucosa en la orina, de un número considerable de estudiantes; también suelen producirse glucosuria después de ingerir carbohidratos en exceso (glucosuria alimentaría) el límite de asimilación varía según el individuo y las condiciones del ejercicio físico. Generalmente se estima el límite de glucosa pura entre 100 y 200 gramos, pero, recientemente se ha comprobado que en muchos individuos, cantidades mayores, hasta la máxima que el estómago puede tolerar (400-500g) no provoca glucosuria. La glucosa que sigue a la ingestión de 100g o menos, es anormal e indica un umbral renal bajo, disminución de la capacidad del hígado para almacenar glucosa como glicógeno o trastorno del metabolismo glucídico. La cantidad de glucosa eliminada en la diabetes, es considerable, y en ocasiones hasta de 500g o más de 24h, aunque no guarda relación con la gravedad de la dolencia. Por último, debemos señalar que como resultado de la actividad física puede aparecer glucosa en la orina, considerándose un proceso eminentemente funcional. En el caso de cargos físicos intensos y de corta duración, en las cuales la movilización del glucógeno hepático se intensifica y se incrementa el nivel de glucosa sanguínea, se puede observar manifestaciones de glucosa. La glucosa se puede regular casi totalmente, restringiendo con cuidado la dieta. Principios: Todos los azúcares (glucosa, levulosa, galactosa, etc) reducen con rapidez, por medio de calor al sulfato de cobre en solución alcalina (reactivo Benedict) haciéndolo pasar a oxido cuproso insoluble, de color amarillo a rojo. Materiales: Reactivo: Benedict cualitativo Muestra Orina Técnica: 1. Vierta 8 gotas de orina en un tubo de ensayo resistente al calor. 2. Añada 3 ml del reactivo de Benedict cualitativo y mézclelos. E 58 DDAFSDAMA DE DIOILACIA Para mayor información sobre el Comburtest escanear el código QR. Reconocimiento de lípidos Materiales: Tubos de ensayo, gradilla, varillas de vidrio, mechero, vasos de precipitados, pipetas, solución de NaOH al 20%, solución de Sudán lll, tinta china roja, éter, cloroformo o acetona, 5. Saponificación Fundamento: Las grasas reaccionan en caliente con el hidróxido sódico o potásico descomponiéndose en los dos elementos que las integran: glicerina y ácidos grasos. Éstos se combinan con los iones sodio o potasio del hidróxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sódicas o potásicas de los ácidos grasos. En los seres vivos, la hidrólisis de los triglicéridos se realiza mediante la acción de enzimas específicas (lipasas) que dan lugar a la formación de ácidos grasos y glicerina. Técnica: 1. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%. 2. Agitar enérgicamente y colocar el tubo al baño María de 20 a 30 minutos. 3. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene la solución de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semisólida que es el jabón formado y una superior lipídica de aceite inalterado. E 58 PROGRAMA DE BIOLOGIA UNIVERSIDAD DEL TOLIMA Para mayor información sobre la saponificación de lípidos escanear el código QR. 6. Tinción Fundamento: Los lípidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudán l1!. Técnica: 1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite. 2. Añadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solución alcohólica de Sudán III. 3. Al otro tubo añadir 4-5 gotas de tinta roja. 4. Agitar ambos tubos y dejar reposar. 5. Observar los resultados: en el tubo con Sudán lll todo el aceite tiene que aparecer teñido, mientras que, en el tubo con tinta, ésta se irá al fondo y el aceite no estará teñido. Para mayor información sobre la tinción de lípidos escanear el código QR. 7. Solubilidad Fundamento: Los lípidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequeñísimas gotas formando una emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor densidad, se sitúa sobre el agua. Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como el éter, cloroformo, acetona, benceno, etc. 10 am AA PROGRAMA DE BIOLOGIA DO A, UNIVERSIDAD DEL TOLIMA Y, 6. Tinción O E> > LY AY MY 7. Solubilidad 12 E 58 PROGRAMA DE BIOLOGIA OA a UNIVERSIDAD DEL TOLIMA NY MS ¿Sabías qué? ¿Sabías qué? ! Los triglicéridos son el lípido más abundante ! en los alimentos y el cuerpo. J e e e e e e e e v. Bibliografía y Webgrafía. Cooper G., y Haussman R. (2014). La célula. Boston University. Marbán ediciones. McMurry J. (2016). Biomolecules carbohydrates, in: Org. Chem., 9 ed., Cengage Learning, USA: pp. 832-869. Ewelina Wiercigroch., Ewelina Szafraniec., Krzysztof Czamara., Marta Z. Pacia., Katarzyna Majzner., Kamila Kochan., Agnieszka Kaczor., Malgorzata Baranska., Kamilla Malek. (2017). Raman and infrared spectroscopy of carbohydrates: A review. Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy Volume 185: pp. 317-335. https://doi.org/10.1016/j.saa.2017.05.045 Freeman Scoot. (2009). Biología. Pearson 3 edición. Solomon E., Berg L., Martin D. (2013). Biología. CENGAGE learning. 9 edición. 13 
