PRÁCTICA Nº: 4
RECUENTO DE LEVADURAS
Objetivo:
Manejar una cámara de Neubauer y realizar el conteo de células distinguiendo las células vivas
de las muertas, en las que el colorante azul de metileno penetra en el interior de las células que tienen
la membrana rota, pero que no atraviesa las células con las membranas intactas.
Materiales:
- Azul de metileno al 0.01%
- Sacarosa
- Suspensión de levadura seca
comercial.
- Micropipetas.
- Microscopio.
- Cámara de recuento y cubre.
- Tubos de ensayos
- Pipetas automáticas
- Pipetas séricas
- Probetas
- Balanza
- Vidrio de reloj
- Cucharillas
Procedimiento:
1. Preparar suspensión de levaduras
Pesar 0.1 g de levadura seca comercial.
Pesar 3 g de sacarosa
Medir 500 ml de agua del grifo calentada al microondas
Mezclas los 3 componentes y agitar hasta que la muestra se vea homogénea.
2. Mezclar 1 ml de azul de metileno con 1ml de suspensión celular.
3. Situar un cubre sobre el retículo de la cámara. Para facilitar su adhesión a ésta, se ejerce una ligera
presión al tiempo que se desliza el cubre sobre las bandas laterales, previamente humedecidas
con H2O, de su porción central.
4. Pipetear 20 µl de la muestra celular con una micropipeta
