Docsity
Docsity

Prepara tus exámenes
Prepara tus exámenes

Prepara tus exámenes y mejora tus resultados gracias a la gran cantidad de recursos disponibles en Docsity


Consigue puntos base para descargar
Consigue puntos base para descargar

Gana puntos ayudando a otros estudiantes o consíguelos activando un Plan Premium


Orientación Universidad
Orientación Universidad


Plasmidis: Origen, Replicación, Número de Copias, Mecanismos de Partición y Compatibilidad, Resúmenes de Biología Molecular

Los plasmidis, sus orígenes, el proceso de su replicación, el número de copias que pueden existir en una célula, los mecanismos de partición y la compatibilidad entre ellos. Además, se abordan los conceptos de conjugación, transferencia de dna y transformación.

Tipo: Resúmenes

2012/2013

Subido el 19/05/2013

laia_comas-1
laia_comas-1 🇪🇸

4.4

(12)

6 documentos

1 / 8

Toggle sidebar

Esta página no es visible en la vista previa

¡No te pierdas las partes importantes!

bg1
T8. PLASMIDIS
Origen de replicació : oriV
Rand d’hoste específic.
Ampli espectre : Pot replicar en diferents organismes , proteïnes de replicació pròpies
Espectre restringit : Plasmidi que utilitza la proteïna replicativa de l’hoste.
Caixes DnaA en l’OriV
Poden ser compatibles o incompatibles entre ells
Plasmidis circulars i lineals
Plasmidis críptics: (lineals) Només posseeixen els gens necessaris per la difusió
1. REPLICACIÓ:
Mediat per RNA:
Obertura de les cadenes degut a RNA que s’intercala , formació d’un híbrid de RNA
Mediat per proteïnes
DnaA hoste
RepA (similar a la DnaA)
Proteïna pi sintetitzat pel fago lambda, necessitem de cèl·lules amb aquesta proteïna o el plasmidi no es podrà
replicar. VECTOR SUICIDA si la cèl·lula no té pi.
Vector suïcides: L’oriV no és un funcional en un entorn concret (ex. Proteïna pi)
Vectors condicionals: Plasmidis termosensibles, repliquen a una temperatura concreta
2. NÚMERO DE CÒPIES:
Alt número de còpies
Plasmidis relaxats
mínim 40 còpies /cèl·lula
pf3
pf4
pf5
pf8

Vista previa parcial del texto

¡Descarga Plasmidis: Origen, Replicación, Número de Copias, Mecanismos de Partición y Compatibilidad y más Resúmenes en PDF de Biología Molecular solo en Docsity!

T8. PLASMIDIS

  • Origen de replicació : oriV
  • (^) Rand d’hoste específic.

■ Ampli espectre : Pot replicar en diferents organismes , proteïnes de replicació pròpies

■ Espectre restringit : Plasmidi que utilitza la proteïna replicativa de l’hoste.

Caixes DnaA en l’OriV

  • Poden ser compatibles o incompatibles entre ells
  • Plasmidis circulars i lineals
  • Plasmidis críptics: (lineals) Només posseeixen els gens necessaris per la difusió

1. REPLICACIÓ:

  • Mediat per RNA:

■ Obertura de les cadenes degut a RNA que s’intercala , formació d’un híbrid de RNA

  • Mediat per proteïnes

■ DnaA hoste

■ RepA (similar a la DnaA)

■ Proteïna pi sintetitzat pel fago lambda, necessitem de cèl·lules amb aquesta proteïna o el plasmidi no es podrà

replicar. VECTOR SUICIDA si la cèl·lula no té pi.

■ Vector suïcides: L’oriV no és un funcional en un entorn concret (ex. Proteïna pi)

■ Vectors condicionals: Plasmidis termosensibles, repliquen a una temperatura concreta

2. NÚMERO DE CÒPIES:

  • (^) Alt número de còpies

✓ Plasmidis relaxats

✓ mínim 40 còpies /cèl·lula

✓ Petits (ràpida replicació)

✓ 1 mecanisme de control

✓ Estabilitat i perpetuació

  • Plasmidis de mitjà número de còpies – 5 a 4 còpies /cèl·lula
  • Baix número de còpies

✓ plasmidis estrictes

✓ 1a 2 còpies / cèl·lula

✓ Grans (replicació lenta)

✓ Varis mecanismes de control

✓ Poca estabilitat i perpetuació

3. MECANISME DE PARTICIÓ O SEGREGACIÓ:

  • Mediat per Par(R1)

■ Sistemes de perpetuació: mecanismes de partició

■ Plasmidis de baix número de còpies

■ Plasmidi associat al citoesquelet, gràcies a la proteïna Par , es genera una força de tensió que tirà dels 2 plasmidis

trencant ATP (semblant als filaments d’actina).

4. COMPATIBILITAT I INCOMPATIBILITAT PLASMÍDICA:

  • Incompatibles: Interfereixen entre a ells a nivell replicatiu o a nivell de partició i un desplaçarà l’altre
  • Compatibles: Poden coexistir dins la mateixa cèl·lula
  • Grups d’incompatibilitat (Inc):

■ En funció del mecanisme de replicació

■ En funció del mecanisme de partició

■ Número de còpies del plasmidi

■ Plasmidis del mateix grup d’incompatibilitat: MATEIX ESPECTRE D’HOSPEDADOR

■ Cèl·lula Mob+Tra- , pot complementar en trans (conjugació triparental)

✓ Plasmidi helper, passa a la cèl·lula amb plasmidi mobilitzable

✓ Complemtació en trans pas dels 2 plasmidi a la cèl·lula receptora

  • Plasmidis han de ser conjugatius i mobilitzables

3. TRANSFERÈNCIA DE DNA:

  • Pili contacte amb la superfície, acosta les 2 cèl·lules
  • Porus conjugatiu
  • Tall del DNA en la regió Mob, vehiculació d’una sola cadena
  • Dos punts de replicació (relaxasa + primesa)
  • Gram negatiu: ha de travessa 2 membranes molt costós (sempre acceptarà el DNA)
  • SISTEMA D’EXCLUSIÓ: Modificació de la paret cel·lular , i no pot tornar a agafar un altra plasmidi

4. PLASMIDI F:

  • No està regulat, mutació en els gens de regulació , ràpidament transfereix les seves característiques
  • Generació de Soques Hfr:

■ Integració del plasmidi al cromosoma (per recombinació homòloga, RecA)

Necessari que hi hagi homologia!

■ Els gens tra i la regió Mob (oriT) passen al cromosoma

■ Per conjugació no passarà el plasmidi sinó el cromosoma

■ El tros cromosoma que passa a l’altre cèl·lula pot passar al cromosoma i tenir part del plasmidi i alguns gens del

cromosoma.

■ Vector F’:

✓ Plasmidi F’ s’escindeix i s’emporta part del cromosoma

✓ Cèl·lula amb 2 al·lels : MERODIPLOID

✓ En aquest no tindré recombinació homòloga, tindré el plasmidi amb part del cromosoma de forma extracromsòmica

  • Gram + : Són cèl·lules que demanen que els hi passin el plasmdii, parlem d’una comunicació mutua.

T10. TRANSFOMACIÓ

  • La transferència gènica pot donar-se de diferents formes:

■ Transducció: fago que al escindir o encapsidar s’ha equivocat i al infectar una nova cèl·lula insereix DNA de la

cèl·lula anterior

■ Conjugació: cèl·lula donadora portadora d’un plasmidi (tra+mob+) que passa el plasmidi a una cèl·lula receptora

■ Transformació

1. INTRODUCCIÓ:

  • La transformació no disposa de cap vehicle , es troba en l’ambient

■ Natural

■ Induida:

✓ Desastabilització de l’envolta cel·lular

✓ Formació de protoplast

✓ Electroporació

  • (^) Existeixen receptors a la membrana del bacteri que reconeixen el DNA i l’incorporen.
  • Incorporació de DNA de cadena senzilla , degraden una de les dues cadenes (obtenir energia) i transloquen l’altre
  • Gram positiu: Agafen tot el DNA que trobin
  • Gram negatiu: Reconeixen seqüències específiques en aquell DNA

■ Competència: Predeterminats canvis a la cèl·lula

■ Unió del DNA a la cèl·lula competent

✓ dsDNA s’uneix a la membrana externa

✓ EXISTEIX UNA ESPECÍFICITAT DE RECONEIXEMENT

✓ Degradació d’una de les cadenes

✓ Incorporació del dsDNA

■ Recombinació: el DNA surt del transformosoma i recombina

✓ Seqüències de reconeixement: Pressió selectiva sobre la seqüències

✓ Captació a través de pilis

✓ Sistema que travessa les 2 membranes (pili)

✓ Entrada a través de proteïnes periplasmàtiques

4. SIGNIFICAT BIOLÒGIC DE LA TRANSFORMACIÓ NATURAL:

  • Variabilitat de la població
  • Reparació
  • Recombinació com a via d’escapament
  • Nutrients?

5. TRANSFORMACIÓ INDUÏDA:

L’estat de competència s’indueix de forma artificial.

  • DNA es mantindrà en l’estat en el que l’incertis
  • Mètodes químics:

■ Modificació de les envoltes perquè la cèl·lula estigui més receptiva

■ Tractament amb CaCl 2 :

✓ Canvies de l’estructura de la paret fent punts, i apliques xoc tèrmic perquè es moguin i el DNA pugui entrar

✓ Generació de protoplasts, CaCl 2 permet interacció DNA afavorit per temperatura baixa – adhesió

✓ Canvi brusc de la temperatura incrementa la fluïdesa de la membrana

✓ Temps d’expressió fenotípica i de restabliment de la paret

✓ Eficiència de transformació DNA plasmídic >>> DNA cromosòmic

✓ Extrems lliures permeten acció d’exonucleases que produeixen degradació

  • Electroporació:

■ Es generen porus reals que permeten la translocació

■ Pulsos elèctrics que generen porus a les membranes (gran descarrega elèctrica)

■ Utilització del camp elèctric com element conductor

■ Calen cèl·lules turgents amb un medi net i glicerol (evitar solucions salines o les cèl·lules moririen)

■ Utilització de les pròpies cèl·lules com element conductor alt voltatge permeabilitat transitòria

■ Paràmetres ha ajudar que permeten una transformació més eficient

  • Factors que afecten la transformació induïda:

■ Mida del DNA, com més petit millor (màxim 15kb)

■ Puresa del DNA (com més proteïnes pitjor

■ Estat del plasmidi a transformar (molt o replegats)

■ Quantitat del plasmidi transformat

■ Estat de les cèl·lules (estat exponencial, viables, actives)

■ Temps d’expressió fenotípica

■ Catió utilitzat per l’estat de competència