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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA No. 5
Actividad de la enzima succinato DH
Alumnos(as): Karla Ayde Sánchez Guillen
Erika Vanessa Molina Murillo
Yatzeny Gpe. Ruiz Molina
Tomas Alejandro López Escobar
Obet Maza Nafate
Profesor(a): Dra. Ana Olivia Cañas Urbina
Grupo: Cuarto Semestre
Fecha de Entrega: miércoles 30 de marzo de 2016
INTRODUCCIÓN
De acuerdo con Martin (2014) la enzima oxidorreductasa cataliza la trasnsferencia de electrones desde el agente reductor al agente oxidante. Según Gonzalez las enzimas oxidorreductasas catalizan reacciones de oxidorreductor, es decir, transferencia de hidrogeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro, según la reacción general.
AH 2 + B A + BH 2
Ared + Box Aox + Bred
Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la citocromo c oxidasa.
La succinato deshidrogenasa es una enzima clasificada dentro del grupo de las oxidorreductasas, cataliza una reacción muy importante en el metabolismo oxidativo de la celula: la conversión de succinato en fumarato. Esta enzima se localiza en células eucariontes en la membrana mitocondrial interna. El H 2 cedido por el succinato puede ser transferido del FADH2 a un colorante susceptible como el azul de metileno que al cambiar su estado redox pasa de coloreado a incoloro o viceversa. De acuerdo Gonzales (2010) nos dice la coloración de la oxidación y reducción del azul de metileno al cambiar su estado redox.
El succinato deshidrogenasa remueve 2H+^ y 2 electrones del succinato para formar fumarato y la coenzima reducida FADH 2. La enzima está sujeta a una poderosa inhibición competitiva por partes de reactivos como el fenol lo cual constituye una manera de inhibir la actividad de la enzima a nivel del laboratorio. (Sierra, 2013).
OBJETIVO
Que el alumno aprecie la actividad de le enzima Succinato Deshidrogenasa mediante una reacción colorimétrica.
MATERIAL Y PROCEDIMIENTO
Se procedió y se utilizó el material de acuerdo al Manual de laboratorio. Bioquímica. Facultad de Ciencias Químicas Extensión Ocozocoautla. UNACH. Responsables: Alamilla Camacho Karen, Hernández Constantino Gilberto-.
INDICADOR REDUCIDO OXIDATIVO
AZUL DE METILENO INCOLORO AZUL
RESULTADO
Tabla 1. Cambios de coloración de la enzima succinato deshidrogenasa.
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 2 vs Tubo 1
Figura 1. Tu bo de ensaye que contiene 1 ml de fenol al 90%, 2 gotas de azul de metileno al 0.1%, 2 ml de muestra de hígado diluido con ácido succínico y mezclada con 0.5 ml de aceite mineral, antes de ser incubado a baño maría.
Figura 2. Tubo de ensaye que contiene 2 ml de azul de metileno al 0.1%, 2 ml de muestra de hígado diluido con ácido succínico y mezclada con 0.5 ml de aceite mineral, antes de ser incubado a baño maría.
Figura 3. Comparación del Tubo 1 contra el Tubo 2, después de haber estado incubados durante 10 minutos a baño maría con una temperatura de 50°C.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Al realizar esta práctica y analizando los resultados que se muestran en la Taba1. Se observa que en los tubos 1 y 2 después de ser incubados a baño maría durante 10 minutos a 50°C estos sufren un cambio de coloración como se en la figura 3 de la tabla 1. En el tubo 1 se puede observar que se torna de color azul, de a cuerdo a Sierra (2013) la enzima succinato deshidrogenasa está sujeta a una poderosa inhibición competitiva por parte de reactivos, en este caso el fenol. Por lo tanto en el tubo 1 que contiene 1ml de fenol al 90%, y este reactivo como un inhibidor, esto hace que la enzima no realice su función. En tubo 2 se puede observar que se torda incoloro, esto se debe a que la enzima succinil deshidrogenas actúa como una oxidorreductasa, la cual esta como aceptor de electrones. ¨La succinato deshidrogenasa es una enzima clasificada dentro del grupo de las oxidorreductasas, cataliza una reacción muy importante en el metabolismo oxidativo de la célula¨ (Sierra, 2013).
CONCLUSION
Se apreció la actividad enzimática del succinato deshidrogenasa. Se logró observar cómo el fenol inhibe la reacción enzimática de la enzima. Se apreció el cambio de coloración de la reducción y oxidación del azul de metileno.
Referencias
Alvarado Hidalgo, M., Davila Marquez, R., Ramoa Ramirez, E., & Garcia Albarran, L. M. (Diciembre de 2008). Determinacion de la actividad de la enzima succinato deshidrogenasa. Obtenido de Manual de laboratorio.Bioquimica II.Benemerita Universidad Autonoma de Puebla: http://quimicosfarmacobiologos.bligoo.com.mx/media/users/10/523320/files/51871/Ma nual-Bioqu_mica_II.pdf
Gonzalez, J. (s.f.). clasificacion de enzimas. Obtenido de http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz13.htm#c
Gonzalez, M. (26 de octubre de 2010). indicador redox. Obtenido de http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/indicador-redox
Martin, J. U. (12 de marzo de 2014). oxidorreductasa. Obtenido de http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz13.htm#c
Sierra, I. (28 de junio de 2013). practicas transporte de cargas en sistemas biologicos 7. Obtenido de http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/indicador-redox
