MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUÍMICA
R. NAVARRO
B. MESTAS
G. SUCASACA
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PRACTICA 9
TRANSPORTE DE ELECTRONES: ESTUDIO DE LA ACCION ENZIMATICA
DE LA SUCCINATO DESHIDROGENASA
OBJETIVO
1. Poner de manifiesto experimentalmente una de las etapas del metabolismo intermediario y
la acción de las enzimas de oxido-reducción, haciendo uso de un aceptor de electrones
como el azul de metileno.
2. Verificar la acción inhibitoria del malonato sobre la succinato deshidrogenasa y del cianuro a
nivel de la cadena respiratoria mitocondrial.
FUNDAMENTO
Las transformaciones biológicas de sustratos comprenden procesos de oxido-reducción
y transferencia de electrones a través de una serie de sistemas enzimáticos.
En las oxido-reducciones se produce transferencia de electrones a partir de un dador
hasta un aceptor. Algunas veces el transporte de electrones es realizado mediante la
transferencia de átomos de hidrógeno o bien átomos de hidrógeno y un electrón. las enzimas
que realizan este tipo de reaccione son las deshidrogenasas pudiendo ser piridin (NAD, NADH)
o flavina (FAD) dependientes; además existen los citocromos que son de naturaleza
ferroporfirínica y se encuentran ordenados de acuerdo a su potencial de oxido reducción
constituyendo la llamada "Cadena de Transporte Mitocondrial".
Algunos compuestos orgánicos coloreados, al aceptar hidrógenos se convierten en
leuco derivados. Tal es el caso del azul de metileno cuyo potencial de oxido-reducción es
+0.01 y el 2,6-diclorofenolindofenol cuyo potencial de oxido-reducción es +0.22.
La succinato deshidrogenasa (SHD) es una flavoproteína unida a hierro no hémico. El
metal tiene como finalidad actuar como enlace para conservación de energía y desacoplar los
dos equivalentes reductores del ion hidrogeno aceptado por la flavina y, finalmente estabilizar
la forma semiquinoide de la flavina.
Diversas sustancias pueden actuar inhibiendo los sistemas biológicos de oxido-
reducción. Por ejemplo, el malonato actúa específicamente inhibiendo a succinato
deshidrogenasa por un mecanismo competitivo; por lo tanto, la prueba experimental con azul
de metileno será negativa, es decir no se decolora por no haber movilización de electrones. El
cianuro, actúa impidiendo la reoxidación de los citocromos, pues se combina específicamente
con el Fe++ de la citocromo oxidasa; por ello los citocromos permanecen reducidos e
incapaces de seguir actuando y se bloquea la respiración.
MATERIAL
Sucrosa 0.25 M
Succinato de sodio 0.1 M
Malonato de sodio 0.5 M
Buffer fosfato pH 7.4 0.1 M
Azul de metileno 0.05%
Aceite mineral
Tubos de ensayo
Pipetas
Morteros
Centrífuga
METODO DE TRABAJO
