TEMA 1 FA
Se Sube la presión para obtener cristales. Pero para cristalizar una proteína primero tenemos que purificarla.
Hay muchas técnicas que permiten cristalizar proteínas para posteriormente tirarle rayos X y obtener su
estructura interna. Bota colgante.
Cristalización: tenemos la proteína purificada y soluble, pero así es imposible aplicarle la difracción de rayos
x. Se usan concentraciones 2-50 mg prot/mL.
GRAFICA: eje vertical: diferente concentraciones de proteína soluble. Estas concentraciones se muestran con
un precipitante el cual va aumentando de forma paulatina. EL más común es el polietilenglicol (precipitante).
Zona amarilla: por mucho que aumente concentración de precipitante la proteína se mantiene soluble. Si no
consigo precipitar la proteína, aumentamos su concentración y volvemos a aumentar la concentración de
precipitante y pasamos a la zona roja donde tenemos un cristal de la proteína, pero no vale cualquier cristal,
debe tener un tamaño determinado (0’1-0’5 mm). Este tamaño es el adecuado para aplicar la difracción de
rayos X. Obtención del cristal de la proteína para aplicar la difracción de rayos X: nucleación. En la zona azul
los cristales no tienen el tamaño adecuado.
Hay que optimizar el procedimiento.
Método de la gota colgante
En el fondo de las placas con pocillos se mete una mezcla de la proteína soluble con un poco de
polietilenglicol. Una vez se ha mezclado a diferentes concentraciones, por eso se usa placas con diferentes
pocillos optimizando así, se le da la vuelta y el pocillo se pone en contacto directo con una solución rica con
solo precipitante. Se deja así, físicamente no se mezclan, pero químicamente sí. Como la gota esta menos
concentrada, el sistema tiende a equilibrar concentraciones, con eso se consigue que poco a poco la gota se
va a ir secando porque el precipitante va pasando hacia la zona mas concentrada quedándose el precipitado
cristalizado. La gota se queda pegada por la fuerza que ejerce la tensión superficial.
Difracción de rayos X
Wilhelm Conrad Röntgen, fue la primera persona que usó los rayos X para ver el interior de una mano. Max
von Laue y Paul P. Ewald descubrió que eran radiaciones electromagnéticas.
Max Von Laue coloco un cristal de sulfato de cobre y descubrió que los cristales podían pasar la muestra y se
refractaban a un panel de refracción. Estos rayos X refractados tienen una naturaleza ondulatoria, formados
por un componente eléctrico y otro magnético. Describió que los rayos X se comportan como ondas
electromagnéticas.
Diferencia entre rayos X blandos y duros únicamente es la longitud de onda (diferencia entre los picos). Se
pueden generar por una lanza de rayos X. Los rayos X duros implica que su longitud de onda es menor. Si la
longitud de onda es más pequeña, tienes mayor probabilidad de que “choque” más y se vea más su
estructura pro dentro, ves con más precisión. La frecuencia que utilizan es de 14THz, genera mucha calor, la
proteína se desnaturaliza. DE modo que se usan rayos X blandos, que también generan calor, pero los
cristalógrafos refrigeran la muestra con nitrógeno gaseoso sobre el cristal de la proteína cuando se esta
aplicando la difracción de rayos X, así hacen que se desnaturaliza del todo.
Aportaciones de este señor
1. Rayos X tienen una naturaleza ondulatoria
2. Los cristales se comportan como rendija de difracción: sobre la placa fotográfica se generan una
serie de manchas. Se genera un cambio de dirección del rayo X por las celdillas unidades que se
