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Orientación Universidad
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tema 4 bioquimica, Apuntes de Bioquímica

Asignatura: Bioquímica, Profesor: María Teresa Portolés, Carrera: Biología, Universidad: UCM

Tipo: Apuntes

2013/2014

Subido el 28/06/2014

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gontxi52 🇪🇸

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PROPIEDADES ÁCIDO-BASE
CARÁCTER MULTIDISOCIABLE: extremos N y C terminales, cadenas R ionizables
SOLUBILIDAD dependiente de:
-Temperatura
-pH
-Concentración salina: Efectos “Salting in”, “Salting out”
-Adición de ácidos: tricloroacético (TCA), perclórico (PCA)
- Disolventes orgánicos: etanol, acetona
Tema 4.-Propiedades físico-químicas de las proteínas. Aislamiento de
proteínas. Determinación de características moleculares de proteínas.
Salting-in
Salting-out
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¡Descarga tema 4 bioquimica y más Apuntes en PDF de Bioquímica solo en Docsity!

Tema 4.-Propiedades físico-químicas de las proteínas. Aislamiento deproteínas. Determinación de características moleculares de proteínas.PROPIEDADES ÁCIDO-BASECARÁCTER MULTIDISOCIABLE: extremos N y C terminales, cadenas R ionizablesSOLUBILIDAD dependiente de:- Temperatura - pH - Concentración salina: Efectos “Salting in”, “Salting out” - Adición de ácidos: tricloroacético (TCA), perclórico (PCA)- Disolventes orgánicos: etanol, acetona

Salting-in

Salting-out

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS

FACTORES A CONSIDERAR -^

Elevado número de proteínas en células y tejidos

-^

Concentración existente de una determinada proteína

-^

Actividad biológica de cada proteína, pH y temperatura de trabajo LIBERACIÓN DE LA PROTEÍNA DE LA CÉLULA O TEJIDO DE PARTIDA •^

Trituración Mecánica u Homogenización

-^

Choque Osmótico

-^

Tratamiento con disolventes

-^

Tratamiento con enzimas

-^

Sonicación TÉCNICAS DE AISLAMIENTO Y PURIFICACIÖNBasadas en diferencias de: -^

SOLUBILIDAD

-^

CARGA

-^

TAMAÑO (Pm)

-^

INTERACCIONES ESPECÍFICAS

MÉTODOS DE DETECCIÓN- Contenido TOTAL de proteínas (inespecífico)

Absorción a 280 nm, Biuret, Lowry, Bradford

  • Detección de proteinas específicas

Propiedades estructurales específicasFuncionalidad

* BASADAS EN LA DIFERENCIA DE SOLUBILIDAD

Precipitación y solubilización por saladoPrecipitación isoeléctricaFraccionamiento con disolventes

  • BASADAS EN LA CARGA ELÉCTRICA

Cromatografía de intercambio iónicoElectroforesis en gel de poliacrilamida

  • BASADAS EN EL TAMAÑO MOLECULAR

Electroforesis en gel de poliacrilamida/SDSCromatografía de exclusión molecularUltracentrifugaciónDiálisis

  • BASADAS EN LA ESPECIFICIDAD DE LIGANDOS

Cromatografía de afinidad

Tema 4

ULTRACENTRIFUGACIÓN

COEFICIENTE DE SEDIMENTACIÓN

S = v / w

2 r

1 SVEDBERG = 10

-13^ segundos

ECUACIÓN DE SVEDBERGM

= R T S / D (1 -

ўρ

DIÁLISIS

CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD

Tema 4