tinciones bateriologicas, Apuntes de Medicina

¡Descarga tinciones bateriologicas y más Apuntes en PDF de Medicina solo en Docsity!

TINCIONES

BACTERIOLÓGICAS

MSc: Jans Velarde Negrete

INTRODUCCIÓN

Las muestras clinicas y las suspensiones de microorganismos se pueden colocar sobre un portaobjetos de vidrio y se pueden explorar con el microscopio (es decir, estudio directo de una preparación en fresco). Aunque con este método se pueden ver microorganismos grandes (p. ej., elementos fungicos y parasitos) y material celular, a menudo es difícil el análisis. La microscopia con contraste de fases, puede superar algunos de estos problemas; de manera alternativa, una muestra o un microorganismo se pueden teñir con diferentes métodos

Tipos de Tinciones

CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS POR SU FORMA

TINCIONES DIFERENCIALES Tinción de Gram: constituye la base para separar los principales grupos de bacterias (es decir, grampositivas y gramnegativas). Tinción de azul de toluidina O: Se utiliza principalmente para la detección de microorganismos del género Pneumocystis en muestras respiratorias. Tinción de Wright-Giemsa: Se utiliza para detectar parásitos sanguíneos, cuerpos de inclusión víricos y por clamidias, y los géneros Borrelia, Toxoplasma, Pneumocystis y Rickettsia. Tinción de Ziehl-Neelsen: Se utiliza para teñir micobacterias y otros microorganismos acidorresistentes. Tinción acidorresistente modificada: Microorganismos se tiñen más débilmente (p. ej., Nocardia, Rhodococcus, Tsukamurella, Gordonia, Cryptosporidium, Isospora, Sarcocystis y Cyclospora ).

TINCION DE GRAM: FUNDAMENTO

Este método divide las bacterias en dos grupos: Gram positivos y Gram negativas. Al colocar los agentes como cristal violeta o violeta de genciana y añadirles una solución lugol, se combinan con algunos componentes de la celular bacteriana que son retenidos por la membrana citoplasmática cuando se tratan con alcohol acetona; otros, en cambio liberan rápidamente el colorante, por lo que no aparecerán a la visión microscópica a no ser que se contrasten con algún otro tinte biológico como safranina o fucsina. Por lo tanto los microorganismos que conservan el cristal violeta o violeta de genciana se observa de violeta Gram positivo y los que no lo hacen Gram negativos muestran un color que corresponde al colorante de contraste de color rosado.

ESTRUCTURA BACTERIANA: Gram -

TINCION DE GRAM: PROCEDIMIENTO

1.- EXTENSION

2.- DESECACION

3.- FIJACION (calor) 4.- ENFRIAR

TINCION DE GRAM: PROCEDIMIENTO

5.- 1º COLORANTE: Cubrir la preparación con Cristal violeta (1 min) o con Violeta de Genciana (3 min). 6.- LAVAR: Para escurrir el exceso de colorante lavamos con agua corriente. 7.- CUBRIR CON LUGOL durante 1 min., actúa como mordiente, es decir refuerza la unión microorganismo-colorante y al tiempo lo hace más refringente. 8.- ESCURRIR Y LAVAR 9.- DECOLORAR con alcohol-acetona (al 30 % v/v) o con alcohol 96º. 10.- LAVAR para cortar la decoloración con abundante agua. 11.-COLORANTE DE CONTRASTE o 2º contraste se utiliza Safranina durante 1 minutos (teñirá las bacterias Gram -). 12.-LAVAR 13.-SECAR: a temperatura ambiente. 14.-OBSERVACION CON OBJETIVO DE INMERSION

TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN

Algunas bacterias poseen en su pared lípidos complejos (ceras), que dificultan la penetración del colorante, y, además, ácidos grasos de cadena larga que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol ácido. Si forzamos la coloración con calor, llegan a teñirse, e incluso resisten la posterior decoloración con alcohol-ácido. De ahí la denominación de ácido alcohol resistentes (BAAR). Son muy pocos los microorganismos que poseen esta característica. Entre los más importantes se encuentran las Mycobacterias y las Nocardias

ESTRUCTURA BACTERIANA: BAAR

Estructura de la pared celular micobacteriana. Consta de (A)membrana plásmica, (B)peptidoglucano (C) arabinogalactano, (D)lipoarabinomanano con cabeza de manosa (E) proteínas asociadas a la membrana plasmática y a la pared celular, (F) ácidos micólicos y (G)moléculas de glucolípidos de superficie asociados a los ácidos micólicos M. tuberculosis, M. leprae, complejo M. avium, M. kansasii, M. fortuitum, M. chelonae, M. abscessus y

TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN: PROCEDIMIENTO

5.- COLORACIÓN. Se coloca sobre la extensión un trozo de papel de filtro y se cubre con Fucsina de Ziehl, dejándola actuar 1 minuto en frío. Y luego calentar hasta la emisión de vapores 4-5 min. 6.- ENFRIAR 3 minutos, quitar el papel de filtro y lavar con abundante agua. 7.- DECOLORACION. Con alcohol-clorhídrico (3% v/v), gota a gota hasta eliminar el colorante. 8.- COLORANTE DE CONTRASTE (2º colorante). Azul de Metileno durante 2 minutos, también se puede emplear verde de Malaquita. 9.- LAVAR con agua 10.-SECAR a temperatura ambiente. 1 1.-OBSERVAR. Con objetivo de inmersión

INTERPRETACIÓN