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Instituto Politécnico Nacional (IPN)Organización y Gestión del laboratorio

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Tipo: Guías, Proyectos, Investigaciones

2019/2020

Subido el 30/01/2020

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Practica 5 Permeabilidad celular
La membrana celular funciona como una barrera semipermeable, permitiendo el paso a
muy pocas moléculas a través de ella.
FUNCIONES DE LA MEMBRANA PLASMÁTICA:
1. Compartamentalización
2. Constituyen una barrera selectivamente permeable.
3. Transporte de solutos
4. Respuestas a señales externas
5. Interacción celular
6. Sitio de actividades bioquímicas
7. Transducción de energía
1) Demostración de la permeabilidad celular
Material
Vaso de precipitado
Solución de yodo
Solución de almidón al 1%
Bolsa de plástico
Condón
Celofán dulce
Hilo de algodón
Procedimiento
1. Llene el vaso de precipitados con agua hasta el 80% de su volumen, añádale
10 gotas de solución de yodo y agítelo.
Se llena el vaso de precipitados al 80% para evitar derrames al momento
de meter los sacos con solución de almidón, además se usa el yodo ya
que no es soluble en agua así que si existe un cambio de color en alguno
de los sacos podemos estar 100%seguros de que solo es permeable al
yodo.
2. Coloque unos mililitros de solución de almidón en la bolsa de plástico, en el
condón y en el celofán dulce. Cierre con el hilo de algodón.
La bolsa de plástico, el condón y el acetato (celofán) dulce son ejemplos de
membrana, es por esto que son llenadas con solución de almidón, ya que si son
permeables permitirán el paso del yodo, y existirá una coloración.
3. Sumerja los sacos con la solución de yodo y espere unos 10 minutos.
Se sumergen los sacos para ver si las membranas son permeables o no, el
tiempo es un tiempo dado para que la reacción de iodo con el almidón que debe
darse sea apreciable fácilmente, es decir que sea una reacción completa
4. Observe en dónde se formó el color azul (adentro o afuera de cada saco).
En el celofán hubo coloración azul por lo que es permeable a el yodo, ya que este provoco la
coloración azul, al reaccionar con la solución de almidón dentro del celofán.
En el condón no hubo coloración por lo que es impermeable.
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Practica 5 Permeabilidad celular La membrana celular funciona como una barrera semipermeable, permitiendo el paso a muy pocas moléculas a través de ella. FUNCIONES DE LA MEMBRANA PLASMÁTICA:

  1. Compartamentalización
  2. Constituyen una barrera selectivamente permeable.
  3. Transporte de solutos
  4. Respuestas a señales externas
  5. Interacción celular
  6. Sitio de actividades bioquímicas
  7. Transducción de energía
    1. Demostración de la permeabilidad celular Material  Vaso de precipitado  Solución de yodo  Solución de almidón al 1%  Bolsa de plástico  Condón  Celofán dulce  Hilo de algodón Procedimiento
  8. Llene el vaso de precipitados con agua hasta el 80% de su volumen, añádale 10 gotas de solución de yodo y agítelo. Se llena el vaso de precipitados al 80% para evitar derrames al momento de meter los sacos con solución de almidón, además se usa el yodo ya que no es soluble en agua así que si existe un cambio de color en alguno de los sacos podemos estar 100%seguros de que solo es permeable al yodo.
  9. Coloque unos mililitros de solución de almidón en la bolsa de plástico, en el condón y en el celofán dulce. Cierre con el hilo de algodón. La bolsa de plástico, el condón y el acetato (celofán) dulce son ejemplos de membrana, es por esto que son llenadas con solución de almidón, ya que si son permeables permitirán el paso del yodo, y existirá una coloración.
  10. Sumerja los sacos con la solución de yodo y espere unos 10 minutos. Se sumergen los sacos para ver si las membranas son permeables o no, el tiempo es un tiempo dado para que la reacción de iodo con el almidón que debe darse sea apreciable fácilmente, es decir que sea una reacción completa
  11. Observe en dónde se formó el color azul (adentro o afuera de cada saco). En el celofán hubo coloración azul por lo que es permeable a el yodo, ya que este provoco la coloración azul, al reaccionar con la solución de almidón dentro del celofán. En el condón no hubo coloración por lo que es impermeable.

El color azul se forma debido a la reacción del yodo con el almidón, razón por la cual este reactivo se utiliza para identificar la presencia de almidón en alimentos. Con esta reacción se comprueba la permeabilidad del acetato dulce y la impermeabilidad del condón. Esta reacción es el resultado de la formación de cadenas de poliyoduro a partir de la reacción del almidón con el yodo presente en la solución de un reactivo llamado Lugol. La amilosa, el componente del almidón de cadena lineal, forma hélices donde se juntan las moléculas de yodo, formando un color azul oscuro a negro.

  1. Demostración de la presión osmótica La presión osmótica Π, es la presión adicional que es necesario aplicar a la disolución para que μA en la disolución sea igual al μA * de forma que se alcance el equilibrio para la especie a través de la membrana que separa la disolución de la sustancia A pura. Material: Un huevo. Un capilar, Una espátula o cuchara de metal. Cera Agua Vaso de precipitado o un frasco. Procedimiento:
  1. Tomar el huevo y con una espátula o cuchara, cuidadosamente darle unos golpecitos en el extremo más ancho, para conseguir que el cascaron se fracture. Esto es para romper el cascarón y no afecte al proceso de la presión osmótica ya que el cascarón es una membrana permeable, y nos interesa demostrar la presión osmótica de la membrana interna del huevo la cual es menos permeable porque tiene mayor cantidad de proteínas.
  2. Con los dedos quitar poco a poco el cascaron dejando un espacio cuadrado de 1. cm sin romper la membrana. Se retira el cascaron para dejar a la vista la membrana la cual se debe dejar intacta, ya que esta es la que estará en contacto con el medio hipotónica que es el agua.
  3. En el otro extremo hacer el mismo procedimiento, pero solo quitar un poco de cáscara. En este caso no se ocupa quitar gran parte de cascarón ya que en este lado pondremos el cascarón, además de que en este paso no se quita membrana porque la ocupamos intacta para el siguiente paso.
  4. En el extremo agudo, introducir con cuidado un capilar hasta que atraviese la membrana. Sellar con cera el espacio entre el capilar y el cascaron. El capilar atraviesa la membrana para estar en contacto con el medio hipertónico, es decir el contenido del huevo. Se sella para evitar la entrada de otra presión y asegurar la posición del capilar.
  5. Poner el agua hasta el borde en un frasco, asentar el huevo por el lado ancho y con la membrana integra, y que está en contacto con el agua. La membrana esta en contacto con el agua, ya que el agua es el medio hipotónico y el huevo el hipertónico y el agua debe atravesar la membrana del huevo para demostrar la presión osmótica.

Practica 6 ¿Oxidación igual a vejez? Los peroxisomas son vesículas simples limitadas por membranas con un diámetro de 0. a 1.0 μm que contiene un centro denso y cristalino de enzimas oxidativas. Son organelos con múltiples funciones y contienen más de 50 enzimas que participan en actividades tan diversas como la oxidación de ácidos grasos de cadena muy larga y la síntesis de plasmalógenos (lípidos similares a los fosfolípidos que en el carbono 1 poseen una unión éter, no ester, C-O-C). En los peroxisomas se produce peróxido de hidrógeno por acción de varias enzimas como la Oxidasa de Urato, oxidasas de aminoácidos. El H 2 O 2 generado se degrada rápidamente mediante la enzima catalasa, que está presente en grandes concentraciones en estos organelos. La actividad de esta enzima evita la vejez y la muerte celular prematura. La catalasa es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos aerobios. Cataliza la dismutación del peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno. Los peroxisomas se encuentran sobretodo en el hígado, pues cumplen funciones de oxidación, sobretodo del H2O2, razón por la cual al realizar el experimento se libera oxígeno, pues al oxidar el H2O2 con la enzima catalasa, produce agua y O2. Material Agua oxigenada (H 2 O2) al 3% Higado de pollo 1 frascos de plástico con tapa (para análisis de orina) Una probeta de 50 o 100 ml Vaso de precipitados de al menos 250 mL 40 cm de manguera transparente Silicón Agua

Procedimiento

  1. Coloque un poco de higado dentro del frasco de plástico Usaremos hígado ya que es el órgano con el mayor número de peroxisomas y se coloca en un frasco para que el O2 que se va a formar se desprenda al aire.
  2. Mientras tanto, tome la tapa del frasco de plástico y haga 1 hoyo en la tapa. Se hace un hoyo en la tapa para colocar una manguera que según la teoría, transportara el O2 formado al degradar el H2O
  3. Introduzca un poco de la manguera por el orificio y selle los bordes con silicón Los bordes se sellan para evitar la pérdida de O
  4. Llene la probeta con agua hasta el borde e introduscala de manera invertida en el vaso de precipitados sin que se salga el agua. La probeta es un material volumétrico, por lo que es ideal para medir el volumen de agua desplazado y la cantidad de oxigeno que se libera, razón por la cual es llenada con agua y se evita la salida de la misma.
  5. Llene el vaso de precipitados con agua hasta la mitad del mismo Se llena el vaso a la mitad para asegurar que la probeta siempre este llena antes de producir la reacción.
  6. Introduzca con cuidado el extremo libre de la manguera por la entrada de la probeta. Se introduce la manguera para conectar el frasco con el hígado con la probeta y observar el fenómeno de transporte del O
  7. Tome 5 ml de H 2 O 2 al 3% y agréguela a higado que está dentro del frasco de plástico. Se agrega el H2O2 porque el hígado tiene una enzima que degrada el H2O en oxígeno y agua, que es el fenómeno a estudiar.
  8. Cierre inmediatamente el frasco y describa lo que sucede. La degradación del H2O2 es una reacción rápida, ya que esta sustancia es tóxica para el organismo, por esto se debe cerrar inmediatamente, además de que produce efervescencia.
  9. Mida el volumen de agua en la probeta a los 5 min de reacción. Se mide el volumen para ver cuanto O2 fue liberado, ya que desplazara a el agua afuera de la probeta y ese espacio liberado será ocupado por el O2.
  10. Reporte el volumen de agua que se desplazó y calcule la cantidad de oxigeno que se liberó.

Material Cebolla con raíces Frasco con agua Navaja Vaso de precipitados de 50 mL Gotero Parrilla eléctrica Portaobjetos Cubreobjetos Microtubo de 1.5ml Colorante de Wright HCl 1N Agua Destilada Procedimiento Obtención de células de cebolla en mitosis

  1. Colocar la cebolla sobre un frasco lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del bulbo o suela se mantenga en contacto permanente con el nivel del frasco. Las células se elongan verticalmente mediante la absorción de agua, en la zona apical donde se encuentra el meristemo. Las células del meristemo se dividen a gran velocidad.
  2. Evitar que se seque, manteniendo el nivel del agua. Las raíces en crecimiento necesitan de constante cambio de agua y de un nivel constante de agua. 3. A los 2 o 3 días, a temperatura ambiente, las raíces habrán alcanzado unos tres cm. de longitud. Esto se debe a la constante absorción de agua. Y al alargamiento de las células debido a esto. Preparación microscópica de la raíz
  3. Cortar con un bisturí (con cuidado) 1cm de la raíz de cebolla, en la zona en donde se encuentra el meristemo. Se corta de la zona del meristemo porque es el tejido joven o embrionario, donde se encuentra los lugares de crecimiento de vegetales, razón por la cual encontraremos células en proceso de mitosis.
  4. Depositar en un microtubo de 1.5ml, de 1 a 3 pedazos de raíz, y agregarles HCl 1N hasta 2/3 partes del volumen del tubo. Se usa el HCl para que se rompa el nucleo de la celula y aparezcan los cromosas, demasiado acido podría llevar a la destrucción de todas las celulas
  1. Calentar en baño maría a 60°C por 12 minutos. Se calienta para aumentar la velocidad con la que se rompe el nucleo de la celula, pues normalmente podría llevar horas o días pero el calor acelera la ruptura.
  2. Retirar del baño maría. Con una pipeta Pasteur, desechar el ácido. Se retira con pipeta pasteur para evitar que las raíces se bañan si usaramos decantado.
  3. Con unas pinzas de disección, sacar las raíces con cuidado, y depositarlas en una caja de Petri. Se transfiere a una caja de Petri porque el microtubo aun tiene restos de HCL y no tendría sentido el hacer el lavado ahí pues seguiría conteniendo HCL
  4. Lavar 2 veces con agua destilada las raíces para quitar el exceso de ácido. Se lava con agua destilada para eliminar el exceso de HCl.
  5. Cubrir las raíces con Colorante de Wright y dejarlo teñir por 12 minutos. El colorante de Wrigt teñirá los cromosomas facilitando su obsevación.
  6. Desecha el colorante con una pipeta Pasteur. Se desecha el colorante después del tiempo indicado pues si se deja más tiempo puede quemar la muestra.
  7. Lava 2 veces con agua destilada. Se lava para eliminar los restos de colorante que no se fijaron a la muestra.
  8. Transfiere las raíces a portaobjetos. Poner una gota de agua destilada. Se transfiere a un porta objetos para observar bajo microscopio, se le añade una gota de agua destilada para realizar uan microscopía de inmersión, y aumentar la resolución del microscopio.
  9. Coloca un cubreobjetos limpio, y presiona la raíz, dando golpecitos, de manera que la raíz se aplaste. Se coloca el cubreobejtos para cubrir la muestra y observar bajo el miscroscopio, y tener una imagen más nitida
  10. La segunda raíz se aplastará, presionando y girando el cubreobjeto, para “abrir la raíz”. Se abre la raíz para observar el interior de la raíz, lugar donde se encuentran las células meristemicas.
  11. Observar las preparaciones con los objetivos seco débil y seco fuerte. El objetivo seco débil se refiere a 10x y se usa para localizar la imagen a observar. Y El objetivo seco fuerte se refiere al objetivo 40x y se usa para enfocar la imagen objetivo que fue localizada con el objetivo seco débil. Observación de células mitóticas

PRÁCTICA No. 10 CROMATINA SEXUAL X EN CELULAS EN CELULAS DE LA MUCOSA BUCAL DE HUMANO Fundamento La cromatina sexual A se define como un corpúsculo intranuclear, de forma planoconvexa de 0.7 a 1.2 μm de diámetro. Está presente en la mayoría de las célulasm de diámetro. Está presente en la mayoría de las células de mujeres normales. La cromatina X corresponde a la condensación de uno de los cromosomas X en la mujer. Las células que contienen uno o más gránulos (cromatinas X) se dice que son cromatina X positivas y aquellas que no la tienen son cromatinanegativas. Los corpúsculos de Barr pueden ser teñidos con un gran número de colorantes nucleares como violeta de cresilo, tionina, hematoxilina, verde de metilo y orceína. Procedimiento

  1. Enjuague su boca antes de iniciar la práctica. Se enjuaga la boca para eliminar bacterias y microorganismos obteniendo así una muestra más limpia.
  2. Con un abatelenguas realice un raspado de la mucosa oral. Se realiza para recoger células para su análisis.El estudio en mucosa oral nos permite identificar la cromatina x
  3. Coloque el raspado en un portaobjetos y realice un frotis. Fije éste a la flama. Tiña con colorante de Wright durante 10 minutos. El frotis se realiza para extender la muestra por el portaobjetos para su análisis, Se fija con calor para preservar la morfología de las células pero

no de las ultraestructuras. Se usa colorante de Wright pues permite la observación pues tiñe de azul las partes acidas de la celula y de rosado las partes alcalinas, y en este caso teñirá la cromatina de morado.

  1. Lave con agua corriente, chorro suave. Se hace un lavado para evitar la precipitación del colorante sobre la muestra.
  2. Ponga un cubreobjeto Se usa para cubrir los obejtos o muestras que están el portaonejtos para su posterior observación en el microscopio.
  3. Observe al microscopio. Corpúsculo de Barr: son masas de cromatina sexual altamente condensadas que

encontramos en los núcleos de las células somáticas de las hembras, Al estar tan

condensado, es un cromosoma inactivo. Una mujer tiene cromatinas positivas y un

hombre cromatinas negativas.

Si una mujer no presenta corpúsculo(x) de Barr presenta síndrome de Turner

Si un hombre presenta corpúsculo de Bar presenta síndrome de Klinefelter (xxy)

El estudio que se hace para encontrar el corpúsculo de barr se llama cariotipo

también están los estudios de la cromatina x y el barrido bucal. Aunque con este

ultimo no pudimos observar el corpúsculo de barr quizás debido a la capacidad de

resolución del microscopio.