Allestimento preparati per la microscopia
Microscopia Ottica
1. Fissazione
Scopo: bloccare le funzioni biologiche (autolisi) e conservare la morfologia.
Tipi:
oChimica (es. paraformaledide 4%): con fissativi coagulanti e non coagulanti.
oFisica: congelamento a -80°C (azoto liquido).
2. Disidratazione e Diafanizzazione
La disidratazione è fondamentale perché altrimenti si favorirebbe la proliferazione batterica
data dalla presenza di acqua.
Disidratazione progressiva con immersione in alcol da 35% → 100%.
L’alcol al 70% è detto di soggiorno, invece tra ogni immersione deve passare 1 ora circa.
Rimozione alcol con xilene a concentrazione crescente → tessuto trasparente
(diafanizzazione).
3. Inclusione
In paraffina fusa (50-60°C), che solidifica a temperatura ambiente.
Si ottiene un blocchetto pronto per il taglio.
4. Taglio
Con microtomo (rotativo o a slitta).
Sezioni sottili (4-5 µm), messe su vetrino con bagnomaria e poi in stufa (<50°C).
5. Sparaffinatura e Reidratazione
Rimozione paraffina con xilene.
Reidratazione graduale (alcool 100% → acqua).
6. Colorazione
Ematossilina (basica): colora nuclei e ribosomi (viola).
Eosina (acida): colora citoplasma (rosa).
Dopo: disidratazione + xilene.
