Lezione Palladino numero 2: Per vedere i tessuti, i campioni, abbiamo bisogno di uno strumento che è il
microscopio. Esistono diversi tipi di microscopio. Infatti, la prima distinzione che si può fare è tra
microscopio ottico e microscopio elettronico. Il nostro occhio arriva più o meno a 200 micrometri, ovvero lo
spessore di un capello, la punta di uno spillo, ma oltre non riusciamo a vedere; ecco che quindi ci viene in
soccorso il microscopio ottico che un potere di risoluzione di 200 nm, per vedere quindi un tessuto nella sua
interezza, ma anche le cellule come un globulo rosso, ma anche delle strutture un po’ più piccole come un
batterio li riusciamo a vedere, ma se ci volessimo spingere oltre, ovvero osservare le proteine o delle
strutture interne alla cellula, ovvero tutto ciò che concerne la microscopia elettronica, con il microscopio
ottico non riusciamo e quindi dobbiamo usare quello elettronico, che ha un potere risolutivo di 0,2 nm. Da
cosa deriva questa differenza? L’ingrandimento è una delle caratteristiche fondamentali, l’altra cosa
importante è il potere risolutivo ovvero la distanza minima, tra due oggetti sufficiente per distinguerli
come separati. E dipende da questa formula la risoluzione: ovvero lampada che si trova al numeratore,
fratto 2nxsena, questo dipende dall’obiettivo utilizzato. La cosa fondamentale è lampada, ovvero la
lunghezza elettromagnetica utilizzata. Il nostro occhio cosa vede? La luce visibile, lo spettro
elettromagnetico che vale circa 800 nm fino a 600, prima ci sono gli UV che noi esseri umani non riusciamo
a vedere, ma esistono ad esempio gli insetti oppure i serpenti che riescono a captarli; dall’altro lato ci sono
gli infrarossi che ugualmente non riusciamo a percepire mentre altri animali sì, come ad esempio i topi, i
quali se vengono messi infatti in delle gabbiette rosse credono di essere al sicuro, perché per loro è come se
fosse un muro, mentre per noi che non le vediamo è trasparente e possiamo osservarli. Riducendo la
lunghezza d’onda si possono ottenere delle informazioni più risolute sul bersaglio che ci poniamo davanti.
Il microscopio ottico ha una fonte luminosa, delle lenti che indirizzano il fascio luminoso che si sta aprendo
sul nostro campione, il vetrino che arriva agli obiettivi e passa agli oculari e noi lo vedremo. A questo punto
prima degli oculari potremo passarlo anche alla fotocamera in modo da non dover trascrivere ma
semplicemente fare la foto. L’ingrandimento totale dipende da due porzioni del microscopio, uno è
l’obiettivo e va da 4 a 100 bel e dall’altro componente del microscopio che è l’oculare il cui ingrandimento è
fisso ed è di 10 bel (?). Dunque, un ingrandimento massimo ottenibile è di 1000 bel, moltiplicando i 10 bel
dell’oculare con i 100 bel dell’obiettivo. Con questa modalità di illuminazione che si chiama campo chiaro;
alcune strutture che sono trasparenti come le cellule, pertanto, non si vedono perché hanno poco contrasto
e quindi si aggiunge una apertura centrale, questo foretto, che determina una diffrazione della luce che va
fuori fase si dice e determina a seconda della rifrangenza delle strutture, un contrasto elevato. Questo tipo
di osservazione si chiama campo scuro. Un batterio, ad esempio, con questo secondo tipo si riesce ad
osservare. L’oculare del microscopio elettronico ed è quello che fornisce l’ingrandimento, al di sotto
abbiamo c’è un revolver (perché è proprio come una pistola) con gli obiettivi, che ce ne sono di vari di tipi,
quello piccolino è il 4 bel mentre l’altro il 10/20 ed infine quello da 100. A seconda se noi vogliamo
aumentare o diminuire l’ingrandimento si gira questo revolver e si cambia l’obiettivo. Abbiamo un tavolino
porta oggetti dove andremo a posizionare il vetrino, si blocca qui e per muoverlo c’è questa manopola che
viene detta assiale; ci sono due manopole una sopra ed una sotta, c’è una rotella; si chiama assiale perché
una permette di mettere a fuoco sul piano delle x e l’altro sul piano delle y. Quindi, si sposta. Una altra cosa
fondamentale del microscopio ottico è la fonte luminosa, ovvero una lampada o una luce che ha una
determinata lunghezza d’onda. Questa altra manopola che vediamo è quella più grande la macrometrica e
quella più piccola la micrometrica e ci permettono di aggiustare, mettere a fuoco sul nostro campione,
quindi mettere a fuoco diverse strutture: maggiore sarà la linea di ingrandimento e minore sarà lo spessore
della nostra sezione che riusciremo a mettere a fuoco nello stesso momento. Dunque, più volte si dovrà
cambiare. Un tessuto è tipicamente trasparente anche perché per essere visualizzate ad un microscopio
ottico si deve mettere un vetro sottilissimo, ovvero 5 micrometri di spessore. Per aumentare il contrasto
delle cellule dei tessuti o per visualizzarle, studiarle si utilizzano delle colorazioni e questo è fondamentale
in istologia. I coloranti possono essere vitali o che richiedono la fissazione. Il colorante vitale è il trypan
blue. La maggior parte dei coloranti utilizzati nei preparati istologici richiede che il campione sia fissato e
