Artículo de pcr multiplex, Resúmenes de Genética

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PRIMER ARTÍCULO POBLACIÓN EN MALAYOS Sensible: tiene la capacidad de que funciona a pesar de tener pequeñas concentraciones o muy poco DNA Rápida Robusta: Tiene la capacidad de amplificar a pesar de que este contaminada con reactivos o proteínas - Hay que tener dos primers que es un forward — reverse cada uno amplifica en sentido contrario (5”- 3”, 3”- 5”) - El cloruro de magnesio en un buffer importante para la polimerasa - Pfu polimerasa: pfu riding, va adicionando nucleótidos y va corrigiendo lo que va poniendo - — Taq polimerasa: la normalita Especificidad de la reacción: - Muestra de DNA - — Primers - — Longitud de 18 a 25 nucleótidos - Composición GC de 40-60%: se relaciona con la temperatura melting: temperatura en la que la hebra de DNA está 50% unida y 50% separada - Tmelting de ambos primers no diferir en 5grado - Tmelting del DNA blanco no diferir de los primers en 10 grados PCR insilico: se hace en internet, se mira el resultado hipotético o teórico PCR multiplex: Se utilizan varias parejas de primers para amplificar varios segmentos de genes al mismo tiempo. Se utilizan 6 primers (2 parejas para cada variante) PCR en tiempo real: cuantitativa con sonda (oligonucleótidos) fluorescente. Cuando la sonda se une a la cadena de DNA y brilla, se mide la cantidad de brillo para medir la cantidad de DNA que se está produciendo Análisis heteroduplex: tenemos el producto de la pcr y tenemos una mezcla de secuencia genética que es silvestre o normal y nuestro producto de per es mutante, Este tipo de análisis identifica SNP (polimorfismo de nucleótidos simple: se cambió un nucleótido por otro). Por ejemplo: Si se mezcla lo silvestre con la mutación, cuando no hay mutación se forma homoduplex, cuando hay mutación se forma una burbuja heteroduplex) - Las heteroduplex migran más lento en el gel: para confirmar SNP