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.DETERMINACION DE COLIFORMES EN AGUAS.docx
Tipo: Apuntes
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UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL (1610706) DETERMINACION DE COLIFORMES EN AGUAS METODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA Se requiere monitorear la descarga de la población “La Tomatera” a la quebrada “Chepita”. Una vez realizado el monitoreo y los análisis de ciertos parámetros fisicoquímicos y microbiológicos de las muestras colectadas, se muestran a continuación los resultados obtenidos para el análisis de coliformes empleando la técnica de filtración por membrana: Código muestra: JMR Dilución 10-5^ = 18 colonias rojo salmón y 13 colonias azul oscuro/morado Dilución 10-5^ = 10 colonias rojo salmón y 7 colonias azul oscuro/morado Dilución 10-6^ = 3 colonias rojo salmón y 1 colonia azul oscuro/morado Dilución 10-6^ = 1 colonias rojo salmón y 1 colonia azul oscuro/morado 1) Describa el procedimiento, incluyendo listado de materiales, cuentas para preparación de medio de cultivo y demás material de laboratorio requerido para llevar a cabo el análisis bajo las condiciones mencionadas. Materiales Probeta de 250 ml Erlenmeyer de 2000 ml Cajas petri pequeñas Pipetas de 10 ml Agar Chromocult Estufa Autoclave Equipo de filtración por membrana Bomba de filtración Membrana de nitrocelulosa Pinzas Frascos de vidrio estériles Peptona Agua destilada
Preparación de AGUA PEPTONA: Lavar con agua y jabón frascos de vidrio. Enjuague en solución de agua + cloro durante 10 minutos, por último, con agua destilada, escurrir y secar. Preparación del agua peptona: En un Erlenmeyer adicionar 1 gr de peptona con 1000 ml de agua destilada, homogenizar muy bien. Luego servir 225 ml de agua peptona a cada frasco de vidrio, sellar con aluminio y cinta tirro. Autoclavar y dejar reposar. Refrigerar hasta su uso. Marcar con cinta tirro los frascos. Preparación de AGUA DESTILADA ESTERIL: Lavar con agua y jabón 1 frasco de vidrio. Enjuague en solución de agua + cloro durante 10 minutos, escurrir y secar. Adicionar 400 ml de agua destilada, sellar con aluminio y cinta tirro. Autoclavar y dejar reposar. Refrigerar hasta su uso. Marcar con cinta tirro el frasco indicando que es agua destilada estéril. Preparación del PAÑO ESTERIL: Envolver en papel Kraft dos paños de limpieza, sellar con cinta tirro, marcar y esterilizar en el horno por 4 horas a 125°C TECNICA DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA La filtración por membrana es un proceso físico que trabaja con una bomba de vacío en el que las sustancias se separan mediante membranas de celulosa con una porosidad de 0.45 μm, reteniendo la gran mayoría de los microorganismos de un tamaño superior a la porosidad de los filtros. Luego, los filtros se retiran con pinza estéril y se colocan sobre la superficie de Cajas de Petri de tamaño pequeño con Agar Chromucult (para Coliformes y Escherichia coli) o cualquier otro agar dependiendo del analito o indicador microbiológico que se desee recuperar como Agar Estándar Plate Count para Aerobios Mesófilos o agar Cetrimide para Pseudomonas aeruginosa, entre otros. Luego debe incubar a temperatura apropiada dependiendo del analito que indague o busque. En este caso, 37°C/24 o 48 horas, para Coliformes y E. coli. Pasos para hacer la filtración por membrana
1. Armar el equipo de filtración 2. Colocar un filtro de nitrocelulosa en la unidad de filtración 3. Ajustar la campana y filtrar 100 ml de la solución 4. Con una pinza estéril, sujetar el filtro de membrana por uno de los bordes y colocarlo sobre la superficie de una caja petri con Agar Chromocult
2 )Calcule el número de coliformes totales y coliformes fecales en la muestra analizada en función a los resultados obtenidos (exprese los resultados en las unidades correspondientes a la técnica empleada).