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Asignatura: Metodos de laboratorio, Profesor: anonimo anonimo, Carrera: Biología, Universidad: UGR
Tipo: Apuntes
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ORÍGENES DE LA ESPECTROSCOPIA
Existe una relación inversa entre la longitud de onda y la energía del fotón correspondiente.
h=constante de Planck=6.63 x 10-^34 Js
Así, la energía UV es mayor que la del espectro visible. Sin embargo los rayos X son más energéticos que la luz UV, como se puede apreciar por su longitud de onda.
ESPECTRO DE LA RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA
E
λ
INTERACCION DE LA RADIACIÓN EM CON LA MATERIA
TRANSICIONES AL ESTADO EXCITADO
TRANSICIONES ELECTRÓNICAS Y ESPECTROS
REGRESO AL ESTADO FUNDAMENTAL
A- Fluorescencia- fosforescencia B- Disipación de energía pasando por diferentes estados rotacionales y vibracionales.
EMISIÓN DE RADIACIÓN
Producido porque las partículas una vez excitadas se relajan a niveles de menor energía en forma de fotones de mayor longitud de onda.
ESPECTROSCOPIA UV-VISIBLE
Leyes básicas de la absorción de luz
Instrumentación
Aplicaciones
Longitud del medio absorbente o ancho de la celda (paso de luz, paso óptico)
c = concentración
través de una solución, parte de la luz es absorbida resultando que la
LEYES BÁSICAS DE LA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN
La Ley de Lambert-Beer indica que la fracción de luz incidente que es absorbida por una solución es proporcional a la concentración de soluto (c) y al espesor del medio atravesado por la luz (paso óptico). La relación entre la luz incidente (I 0 ) y la transmitida (I) indicará la cantidad de radiación que ha sido absorbida por la muestra.
En medidas de espectroscopia de absorción UV/Vis lo dos parámetros mas utilizados son la Transmitancia (T) y la Absorbancia (A):
Transmitancia ( T ) es la relación entre la intensidad de luz transmitida por una muestra problema ( I ) con la intensidad de luz incidente sobre la muestra ( I 0 ):
La absorbancia o extinción ( A ) está determinada por la relación logarítmica
entre luz incidente y transmitida:
Tanto A como T son magnitudes adimensionales.
A = a·c·d
Habitualmente d es dada en términos de cm. Si c se expresa en gramos por litro, entonces la absortividad tiene unidades de l·g–^1 ·cm–^1.
Si d es dada en términos de cm y c en moles por litro, la absortividad tiene unidades de l.mol-1.cm-1. Se denomina entonces absortividad molar o
Siempre se requiere un tubo blanco que contenga todos los reactivos excepto el soluto que se desea medir. La absorbancia de este tubo se restará a la que presente la muestra.
Las determinaciones de un cromóforo en particular se realizan a una longitud de onda específica, distinta y característica de cada compuesto. Cada producto químico se caracteriza por zonas del espectro electromagnético en el cual absorbe con mayor o menor intensidad, conformando en su conjunto el llamado espectro de absorción de tal sustancia.
La determinación del espectro de absorción se realiza midiendo la absorbancia a distintas longitudes de onda.
ESPECTROS DE ABSORCIÓN
l
A
Las longitudes de onda con mayor absorción (picos) corresponderán de forma general a aquellas con las que se leerá la muestra para determinar su concentración l
A λmax
λmax
INSTRUMENTACIÓN
Un aparato capaz de medir la intensidad de la radiación, se denomina espectrofotómetro.
Se llama espectrofotometría de absorción a la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe un conjunto de sustancias o una sustancia en su estado puro a una determinada longitud de onda de la radiación lumínica.
Existen en la actualidad diversos tipos de aparatos con los mismos principios, los hay mecánicos y digitales; unos miden solo la luz visible, otros son más precisos y miden también luz U.V.
