Práctica Nro. 3
Extracción y Cuantificación de ADN de Tejido vegetal
AISLAMIENTO DE ADN GENOMICO
(Basado de Lópes et al., 1995.Molec. Genomic Genetic.247: 603-613; Modificado
por Hernández Godínez Fernando, 2008).
METDOLOGIA
1.-Moler 20mg (0.5gr-1gr) de tejido fresco previamente congelado con nitrógeno
líquido.
2.-Agregar 600µl (15mL) de buffer de lisis (Tris-HCl 100mM a pH 8.0, NaCl 20mM,
EDTA 20mM, y N- Lauril sarcosina al 1%) a tubo falcon de 50mL, así como el
polvo molido. Invertir hasta humedecer el polvo y dejar reposar por 10 minutos.
Para agilizar proceso se sustituye el paso 5. Aqui se agrega la RNAsa se deja
reposar a temperatura ambiente.
3.- Agregar 600µl (15mL) de fenol (equilibrado con tris) y vortear.
4.- Equilibrar en balanza los tubos (con fenol) y centrifugar por 20 minutos a 4°C a
12,000rpm.
5.-Retomar la fase acuosa y transferir a otro tubo, agregar 5µl (10µl)de RNAsa
(10mg/mL). Mezclar por inversión e incubara 37°C por 15 minutos.
6.-Precipitar sobre isopropanol frío 600µl (15mL) y sobre éste vaciar el
sobrenadante que viene de la incubación.
