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METODOS HEMATOLOGICOS, Diapositivas de Hematología

Tecnicas de hematologia, fundamento, material, interpretacion y conceptos basicos de la materia. Para practicas de laboratorio.

Tipo: Diapositivas

2019/2020

Subido el 03/06/2020

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Ácido elágico
COIS01-E 18/10/12 IMPORTADORES EXCLUSIVOS: LAB CENTER DE MEXICO S.A. DE C.V.
TEL : 01 (55) 5360-6772 Y 01 800 500 SPIN (7746)
www.spinreact.com.mx [email protected]
APTT
APTT
Determinación cuantitativa del Tiempo de Tromboplastina
Parcial Activada (APTT)
IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DEL MÉTODO
Los factores intrínsecos de la coagulación se activan en presencia de un
complejo fosfolipídico y un activador soluble en plasma citratado; se mide
el tiempo transcurrido después de la adición del cloruro cálcico (CaCl2)
hasta la formación del coágulo de fibrina3,4.
SIGNIFICADO CLÍNICO
La medida del tiempo de APTT, es la determinación más común junto con
la PT, sirve para determinar trastornos de la coagulación y es
particularmente sensible a los defectos de la coagulación intrínseca
(Factores VIII, IX, XI, XII).
Se usa normalmente para la monitorización de las terapias
anticoagulantes con heparina1,2.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS
R 1
Activador
Ácido elágico
Tampón y conservantes.
R 2
Iniciador Cloruro cálcico (CaCl2) 0,02M
Opcional CONTROL NORMAL REF: 1709104
CONTROL PATHOLOGIC REF: 1709106
PREPARACION
Los reactivos están listos para su uso.
R1: Una vez abierto es estable 1 mes a 2-8ºC.
CONSERVACION Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a
2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación.
Después de un almacenamiento prolongado puede aparecer un
sedimento amarillo.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. No congelar el reactivo.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
-Presencia de partículas y turbidez.
-Resultados en el Control de calidad fuera de los rangos establecidos.
-Variaciones de color.
MATERIAL ADICIONAL
-Coagulómetro o cronómetro y baño a 37ºC ± 0,5ºC.
-Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 1).
MUESTRAS
Plasma obtenido por punción venosa diluido 1/10 en solución de citrato
trisódico 3,8%.
Mezclar inmediatamente la sangre con el anticoagulante. Evitar la
formación de espuma.
Centrifugar la muestra a 2500 x g 15 min y transferir el plasma.
Usar solo contenedores de vidrio siliconado o plástico.
Los plasmas turbios, ictéricos, lipémicos o hemolizados pueden dar
resultados erróneos.
La muestra es estable 2 horas a temperatura ambiente (15-25ºC) o 28
días si se congela inmediatamente a 20ºC.
PROCEDIMIENTO
El reactivo puede emplearse en técnica manual, mecánica, foto-óptica o
con cualquier instrumento apto para detectar la formación del coágulo(Nota
2). En caso de emplearse en el instrumento BIOBAS1000, seguir las
instrucciones del instrumento.
CNICA MANUAL
1. Calentar a 37ºC los reactivos y la muestra.
2. Mezclar bien los reactivos sin agitarlos.
3. Pipetear en un tubo de ensayo limpio y seco:
Plasma citratado (µL) 100
R1 (µL) 100
4.
Mezclar bien e incubar exactamente 5 min. a 37ºC (tiempo de activación).
5. Pipetear:
R 2 (µL) 100
6. Mezclar
7. Poner en marcha el cronómetro o el controlador de tiempo del coagulómetro
y medir el tiempo de formación del coágulo, a partir de la adición del R2
Iniciador.
CÁLCULOS
Los valores se pueden expresar en segundos o en tasa de APTT, dividiendo el
resultado de la muestra (sec) por el tiempo de reacción del plasma Control
(sec).
APTT de plasma normal (pool %) en segundos
APTT del paciente en segundos
Tasa de APTT
CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
CONTROL NORMAL REF: 1709104
CONTROL PATHOLOGIC REF: 1709106
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
revisar el instrumento, los reactivos o la técnica.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
VALORES DE REFERENCIA
Se ha realizado un estudio exhaustivo con 250 muestras de una población sana
y como resultado se han establecido los valores de referencia siguientes:
APTT (segundos) 24 - 36 sec.
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia.
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Sensibilidad frente a la heparina:
Heparina conc. (unid/mL) APTT (sec)
0,0 28,8
0,1 38,3
0,2 50,1
0,3 63,1
0,4 80,9
0,5 98,0
Sensibilidad frente a los factores de coagulación:
Se considera una adecuada sensibilidad un factor de actividad <30-40%.
Factor % actividad APTT (sec) % Factor VIII APTT (sec)
VIII <1% 82,0 100%32,5
VIII 20%44,8 70%34,0
IX <1% 83,5 50%36,9
IX 20%40,9 40%38,9
XI <1% 134,2 30%40,8
XI 20%47,8 20%44,4
XII <1% >200 10%50,6
XII 20%36,2 5% 56,1
Prekallikrein <1% 69,5 1% 68,1
<1% 83,6
Estos valores deben ser usados solo como referencia. Cada laboratorio debe
establecer sus propio índice de sensibilidad a los factores individuales.
INTERFERENCIAS
No usar como anticoagulante oxalato sódico, EDTA o heparina.
Anticonceptivos orales, estrógenos o embarazo pueden influir en los resultados.
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en su
determinación5,6.
NOTAS
1. El material de laboratorio usado debe estar libre de restos de detergente.
2. Seguir minuciosamente las instrucciones del fabricante del instrumento. Los
resultados obtenidos deben ser validados por el laboratorio.
BIBLIOGRAFIA
1. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
2. Arkin C et al. One stage PT and APTT; Approved Guideline vol 16 nº 3 NCCLS 96.
3. Brandt A et al: Laboratory Monitoring of Heparin. Effect of Reagents and Instruments in the
APTT. Amer.J Clin. Path . 76:530,1981.
4. Wujastyk,J., Triplett D.A.:Selecting Instrumentation and Reagents for the Coagulation
Laboratory. Pathologist 37:398 (1983).
5. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
6. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
PRESENTACION
Ref: 1709201 R1: 5 x 4 mL
R2: 5 x 4 mL
Cont.

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Ácido elágico

COIS01-E 18/10/12 IMPORTADORES EXCLUSIVOS: LAB CENTER DE MEXICO S.A. DE C.V. TEL : 01 (55) 5360-6772 Y 01 800 500 SPIN (7746) www.spinreact.com.mx [email protected]

APTT

APTT

Determinación cuantitativa del Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada (APTT) IVD

Conservar a 2-8ºC

PRINCIPIO DEL MÉTODO Los factores intrínsecos de la coagulación se activan en presencia de un complejo fosfolipídico y un activador soluble en plasma citratado; se mide el tiempo transcurrido después de la adición del cloruro cálcico (CaCl 2 ) hasta la formación del coágulo de fibrina 3,4.

SIGNIFICADO CLÍNICO La medida del tiempo de APTT, es la determinación más común junto con la PT, sirve para determinar trastornos de la coagulación y es particularmente sensible a los defectos de la coagulación intrínseca (Factores VIII, IX, XI, XII). Se usa normalmente para la monitorización de las terapias anticoagulantes con heparina 1,2. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS

R 1 Activador

Ácido elágico Tampón y conservantes.

R 2 Iniciador

Cloruro cálcico (CaCl 2 ) 0,02M

Opcional

CONTROL NORMAL REF: 1709104

CONTROL PATHOLOGIC REF: 1709106

PREPARACION

Los reactivos están listos para su uso. R1: Una vez abierto es estable 1 mes a 2-8ºC.

CONSERVACION Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. Después de un almacenamiento prolongado puede aparecer un sedimento amarillo. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. No congelar el reactivo. Indicadores de deterioro de los reactivos:

  • Presencia de partículas y turbidez.
  • Resultados en el Control de calidad fuera de los rangos establecidos.
  • Variaciones de color.

MATERIAL ADICIONAL

  • Coagulómetro o cronómetro y baño a 37ºC ± 0,5ºC.
  • Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 1)^.

MUESTRAS Plasma obtenido por punción venosa diluido 1/10 en solución de citrato trisódico 3,8%. Mezclar inmediatamente la sangre con el anticoagulante. Evitar la formación de espuma. Centrifugar la muestra a 2500 x g 15 min y transferir el plasma. Usar solo contenedores de vidrio siliconado o plástico. Los plasmas turbios, ictéricos, lipémicos o hemolizados pueden dar resultados erróneos. La muestra es estable 2 horas a temperatura ambiente (15-25ºC) o 28 días si se congela inmediatamente a – 20ºC.

PROCEDIMIENTO El reactivo puede emplearse en técnica manual, mecánica, foto-óptica o con cualquier instrumento apto para detectar la formación del coágulo (Nota

  1. (^). En caso de emplearse en el instrumento BIOBAS1000, seguir las

instrucciones del instrumento.

TÉCNICA MANUAL

  1. Calentar a 37ºC los reactivos y la muestra.
  2. Mezclar bien los reactivos sin agitarlos.
  3. Pipetear en un tubo de ensayo limpio y seco:

Plasma citratado (μL) 100 R1 (μL) 100

  1. Mezclar bien e incubar exactamente 5 min. a 37ºC (tiempo de activación).
    1. Pipetear: R 2 (μL) 100
    2. Mezclar
    3. Poner en marcha el cronómetro o el controlador de tiempo del coagulómetro y medir el tiempo de formación del coágulo, a partir de la adición del R Iniciador.

CÁLCULOS Los valores se pueden expresar en segundos o en tasa de APTT, dividiendo el resultado de la muestra (sec) por el tiempo de reacción del plasma Control (sec).

APTT de plasma normal (pool %) en segundos

APTT del paciente en segundos Tasa de APTT

CONTROL DE CALIDAD

Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: CONTROL NORMAL REF: 1709104 CONTROL PATHOLOGIC REF: 1709106 Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos o la técnica. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

VALORES DE REFERENCIA Se ha realizado un estudio exhaustivo con 250 muestras de una población sana y como resultado se han establecido los valores de referencia siguientes: APTT (segundos) 24 - 36 sec. Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO Sensibilidad frente a la heparina: Heparina conc. (unid/mL) APTT (sec) 0,0 28, 0,1 38, 0,2 50, 0,3 63, 0,4 80, 0,5 98,

Sensibilidad frente a los factores de coagulación: Se considera una adecuada sensibilidad un factor de actividad < 30-40%. Factor % actividad APTT (sec) % Factor VIII APTT (sec) VIII <1% 82,0 100% 32, VIII 20% 44,8 70% 34, IX <1% 83,5 50% 36, IX 20% 40,9 40% 38, XI <1% 134,2 30% 40, XI 20% 47,8 20% 44, XII <1% >200 10% 50, XII 20% 36,2 5% 56, Prekallikrein <1% 69,5 1% 68, <1% 83, Estos valores deben ser usados solo como referencia. Cada laboratorio debe establecer sus propio índice de sensibilidad a los factores individuales.

INTERFERENCIAS No usar como anticoagulante oxalato sódico, EDTA o heparina. Anticonceptivos orales, estrógenos o embarazo pueden influir en los resultados. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en su determinación 5,6.

NOTAS

  1. El material de laboratorio usado debe estar libre de restos de detergente.
  2. Seguir minuciosamente las instrucciones del fabricante del instrumento. Los resultados obtenidos deben ser validados por el laboratorio.

BIBLIOGRAFIA

  1. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
  2. Arkin C et al. One stage PT and APTT; Approved Guideline vol 16 nº 3 NCCLS 96.
  3. Brandt A et al: Laboratory Monitoring of Heparin. Effect of Reagents and Instruments in the APTT. Amer.J Clin. Path. 76:530,1981.
  4. Wujastyk,J., Triplett D.A.:Selecting Instrumentation and Reagents for the Coagulation Laboratory. Pathologist 37:398 (1983).
  5. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
  6. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.

PRESENTACION Ref: 1709201 R1: 5 x 4 mL R2: 5 x 4 mL

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