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micro practicas de laboratorio
Tipo: Monografías, Ensayos
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Las medidas de seguridad en laboratorios son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la
salud de los que allí se desempeñan frente a los riesgos propios derivados de la actividad, para evitar accidentes
y contaminaciones tanto dentro de su ámbito de trabajo, como hacia el exterior. En ese entendido la OMS se
dio a la tarea de estudiar estos riesgos y clasificar a los laboratorios, para luego dar recomendaciones en lo que
se refiere a normas de bioseguridad. Los laboratorios se clasifican en:
Nuestro laboratorio se encuentra en el grupo de riesgo 1, nivel básico, en este nivel la OMS recomienda que es
necesario para minimizar riesgos:
➢ El Símbolo internacional de peligro biológico debe estar colocado en las puertas de los lugares donde se
manipulen microorganismos que puedan resultar patógenos al humano.
➢ Sólo se podrá entrar a las zonas de trabajo personal autorizado.
➢ Las puertas del laboratorio deben mantenerse cerradas.
➢ No se autoriza la entrada de niños en las zonas de trabajo del laboratorio.
Protección personal:
➢ Se usarán en todo momento batas o guardapolvos especiales para el trabajo de laboratorio.
➢ Se usarán guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que pueden entrañar contacto
directo o accidental con sangre, líquidos corporales y otros materiales potencialmente infecciosos. Una
vez utilizados los guantes, se retirarán de forma aséptica y a continuación se lavarán las manos.
➢ El personal y los estudiantes se lavarán las manos después de manipular muestras y antes de salir del
laboratorio.
➢ Se usarán lentes y caretas de seguridad para protección de los ojos y el rostro de salpicaduras, impactos
y fuentes de radiación ultravioleta artificial.
➢ Está prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio.
➢ Debe usarse calzado cerrado, prohibido entrar con sandalias.
➢ Está prohibido comer, fumar o beber en el laboratorio.
➢ No debe almacenarse comida para consumo humano en el laboratorio.
Procedimientos:
➢ Está estrictamente prohibido pipetear con la boca.
➢ No se colocará ningún material en la boca ni se pasará la lengua por las etiquetas.
➢ Todos los procedimientos técnicos se practicarán de manera que se reduzca al mínimo la formación de
aerosoles.
➢ Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales infecciosos se
comunicarán al supervisor del laboratorio. Se mantendrá un registro escrito de estos accidentes e
incidentes.
➢ Se elaborará y seguirá un procedimiento escrito para la limpieza de todos los derrames.
➢ Los líquidos contaminados deberán descontaminarse (por medios químicos o físicos) antes de eliminarlos
por el colector de saneamiento.
Zonas de trabajo del laboratorio:
➢ El laboratorio se mantendrá ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados con el trabajo.
➢ Las superficies de trabajo se descontaminarán después de todo derrame de material potencialmente
peligroso y al final de cada jornada de trabajo.
➢ Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados deberán ser descontaminados antes de
eliminarlos o de limpiarlos para volverlos a utilizar.
➢ Las ventanas que puedan abrirse estarán equipadas con rejillas que impidan el paso de artrópodos.
Clasificación de los Residuos:
➢ Desechos generales o comunes son aquellos que no presentan un riesgo adicional para la salud humana
y el ambiente y que no requieren de un manejo especial como papel, cartón, plásticos, restos de alimentos.
➢ Desechos peligrosos o especiales son aquellos que presentan un riesgo para la salud humana y el
ambiente y que requieren de un manejo especial como sangre y hemoderivados, fluidos corporales,
cultivos de agentes infecciosos, vacunas vencidas, cajas de petri, placas de frotis, órganos, tejidos, partes
corporales.
➢ Desechos cortopunzantes agujas, hojas de bisturí, hojas de afeitar, objetos de vidrio y cortopunzantes
desechables.
➢ Desechos especiales frascos de antibióticos y sachet de medicamentos
El trabajo en un laboratorio de Microbiología es significativamente diferente al de otros laboratorios, requiriendo
de unos cuidados especiales ya que se debe trabajar en condiciones que se evite la contaminación del operario,
de las muestras y del ambiente. Por todo ello es necesario reconocer cada uno de los materiales que son
utilizados en laboratorio de Microbiología y reconocer el uso que se le da en el mismo. Es cierto que muchos
materiales se comparten con otros laboratorios, sin embargo en microbiología se da un uso especial porque el
objetivo es diferente. Ejemplo: el caso de un mechero, que se utiliza para esterilizar.
✓ Describe y dibuja el material empleado en las prácticas de microbiología, y la solución de problemas
✓ Reconoce el uso correcto del material y equipo en las prácticas de microbiología, para la solución de
problemas que se presentan en el campo de trabajo del profesional.
EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN
1 Portaobjetos 10 pzas
2 Cubreobjetos 10 pzas
3 Tubos de ensayo 10 pzas
4 Tubos de hemolisis 10 pzas
5 Cajas Petri 5 pzas
6 Asas bacteriológicas 4 pzas
7 Frascos Scott de 250 ml 3 pzas
8 Pipetas de 10 ml 2 pzas
9 Frascos lavadores 2 pzas
10 Gradillas 3 pzas
11 Varillas de tinción 2 pzas
12 Goteros 2 pzas
13 Probetas de 100 ml 2 pzas
14 Bastones o varillas de vidrio 2 pzas
15 Espátula de drigalski 2 pzas
16 Pinzas anatómicas punta roma 4 pzas
17 Microscopios 6 pzas
EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN
17 Centrifugadora 1 pzas
18 Autoclave 1 pzas
19 Horno de calor seco 1 pzas
20 Incubadoras 1 pzas
21 Baño de agua o maría 1 pzas
22 Refrigeradores 1 pzas
23 Mechero de alcohol 2 pzas
24 Mechero de gas 4 pzas
25 Balanzas 2 pzas
Ítem DENOMINACIÓN
1 Alcohol al 70 % 20 Ml
➢ Trabajo en grupos pequeños
➢ Describiendo los materiales y su aplicacion durante las practicas
Dos periodos de 50 minutos
No se aplica
Debido a que las bacterias y otros microorganismos son muy pequeños, se requieren generalmente
tinciones biológicas para visualizarlos adecuadamente y demostrar el fino detalle de sus estructuras internas
y su morfología. En la coloración de Gram el Cristal Violeta actúa como colorante primario o básico, que se
une a la pared celular bacteriana, luego de un tratamiento con una solución débil de lugol (Mordiente).
Algunas especies bacterianas debido a la naturaleza química de sus paredes celulares poseen la capacidad
de retener el colorante primario o básico (Cristal Violeta), luego de una decoloración con una mezcla de
alcohol y acetona o con alcohol al 95 %. Tales bacterias se denominan Gram positivas. Las bacterias Gram
negativas, debido a su mayor contenido lipídico en su pared celular, pierden la coloración primaria (Cristal
Violeta) cuando son tratadas con el decolorante y por lo tanto deben tomar el colorante secundario o de
contraste que es la Fucsina o Safranina. Las bacterias Gram negativas aparecen de color rosadas o rojas
vistas al microscopio y las bacterias Gram positivas aparecen de color violeta purpúreo.
1.1 Fundamento de la coloración de Gram:
Este método divide a las bacterias en dos grupos: Gram positivos y Gram negativas. Al colocar los
agentes como cristal violeta o violeta de genciana y añadirles una solución lugol, se combinan con
algunos componentes de la célula bacteriana que son retenidos por la membrana citoplasmática cuando
se tratan con alcohol acetona; otros, en cambio liberan rápidamente el colorante, por lo que no
aparecerán a la visión microscópica a no ser que se contrasten con algún otro tinte biológico como
safranina o fucsina. Por lo tanto, los microorganismos que conservan el cristal violeta o violeta de
genciana se observan de violeta Gram positivo y los que no lo hacen Gram negativos muestran un color
que corresponde al colorante de contraste de color rosado.
1.2 Integridad de la Pared Bacteriana
Si bien se ha demostrado que la pared no toma el colorante, desempeña un importante papel en el
equilibrio de pasaje y retención del colorante primario (Cristal Violeta). Se ha observado que las células
mutiladas en su pared no se tiñen por el Gram y pese a ser Gram positivas, aparecen como Gram
negativas. La pared intacta constituye una barrera importante para la elusión del colorante por el alcohol.
Las células Gram positivas y Gram negativas acumulan el colorante primario por medio de un eslabón
iónico entre los grupos básicos del colorante y los grupos ácidos de la célula.
1.3 Intervención de los componentes químicos:
Es muy probable que la composición química y la permeabilidad de la bacteria, intervengan en la
diferenciación del Gram. Los lípidos, polisacáridos, ácidos grasos, nucleoproteínas y ciertos ésteres
fosfóricos intervienen en la coloración. La presencia de mucopéptidos en las Gram positivas y de mayor
cantidad de lípidos en las Gram negativas, podrían ser factores para tener en cuenta. En las Gram
negativas los lípidos serian disueltos en gran parte por el alcohol, facilitando la salida del colorante
primario.
1.4 Importancia de Otros Componentes:
a. Lugol: actúa penetrando en ambos tipos de bacterias, formando un precipitado Cristal Violeta-
Yodo.
b. Alcohol-acetona: es en esta etapa donde realmente tiene lugar la diferenciación. En las Gram
negativas, el alcohol no encuentra obstáculos en las capas bacterianas y disuelve o disocia
el precipitado Cristal Violeta-Yodo, el que puede fácilmente escapar al exterior. Las bacterias
Gram negativas al perder el compuesto Cristal Violeta-Yodo, quedan libres, y pueden tomar
el colorante secundario o de contraste (Fucsina o Safranina) y aparecer de color rosado o
rojo. En las Gram positivas, el alcohol atraviesa con dificultad las capas bacterianas debido a
la deshidratación que produce y reduce los poros de la pared.
c. En consecuencia, la disolución del precipitado Cristal Violeta-Yodo se efectúa lentamente, y
el proceso de arrastre tiene lugar aún con mayor lentitud. Por lo tanto, después de transcurrido
el tiempo usual de decoloración, la mayor parte del precipitado Cristal Violeta-Yodo se queda
en las células y estas pueden observarse en el microscopio de color violeta purpúreo.
1.5 Fundamento de la Tinción de Ziehl Neelsen:
Se sabe que el fenol, que forma parte del colorante, es soluble en los lípidos, los cuales son componentes
sobresalientes de las bacterias ácido alcohol - resistentes, como el bacilo de la tuberculosis. También es soluble
en alcohol y agua, más en lípidos y menos en agua. El fenol con la Fucsina forma el compuesto fenol-color (FC).
Al ponerse este compuesto en presencia del citoplasma bacteriano, el fenol se encuentra en un medio donde
su coeficiente de solubilidad es mayor y, por lo tanto, el compuesto fenol-color se fijará fuertemente y coloreará
de rojo la bacteria. Luego se agrega, el decolorante (ácido y alcohol), los que, debido a una permeabilidad de
la membrana citoplasmática, penetran con dificultad y se encuentran con el compuesto fenol-color. El fenol se
halla entonces frente a dos sustancias en las cuales es soluble, pero, como lo es más en lípidos, la mayor parte
del color quedará en el citoplasma y una pequeña cantidad se perderá por solubilización en ácidos y alcohol. Si
se destruye la integridad de la bacteriana por cualquier método, la bacteria pierde su ácido alcohol - resistencia,
pero no su virulencia.
✓ Analiza el fundamento de la tinción de Gram – Ziehl Neelsen, para la solución de problemas en el
campo de trabajo del profesional.
✓ Interpreta los resultados de la coloración de Gram, reconociendo la morfología y características
tintoriales de los diferentes microorganismos.
✓ Reconoce la importancia de la tinción de Gram en la práctica médica diaria.
Lavar con agua a chorro débil.
Bañar la superficie del portaobjetos con alcohol de 95 % o con Alcohol-Acetona por 30 segundos.
Lavar con agua a chorro débil hasta que la decoloración sea total, es decir que no escurra más
alcohol coloreado.
Cubrir la preparación con safranina por 1 minuto.
Lavar con agua a chorro débil.
Dejar secar.
Observar al microscopio con lente de inmersión (100X)
Pasos de la tinción Ziehl Nelssen
Preparar el extendido en un portaobjetos utilizando asa bacteriológica o hisopo.
Dejar secar al aire.
Fijar el extendido pasando 3 o 4 veces por la llama de un mechero de alcohol. El calor del
portaobjetos debe ser soportado por las manos del operador.
Colocar el preparado sobre un soporte de Tinción y cubrir con Fucsina Básica Fenicada.
Calentar por 3 veces hasta la emisión de vapores blancos sin llegar a la ebullición, con un mechero
de alcohol, o con un hisopo de algodón embebido en alcohol, en el lapso de 5 minutos
Escurrir el colorante y lavar con chorro fino de agua.
Cubrir el preparado con Alcohol-ácido al 3 % (decolorante) por 5 minutos o hasta que la preparación
esté completamente decolorada.
Lavar con chorro fino de agua.
Recubrir la lámina con la solución de Azul de Metileno por 1 minutos.
Escurrir el colorante y dejar secar al ambiente
Observar con lente de inmersión.
contraste
Género Morfología Gram habitad
Staphylococcus aureus
Streptococcus
pneumoniae
Neisseria meningitidis
Bacillus cereus
Escherichia coli
Clostridium perfringens
Staphylococus epidermidis
Klebsiella ozaenae
Enterobacter aerogenes
Corynebacterium
diphtheriae
destinados a obtener una parte representativa cualitativamente y cuantitativamente a partir de un todo, en
nuestro caso, el paciente, el medio ambiente.
Recomendaciones generales para la recolección de muestras:
escrito)
antibiótico 48-72 horas antes de la toma de muestra
recipientes estériles
Zonas corporales que normalmente son estériles (sangre, punción de medula ósea, líquido
cefalorraquídeo, liquido sinovial, liquido pleural, liquido peritoneal, tracto respiratorio inferior,
orina recolectada por punción suprapúbica), Zonas corporales que poseen flora normal
comensal (boca, nariz, tracto respiratorio superior, piel, tracto genital, tracto gastrointestinal,
orina recolectada por micción media, sondas o bolsas recolectoras)
✓ Emplea y describe métodos y técnicas para la obtención adecuada de muestras para el diagnóstico
microbiológico.
✓ Conoce los diferentes medios de transporte y técnicas de envío de muestras al laboratorio
microbiológico.
✓ Realiza una solicitud correcta para el examen microbiológico y su relación con el campo de trabajo del
profesional.
EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN
1 Portaobjetos 15 Pzas
2 Mechero de bunsen 4 Pzas
3 Pinzas metálicas punta roma 5 Pzas
4 Varillas de tinción 2 Pzas
Ítem DENOMINACIÓN
1 Frascos para muestras de orina 5 Pzas
2 Bajalenguas 15 Pzas
3 Hisopos de algodón estériles 15 Pzas
4 Guantes 5 Pares
5 Colorantes de Gram 1 kit
Trabajo en grupos 5 estudiantes para la extracción de muestras
El estudiante anotara los posibles errores cometidos en la toma de muestra
1.- Llenar el cuadro que muestra son representativas en las siguientes patologías:
Enfermedad Agente etiológico muestra tratamiento
Meningitis neonatal
tuberculosis
Fiebre tifoidea
Amigdalitis
Micosis sistémicas
Infecciones urinarias
otitis
Gonorrea
Sífilis
Disentería bacilar
Chancroide
Las técnicas inmunológica se utilizan para detectar, identificar y cuantificar antígenos en muestras clínicas, así
como para evaluar la respuesta humoral frente a la infección y los antecedentes de exposición agentes
infecciosos de un individuo. La especificidad de la interacción antígeno- anticuerpo y la sensibilidad de muchas
de las técnicas inmunológicas las convierten en unas poderosas herramientas de laboratorio
Reacción de Precipitación: Se forma un inmunocomplejo que con el tiempo aumenta de tamaño, volviéndose
insoluble en el medio dando lugar a un precipitado. Estas reacciones de precipitación se pueden llevar a cabo
en dos medios:
Medios Líquidos: En donde el anticuerpo se encuentra en solución. Ej: Reacción de VDRL
Medios Gelosados: Aquí el antígeno o anticuerpo está en un soporte (agar-agar, agarosa, poliacrilamida). Ej:
IDRS (inmunodifusión radial simple, que sirve para cuantificar IgM, IgD, IgG, IgA, IgA s
Reacción de Aglutinación: Aquí el antígeno está en forma de partícula. Puede ser:
Aglutinación directa: El antígeno particulado insoluble es aglutinado por el anticuerpo. Ej: Huddleson y Widal
Aglutinación Indirecta: Aquí se emplean transportadores a los que se adhiere en la superficie el antígeno
particulado insoluble. Esos transportadores pueden ser:
Partículas de Látex: como ejemplo encontramos: Reacción de Proteína C reactiva, factor reumatoideo,
Determinación de Grupo sanguíneo y factor, HCG, etc.
Ítem DENOMINACIÓN
1 Jeringas 10 Pzas
2 Lancetas 20 Pzas
3 Guantes 5 Pares
4 Algodón 100 g
5 Reactivo de widal 1 Kit
6 Reactivo de grupo sanguíneo 1 Kit
Dos periodos de 50 minutos
El estudiante elabora un cuadro comparativo de los grupos sanguíneos
ESTERILIZACIÓN : Es un proceso por el que se eliminan todas las formas de vida microbiana (Microorganismos
patógenos y no patógenos), incluso las esporas bacterianas, se logra por medios físicos y químicos (Óxido de
Etileno).
DESINFECCIÓN: Es un proceso por el que se destruyen microorganismos patógenos, pero no siempre todos
los microorganismos y esporas, se logra mediante métodos químicos sobre superficies u objeto inanimados (
mobiliario, equipamiento, instrumental)y métodos quimicos.
ASEPSIA : Significa ausencia o privación de todos los gérmenes patógenos o no.
➢ Controles Físicos: Son los más simples y menos precisos. Ej: Termómetro, Manómetro, Reloj.
➢ Controles Químicos: Son más precisos. Son cintas que cambian de color con la correcta esterilización.
➢ Controles Biológicos: Son los más exactos, pero lleva más tiempo realizarlos. Son bolsas selladas que
contienen microorganismos. Estas bolsas se colocan juntamente con el material a esterilizar, y luego de
finalizado el proceso de esterilización se cultivan.
Los factores que intervienen en la desinfección son:
La Temperatura
El tipo de microorganismo
La concentración del Antiséptico o Desinfectante
La presencia de Materia Orgánica
El Tiempo
El pH
La Naturaleza de la superficie a desinfectar
Lavado Higiénico: Es el que se realiza diariamente de forma casera, disminuye la flora transitoria (flora que se
adquiere por contacto con objetos contaminados). Se realiza con agua y jabón.
Lavado Antiséptico: Elimina la flora transitoria y disminuye la flora residente (flora que habita normalmente en
piel). Se emplea solución jabonosa antiséptica, cepillo y agua. Solo se cepillan las manos.
Lavado Quirúrgico: Elimina la flora transitoria y disminuye la flora residente (flora que habita normalmente en
piel). Se emplea solución jabonosa antiséptica, cepillo y agua. Se cepilla el antebrazo y el codo.
✓ Identifica las características de desinfección, asepsia y antisepsia, que se presentan en el campo
de trabajo del profesional
✓ Realiza asepsia de las manos por medio del lavado y cepillado usando técnicas adecuadas.
✓ Realiza la limpieza y preparación de la piel o lugar en el cual se desea realizar una toma de muestra
bacteriológica o un procedimiento quirúrgico básico, en la solucion de casos clinicos
✓ Identifica las características de esterilización, métodos físicos como calor seco, calor húmedo y su
uso en el campo de trabajo profesional
EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN
1 Autoclave 1 Pzas
2 Mecheros bunsen 4 Pzas
3 Cajas Petri 20 Pzas
4 Pipetas de 10 ml 3 Pzas
5 Tubos de hemolisis 10 Pzas
6 Guantes para caliente 1 Par
Ítem DENOMINACIÓN
Unidad Observaciones
1 Papel madera o sabana 2 pliegues
2 Hilo de caña 2 Metros
3 Alcohol al 70 % 20 Ml
4 Algodón 50 Gramos
5 Fosforo 1 pza