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Comisión n°5- Profesorado en Biología
Trabajo Práctico N° 7: Microscopía 2 - Partes, formación de
imágenes y técnicas histológicas
Introducción Los microscopios modernos incluyen algunas características de los primeros modelos y son un recordatorio de que el trabajo de los pioneros aún vive en los laboratorios del nuevo milenio. Cada uno de ellos tiene sus características propias, formas de uso y cuidados, pero todos ellos al ser instrumentos de gran precisión y complejidad requieren un conocimiento particular y cuidados especiales. La muestra biológica que será observada en los microscopios ópticos compuestos, debe ser procesada de forma tal de mantener las condiciones lo más cercanas posibles a las naturales, y en algunos casos colorearlas para facilitar su observación. Este proceso se denomina técnica histológica, que abarca varios pasos desde que se toma el material hasta que el preparado pueda observarse. Objetivos Conocer las partes, funciones y aplicación del Microscopio Óptico Compuesto. Interprete la formación de imágenes en el microscopio óptico, aplicando la marcha de rayos para el objetivo y ocular. Interpretar las imágenes obtenidas en cada uno de los instrumentos ópticos y las características de los materiales biológicos observados en estos. Conocer y relacionar los pasos que se requieren para lograr un buen preparado histológico Materiales aportados por los alumnos
- Guía de estudios de Microscopía, bibliografía específica. Recomendaciones Está utilizando un instrumento de precisión óptica y su manejo requiere atención y cuidado. Además, los materiales se miden en unidades específicas para este instrumental. Ante cualquier duda consulte con el docente responsable del Trabajo Práctico. No tome decisiones sobre uso de procedimientos que desconoce o no está seguro de realizar. Actividades: A) Microscopio óptico compuesto 1- De acuerdo a la bibliografía sugerida y el siguiente link https://www.youtube.com/watch?v=AC_X87DexiY preste atención a la imagen siguiente y marque las principales partes de un Microscopio óptico Compuesto. Recuerde que hay dos grandes subdivisiones Parte Óptica y Parte Mecánica.
Comisión n°5- Profesorado en Biología 2- Explica en forma sintética las funciones de las siguientes partes de un Microscopio óptico compuesto. Partes de un Microscopio óptico Compuesto Función Condensador Estructura que concentra la luz hacia la muestra Diafragma Se utiliza para ajustar mejor la iluminación Objetivos Ampliación de la imagen de acuerdo a la cantidad de aumento , con la que se quiere observar Oculares Amplia la imagen, del objetivo Sistema de revolver Contiene los sistemas de lentes y objetivos. Platina Es donde se coloca la preparación que se va a observar. Tornillo macrométrico Aproximación del enfoque, permite movimientos grandes Tornillo micrométrico Enfoque correcto, movimientos chicos Brazo o columna Puede girar, sostiene al tubo óptico(extremo superior) y en el inferior lleva varias piezas importantes. Columna o brazo pinza Fuente de luz Anillo micro metrico Anillo macro metrico Lampara Pie Condensador Platina Objetivo Revolver tubo Oculares
Comisión n°5- Profesorado en Biología ¿A qué se llama virus? ¿Y qué características generales tiene el COVID-19? Un virus es un microorganismo compuesto de material genético protegido por un envoltorio proteico, que causa diversas enfermedades introduciéndose como parásito en una célula para reproducirse en ella. Los coronavirus deben su nombre a su estructura, como otros coronavirus, el SARS-CoV- 2 es esférico y tiene proteínas S ( spike ) que le proporcionan un aspecto de corona. Esas proteínas sirven al virus para unirse a las células que trata de infectar, una vez el virus entra en el cuerpo humano por los ojos, la boca o la nariz, busca células con sus puertas de entrada favoritas: unas proteínas llamadas receptores. Si el virus encuentra un receptor compatible, puede invadir y empezar a replicarse. En el caso del SARS-CoV-2, ese receptor se halla en las células pulmonares y en el intestino. Para acceder a la célula el virus se une al receptor, una ve dentro se libera el material genético o ARN, la célula infectada lee el ARN y empieza a fabricar proteínas, que mantienen a raya el sistema inmunitario, conforme progresa la infección, estas nuevas proteínas forman copia del virus, las nuevas copias del virus se juntan y se transportan a los bordes de la célula y a continuación infectan a otras células huésped B) Formación de imágenes: a- Observe los diferentes modelos de lentes en los apuntes proporcionados por la asignatura, realice un esquema de las mismas indicando el nombre que reciben de acuerdo a la forma. b- Teniendo en cuenta las lentes divergentes y convergentes, dibuje en el esquema del punto a como atraviesan los rayos de luz y señale si los mismo convergen o divergen. c- Teniendo en cuenta lo realizado en los puntos anteriores, ¿qué tipo de lente cree usted que tienen los microscopios y por qué? Veamos ahora como se forman las imágenes en los microscopios. Para lo cual vamos a utilizar un esquema de un banco óptico, una fuente de luz, un objeto, una pantalla y dos lentes delgadas. El banco óptico consta de una base de aproximadamente un metro de longitud con una ranura en su parte central, donde se situarán las componentes ópticas sobre jinetillos (ver figura) y una escala milimetrada para medir distancias relativas. Sobre uno de los soportes existe una lámina metálica, en la que se ha practicado una pequeña abertura en forma de flecha, que constituye el objeto real cuando se ilumina desde atrás mediante la fuente de luz. La imagen producida por el sistema óptico se formará sobre una pantalla (sólo en el caso de que se trate de una imagen real). Las lentes se situarán en el banco óptico a través de sus correspondientes jinetillos, y podrán deslizarse para variar la distancia en la que se encuentran entre sí.
Comisión n°5- Profesorado en Biología d- Teniendo en cuenta la guía de estudios, identifique cada componente del banco óptico con su equivalente en el microscopio óptico (luz, muestra, objetivo y ocular). e- ¿Qué sucede con la imagen de la pantalla si modificamos las distancias de las lentes? ¿Cómo lo explicaría si lo relacionamos con el movimiento de la platina? a) Lentes positivas Lentes negativas Lentes Planoconvexa Planocóncava Biconvexa^ Bicóncava Cóncavoconvexa Convexo cóncava
Comisión n°5- Profesorado en Biología Cuestionario: a) Enumera los pasos de la técnica histológica. Completa el siguiente esquema según estos pasos. b) ¿Cuáles son las formas de tomar las muestras? ¿Qué función cumple la fijación en este proceso? Transferir a la cuchilla Extensión de cortes en baño maría Preparación de la muestra para la obtención de cortes histológicos Fijación-deshidratación- inclusión de parafina- formación de bloque de parafina Coloración Montaje muestra Secado térmico de mesa Toma de la muestra Cortar en pedazos
Comisión n°5- Profesorado en Biología Las formas de tomar muestras son las siguientes Biopsia: consiste en tomar un trozo de tejido de un ser vivo. Este procedimiento de uso frecuente en medicina requiere el mismo cuidado de asepsia, antisepsia, etc., que se utiliza en todo acto quirúrgico menor o mayor. Necropsia: es el procedimiento en el cual se extrae material de un cadáver Autopsia: consiste en el estudio analítico y sistemático completo. macroscópico y microscópico de los órganos, aparatos y sistemas de un cadáver. Se realiza para establecer causas de muerte. La fijación evita la destrucción o lisis celular. Es un proceso físico — químico complejo por el cual se mantiene a las estructuras orgánicas en el estado más parecido al que poseían en vida. Los objetos de la fijación son: · Mantener las estructuras en el estado más parecido al que poseían in vivo. Evitar la lisis celular y la proliferación bacteriana Dar cierta solidez o dureza al tejido o material. La fijación detiene los procesos vitales pero en ciertas condiciones mantiene las actividades de algunos componentes moleculares, por ejemplo la actividad de algunas enzimas c) ¿En qué consiste la inclusión de la muestra? ¿Es necesario deshidratar la muestra antes de ser incluida en parafina? ¿Por qué? Inclusión en parafina: la parafina es una mezcla de hidrocarburos saturados que tienen diferentes puntos de fusión. Parafina blanda funde a 44 – 48ºC y la parafina dura a 56 – 58ºC. Se sumerge la muestra, se lleva a estufa unos minutos para que la parafina penetre en los tejidos. Luego se enfría bruscamente colocando el recipiente en hielo. La misma no es posible de ser mezclada con el agua por lo que es fundamental deshidratar la muestra. d) Explica brevemente como se realiza el corte de las muestras y la herramienta que se utiliza para tal fin. El corte de las muestras se realiza mediante el uso del micrótomo. El micrótomo de congelación permite cortar el tejido después de fijarlo por frío, congela con dióxido de carbono y lo endurece para que luego pueda ser cortado. Es un método rápido y por eso se usa para el diagnóstico de biopsias obtenidas en el acto quirúrgico para que el cirujano
Comisión n°5- Profesorado en Biología NO FORMAN SALES SUDAN NEGRO e) En el proceso de tinción de las muestras, ¿qué colorantes se utilizan según las partes de la célula que queremos teñir? Los colorantes que se usan según las partes que queremos teñir, son en primer lugar un colorante básico hematoxilina y un acido eosina f) ¿Se pueden observar muestras sin colorear? ¿Se pueden colorear muestras vivas? Las muestras biológicas pueden ser examinadas en muchos estados. Ya sea viva o muerta, Sin embargo, la mayoría de los organismos, sus órganos y tejidos, e incluso sus células, son demasiado grandes para proporcionar información de alta resolución con los microscopios ópticos convencionales. Por ello no pueden ser observados vivos sino que hay que matarlos y entonces (generalmente) deben ser deshidratados, incluidos, cortados, teñidos y montados antes de su examen al microscopio. 3- Observa la siguiente imagen de un preparado obtenido por la técnica histológica. La flecha indica la estructura coloreada. Completa que colorante actúa en esta coloración (hematoxilina o eosina) según lo analizado en el punto 2. BIBLIOGRAFÍA CELANI, M. S. DE BASSI, FERNANDEZ SURRIBAS y VA LAWSEWITSCH J. 1984. Lecciones de Histología Veterinarias. Microscopia: 1-27. CURTIS, H., N. S. BARNES, A. SCHNEXK, G. FLORES y A. MASSARINI. 2008. Biología. Sétima Edición. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires. DI FIORI, M. 1996. Histología. El Ateneo. Buenos Aires. Link para realizar las actividades https://www.youtube.com/watch?v=AC_X87DexiY https://www.youtube.com/watch?v=Jr7o3n9sHcs INDIFERENTES HEMATOXILINA EOSINA CITOPLASMA NUCLEO
