DRA. LINSAYD VILLARROEL P.
MICROSCOPIA
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MICROSCOPIA- EVOLUCION DE MICROSCOPIOS, Diapositivas de Medicina
SE EXPLICA LA TEORIA DEL MICROSCOPIO DESDE QUE SE ENCONTRO POR PRIMERA VEZ, HASTA EL MAS ACTUAL
Tipo: Diapositivas
2025/2026
1 / 89
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DRA. LINSAYD VILLARROEL P.
MICROSCOPIA
1. Introducción
Diversas técnicas permiten estudiar la
estructura y función celular.
Objetivo: destacar las herramientas
principales para el estudio rutinario de
células.
Enfoque: microscopía y técnicas
relacionadas.
Otras técnicas (biología
molecular/bioquímica) se detallan en
material adicional.
Importancia de la microscopía en
biomedicina.
2. Microscopía óptica convencional
2.2 Partes del microscopio óptico
Sistema mecánico: pie, platina, tubo, columna.
Sistema óptico: objetivo + ocular.
Sistema de iluminación: foco, condensador, diafragma.
Aumentos, poder de resolución y límite de resolución (LR) (^) 3.1 Conceptos clave (^) Aumentar ≠ mejorar nitidez. (^) Poder de resolución: capacidad de distinguir puntos cercanos. (^) Límite de resolución (LR): distancia mínima para ver dos puntos separados. (^) Ojo humano: 0,1 mm. (^) Microscopio óptico: ~0,2 μm. (^) Microscopio electrónico: 10–20 Å.
Aumentos, poder de resolución y límite de resolución (LR) (^) 3.4 Difracción y límites de la luz (^) La difracción impide mejorar el LR más allá de ~0,2 μm. (^) Usar luz UV mejora LR, pero requiere sistemas especiales. (^) En microscopía electrónica se usa un haz de electrones → λ muy pequeña.
4.1 Tipos de contraste
(^) Variación de longitud de onda: tinciones → colores diferentes. (^) Variación de amplitud: cambios en brillo (claroscuro). (^) 4.2 Tinciones (^) Colorantes diferenciales (hematoxilina → núcleo; eosina → citoplasma). (^) Cada colorante bloquea/pasa ciertas λ → permite contraste.
5. Microscopía de fluorescencia
(^) 5.1 Conceptos básicos (^) Sustancias fluorescentes absorben una λ y emiten otra mayor. (^) Solo se visualizan estructuras marcadas con fluorocromos. (^) Fondo oscuro → alto contraste.
5. Microscopía de fluorescencia
(^) 5.2 Fluorocromos (^) Marcaje selectivo: colorantes o anticuerpos conjugados. (^) Ejemplo: fluoresceína (excita 494 nm, emite 521 nm). (^) 5.3 Filtros del microscopio (^) Filtro de excitación: deja pasar solo la λ que activa el fluorocromo. (^) Espejo dicroico: refleja excitación y deja pasar emisión. (^) Filtro de emisión: elimina interferencias lumínicas.
7. Microscopía electrónica
7.1 Principios generales Usa un haz de electrones acelerados. Mucho mayor poder de resolución que el microscopio óptico. Imposibilidad de estudios in vivo (requiere alto vacío).
7. Microscopía electrónica
(^) 7.2 Microscopio Electrónico de Transmisión (MET) (^) Emite electrones desde un cátodo → atraviesan la muestra. (^) Muestra extremadamente fina (10– nm). (^) Contraste: sales de metales pesados (plomo, uranio). (^) Zonas electrodensas: oscuras. (^) Zonas electrolúcidas: claras. (^) Imagen obtenida en pantalla fluorescente.
Procesamiento de muestras para
microscopía óptica y electrónica
(^) 1. Objetivo del procesamiento histológico (^) Preparar una muestra biológica para su visualización microscópica conservando lo más fielmente posible su estructura original. (^) Evitar la degradación post-mortem de los tejidos. (^) Obtener cortes suficientemente delgados para permitir el paso de luz (MO) o electrones (ME). (^) Aumentar el contraste de las estructuras celulares.
Procesamiento de muestras para
microscopía óptica y electrónica
(^) 2. Etapas fundamentales del procesamiento histológico (^) Fijación (^) Inclusión (^) Microtomía (corte) (^) Tinción (^) Cada etapa presenta diferencias según el tipo de microscopio (óptico vs electrónico).
A.2. Métodos de fijación
(^) 1. Métodos físicos (^) • Criofijación (congelación rápida) (^) Temperaturas < −70 °C. (^) Inmoviliza estructuras y detiene enzimas. (^) Ventajas: rápido, útil para diagnósticos urgentes (biopsias intraoperatorias). (^) Desventajas: (^) Reversible; la degradación continúa al subir la temperatura. (^) Formación de cristales de hielo → daño estructural. (^) Uso de crioprotectores: sacarosa, glicerol.
2. Métodos químicos
(^) a) Agentes entrecruzantes (^) Producen enlaces entre proteínas → estabilización estructural. (^) Formaldehído → elección para microscopía óptica. (^) Glutaraldehído → elección para microscopía electrónica. (^) b) Agentes oxidantes (^) Tetróxido de osmio (OsO₄) (^) Fija lípidos y aumenta contraste. (^) Fundamental en microscopía electrónica para visualizar membranas. (^) c) Agentes precipitantes (^) Alteran la solubilidad de proteínas generando precipitados estabilizados.