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Descripción de sus partes, tipos y usos.
Tipo: Apuntes
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Microscopia óptica
Microscopio
Es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser observados a simple vista. Permite la evaluación de cortes histológicos.
Historia de los microscopios
El primer microscopio compuesto fue inventado por Hans y Zacharias Janssen 1590, consistía en un tubo que utilizaba dos lentes, uno en cada extremo, pero aun así no tenía gran poder de resolución ya que para este entonces no se conocía muchas de las leyes de la física. Posteriormente Anton van Leeuwenhoek diseño un microscopio simple que podía magnificar aproximadamente X300 veces un espécimen describiendo por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glóbulos rojos. Gracias al uso del microscopio Marcelo Malpighi pudo detallar perfectamente los vasos capilares en alas de murciélago. En 1665 Robert Hooke hizo observaciones de cortes de corcho (tejido vegetal) en microscopios y pudo observar especies de espacios vacios (celdas) a los cuales llamo células. En el siglo XIX Van Deijil, Lister y Ross diseñan los primeros objetivos apocromáticos, capaces de corregir las aberraciones de la luz de la tal manera que podían producir imágenes bastante detalladas de los especímenes que se observaban.
Tipos de iluminación
Principios básicos del microscopio
▲ Poder de la resolución: es la capacidad del microscopio para generar imágenes distintas de dos puntos situados muy cerca el uno del otro.
▲ Limite de resolución: distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que el microscopio pueda diferéncialo como dos puntos diferentes entre si.
Microscopio óptico = 0,2 μm
Tipos de microscopio
Microscopio simple: es un microscopio que utiliza una sola lente para aumentar la imagen.
Microscopio de campo claro o compuesto: Es el primero y es el más usado, es un microscopio que utiliza más de una lente para aumentar la imagen. Sus atributos son: resolución, formación de contraste y fuente de iluminación
Microscopio estereoscópico (lupa): Este tipo de microscopio proporciona una imagen estereoscópica, en tres dimensiones (3D) del espécimen. Consiste
básicamente en unos binoculares que miran directamente a la muestra y un par de objetivos de baja potencia colocados a los lados para que converjan sobre el espécimen y así obtener una imagen tridimensional. El tipo de iluminación utilizado por este microscopio es la episcopica. su amplificación es baja pero permite el trabajo con material para diseccion y con material in vivo en trozos o incluso animales enteros.
Microscopio invertido: El microscopio invertido es un microscopio cuya estructura está invertida en comparación al microscopio convencional. La fuente de luz está ubicada por encima de la platina y los objetivos por debajo de esta. Es utilizado principalmente en cultivos celulares (células vivas) sin una preparación previa, monitorear actividades (crecimiento, comportamiento) y mediciones intracelulares.
Microscopio de contraste de fase: en el microscopio hay un dispositivo en forma de anillo en los oculares que transforma las diferencias de fase, no visibles, en diferencias de amplitud, es decir diferencias de intensidad que pueden ser captadas por el ojo humano (el microscopio agrega el contraste necesario para observar las estructuras). Este tipo de microscopio es muy útil a la hora de examinar tejidos vivos (cultivos de celulas), en los cuales no se utiliza ningún tipo de coloración por la existencia de células vivas, por lo que se utiliza con frecuencia en estudios biomédicos.
Microscopio de campo oscuro: el microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco que va a iluminar la muestra de forma indirecta, la luz reflejada indirectamente es la que va a pasar a través de los objetivos y es la que va a formar la imagen, a este microscopio podemos añadirle contraste utilizando diferentes filtros de colores. Es útil para observar muestras que está al límite de resolución (estructuras muy pequeñas).
Microscopio de fluorescencia : Se basa en la capacidad que tienen algunas sustancias de emitir luz cuando son excitadas por otra fuente de luz a una diferente longitud de onda. Hay sustancias fluorescentes naturales (auto fluorescentes) como la vitamina A y algunos neurotransmisores que cuando reciben un fuente de luz a una longitud de onda apropiada son capaces de emitir luz (brillar). También detecta fluorescencia agregada (la sustancia fluorescente se adhiere a los anticuerpos los cuales se dirigen a la estructura de la célula para la cual fueron creado). La imagen se imprime en una placa fotográfica. La eosina tiene ciertas propiedades de fluorescencia
Microscopio de barrido confocal : Es un sistema de microscopía que emplea un sistema de rayos láser muy convergente, de tal manera que evita las distorsiones. Permite crear imágenes múltiples a diferentes profundidades (planos) dentro del espécimen que luego van dirigidas a un programa de computadora en donde se ensamblan y crean una imagen tridimensional creado por diferentes planos (semejante a un tomógrafo de barrido).
Microscopio de interferencia: Principios similares al microscopio de fase, pero tienen la ventaja de dar resultados cuantitativos. Con este instrumento es posible determinar las diferencias ópticas de fase para las diversas estructuras celulares y en consecuencia medir su peso seco.
Microscopio de luz ultravioleta: trabaja con luz ultravioleta y se utiliza para detectar ciertos compuestos como por ejemplo: ácidos nucleicos, bases purínicas y pirimídicas y proteínas con ciertos aminoácidos.