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El microscopio de fluorescencia es un equipo óptico convencional que se equipa con un accesorio de iluminación llamado 'fluorescencia'. En este documento, aprenderemos sobre este accesorio, su adaptación al microscopio y las consideraciones importantes. Además, abordaremos la introducción a la fluorescencia, su proceso y su importancia en campos como la genética y la biología celular.
Tipo: Monografías, Ensayos
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Un microscopio de fluorescencia es un microscopio óptico convencional al que se le adapta un accesorio complementario de iluminación, denominado “fluorescencia”. En Bioindicación te hablaremos de este accesorio que utiliza los mismos objetivos de aumento para formar la imagen. Al incorporarlo podremos realizar una observación óptica convencional y además una observación de contraste con fluorescencia. C onsideraciones para la adaptación de la fluorescencia El accesorio de fluorescencia se puede incorporar en el momento de adquirir el equipo o con posterioridad. Este es un aspecto importante a considerar al comprar un microscopio. Porque el fabricante puede cambiar con más o menos asiduidad el catálogo de modelos. Entonces, puede que cuando queramos adaptar en el futuro el sistema de fluorescencia no sea posible. Por ser un equipo obsoleto, o bien porque el modelo adquirido no disponga de la posibilidad de adaptación. Deberá tener en cuenta otras consideraciones necesarias a la hora de adaptar un sistema de fluorescencia a su microscopio. Tales como el tipo de óptica (objetivos previstos), tipo de diseño óptico (corrección a infinito, longitud finita, etc.). Introducción a la fluorescencia: La fluorescencia es un miembro de la gran familia de procesos de luminiscencia. En el que las moléculas susceptibles emiten luz a partir de estados excitados. Que son creados electrónicamente por un mecanismo físico (por ejemplo, absorción de luz), mecánico (fricción) o químico. La generación de luminiscencia a través de la excitación de una molécula por fotones de luz ultravioleta o visible es un fenómeno denominado fotoluminiscencia. Este se divide formalmente en dos categorías, fluorescencia y fosforescencia. Dependiendo de la configuración electrónica del estado excitado y la vía de emisión. La fluorescencia es la propiedad de algunos átomos y moléculas para absorber la luz a una longitud de onda particular. Y, posteriormente, emitir luz de onda más larga después de un breve intervalo, denominada vida útil de fluorescencia.
El proceso de fosforescencia se produce de manera similar a la fluorescencia, pero con un tiempo de vida excitado mucho más prolongado. Proceso de fluorescencia El proceso de fluorescencia se rige por tres eventos importantes. Todos ocurren en escalas de tiempo que están separadas por varios órdenes de magnitud.La excitación de una molécula susceptible por un fotón entrante ocurre en femtosegundos (1015 seg). Mientras que la relajación vibratoria de los electrones en estado excitado al nivel de energía más bajo es mucho más lenta; y se puede medir en picosegundos (1012 seg). El proceso final es la emisión de un fotón de longitud de onda más larga y el retorno de la molécula al estado fundamental. Este ocurre en el período de tiempo relativamente largo de nanosegundos (109 seg). Toda la vida útil de la fluorescencia molecular, desde la excitación hasta la emisión, se mide en solo mil millonésimas de segundo. El fenómeno es una manifestación sorprendente de la interacción entre la luz y la materia. Esta interacción conforma la base de los campos expansivos del estado estacionario y de la espectroscopía y microscopía de fluorescencia de resolución temporal. Debido a los perfiles de emisión tan sensibles, la resolución espacial y la alta especificidad de las investigaciones de fluorescencia, la técnica se ha convertido en una herramienta importante (Figura 1-b) en genética y biología celular.