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UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA
CARRERA DE MEDICINA
AYUDANTÍA DE CÁTEDRA
Asignatura MORFOFUNCIONAL 1. HISTOLOGÍA Docente Dr. Xavier Astudillo Ayudante de cátedra Granda Rivera Eduardo Fabricio Ciclo Primero Paralelo AB Bimestre Primero Periodo académico Octubre 2025 – Febrero 2026 Semana y Fecha S1 29/09/ Contenidos Generalidades, microscopía, técnicas histológicas. Procesamiento histológico de las muestras biológicas, y tinciones. Uso del microscopio óptico. Semana 1 – Histología General y Técnicas Básicas RESUMEN TEÓRICO HISTOLÓGICO ¿Qué es la Histología? La Histología es la ciencia que estudia los tejidos del cuerpo y cómo sus células se organizan para formar órganos. Es el puente entre la anatomía macroscópica y la fisiología, permitiendo comprender cómo la estructura microscópica determina la función. “La función depende de la forma, y la forma depende de la estructura celular.” Organización biológica
- Célula → Tejido → Órgano → Sistema → Organismo.
- Cuatro tejidos básicos: epitelial, conectivo, muscular y nervioso. Técnicas histológicas: del tejido al portaobjetos El objetivo del procesamiento histológico es preservar y preparar los tejidos para su observación al microscopio. Etapas:
- Fijación: o Detiene procesos biológicos, evita autólisis y putrefacción. o Fijador más común: formol al 10% (formalina neutra). o Alternativos: Bouin, glutaraldehído (microscopía electrónica).
- Deshidratación: o Sustitución del agua del tejido por alcoholes (graduados de 70% a 100%).
- Aclaramiento (diáfano): o Sustitución del alcohol por un solvente miscible con parafina (ej. xileno).
- Inclusión:
o El tejido se infiltra con parafina fundida (60°C), que solidifica y permite el corte.
- Corte: o Se usa un micrótomo, obteniendo cortes de 3–7 μm de espesor.
- Montaje: o Los cortes se colocan en portaobjetos de vidrio.
- Tinción: o Para contrastar estructuras celulares y tisulares. Principales tinciones histológicas Tinción Tipo Colorea Usos principales Hematoxilina– Eosina (H–E) General Núcleo (azul/violeta), citoplasma (rosado) Tinción estándar PAS (Ácido Periódico–Schiff) Especial Glucógeno, mucinas, membranas basales (magenta) Hígado, riñón, mucosas Tricrómico de Masson Especial Colágeno (azul o verde), músculo (rojo) Tejido conjuntivo Orceína o Verhoeff Especial Fibras elásticas Arterias Sudán / Oil Red O Lipídica Grasa (rojo-anaranjado) Tejidos congelados Nissl / Cresil violeta Neurológica Sustancia de Nissl Neuronas Tipos de microscopía Tipo Principio Aplicación Óptico de luz Luz visible, lentes de vidrio Uso académico; resolución 0.2 μm De fluorescencia Luz UV; fluorocromos Detección de proteínas, ADN, anticuerpos Electrónico de transmisión (MET) Electrones, secciones ultrafinas Estructuras intracelulares Electrónico de barrido (MEB) Superficie 3D con electrones Morfología superficial RESUMEN PRÁCTICO – RECONOCIMIENTO MICROSCÓPICO
o Ejemplo: la identificación del virus SARS-CoV-2 se hizo por microscopía electrónica de transmisión (MET). PUNTOS TEÓRICOS FRECUENTES EN EXÁMENES
- Fijador más usado: formol o formaldehído.
- Corte histológico estándar: 3 – 7 μm.
- La hematoxilina tiñe estructuras basófilas (ácidos nucleicos) ; la eosina, estructuras acidófilas (proteínas citoplasmáticas).
- Aumento total del microscopio = ocular × objetivo.
- Diferencia entre deshidratación y aclaramiento.
- Función de la tinción PAS.
- Diferencias entre MET y MEB.
- Elementos ópticos que determinan la resolución de una imagen.
- Procedimiento de montaje de la muestra en portaobjetos.
- Precauciones de manejo del microscopio y su limpieza. BANCO DE PREGUNTAS S I. PREGUNTAS TEÓRICAS 1. ¿Cuál es el objetivo principal de la fijación en el procesamiento histológico? a) Hidratar el tejido para evitar su contracción b) Eliminar las proteínas intracelulares c) Detener los procesos enzimáticos y conservar la morfología celular d) Aclarar el tejido para permitir la tinción 2. El fijador más empleado en histología general es: a) Bouin b) Formalina neutra al 10% c) Glutaraldehído d) Alcohol etílico al 70% 3. ¿Cuál es el orden correcto de las etapas del procesamiento histológico? a) Inclusión → Deshidratación → Corte → Fijación → Tinción b) Fijación → Deshidratación → Aclaramiento → Inclusión → Corte → Tinción c) Aclaramiento → Fijación → Deshidratación → Corte → Inclusión d) Deshidratación → Inclusión → Corte → Fijación 4. En la tinción de Hematoxilina-Eosina, las estructuras basófilas como el núcleo se tiñen: a) Rosadas b) Violetas o azuladas c) Amarillas d) Verdes 5. La tinción PAS es especialmente útil para evidenciar: a) Mitocondrias
b) Fibras elásticas c) Glucógeno y mucopolisacáridos d) Fibras colágenas
6. ¿Qué tipo de microscopio permite observar estructuras internas de la célula con una resolución de 0.2 nm? a) Óptico de luz b) Electrónico de transmisión (MET) c) Electrónico de barrido (MEB) d) De fluorescencia 7. El espesor promedio de un corte histológico para observación con microscopio óptico es: a) 1–2 μm b) 3–7 μm c) 10–15 μm d) 20–25 μm 8. En el microscopio óptico, el aumento total se calcula multiplicando: a) El aumento del objetivo por el número del condensador b) El aumento del ocular por el aumento del objetivo c) El número del diafragma por la longitud focal d) El aumento del ocular por la distancia de trabajo 9. El término "acidofilia" se refiere a estructuras que: a) Reaccionan con colorantes básicos b) Son ricas en ácidos nucleicos c) Reaccionan con colorantes ácidos d) Son invisibles con H–E 10. ¿Qué estructura se observa mejor con la tinción de Orceína? a) Fibras elásticas b) Fibras colágenas c) Glucógeno d) Membrana basal II. PREGUNTAS DE LA PARTE PRÁCTICA 11. Al observar una muestra con H–E, el núcleo de las células se ve: a) Rojo intenso b) Azul o violeta c) Verde oliva d) Incoloro 12. Durante el uso del microscopio óptico, el ajuste del tornillo micrométrico sirve para: a) Mover la platina verticalmente en grandes intervalos b) Ajustar el enfoque fino c) Cambiar el objetivo d) Regular la cantidad de luz 13. En el uso correcto del microscopio, antes de cambiar a un aumento mayor se debe: a) Cerrar completamente el diafragma
al microscopio? a) Buena preservación celular b) Artefactos de autólisis y distorsión nuclear c) Contraste nuclear acentuado d) Ninguna alteración si se tiñe con H–E Caso 2. En una biopsia intestinal se observa acumulación de material magenta con la tinción PAS en las células epiteliales. Diagnóstico más probable: a) Presencia de glucógeno o mucinas b) Necrosis fibrinoide c) Depósito de hierro d) Lesión de fibras elásticas Caso 3. Durante una práctica, un estudiante usa el objetivo 40x con el tornillo macrométrico, provocando que el objetivo toque el portaobjetos. Esto puede causar: a) Daño del objetivo o rotura del porta b) Aumento de contraste c) Mejora de la resolución d) Limpieza automática de la lente Caso 4. Una paciente presenta síntomas neuromusculares. La biopsia muscular se somete a microscopía electrónica , donde se evidencian alteraciones mitocondriales. ¿Qué tipo de microscopio se utilizó y qué se analizó? a) MEB – superficie muscular b) MET – estructura intracelular c) Fluorescencia – proteínas contráctiles d) Óptico – sarcómeras Caso 5. En el estudio de un tumor gástrico, se realiza tinción con tricrómico de Masson. ¿Qué hallazgo puede esperarse si existe abundante colágeno fibroso alrededor del tumor? a) Áreas azuladas indicando fibrosis peritumoral b) Áreas rojizas indicando necrosis c) Núcleos violetas indicando proliferación d) Mucinas magentas indicando secreción SOLUCIONARIO COMENTADO Nº Respuesta Comentario 1 c La fijación preserva la arquitectura y detiene la autólisis. 2 b El fijador universal más usado es la formalina neutra al 10%. 3 b Es el orden correcto de procesamiento histológico. 4 b La hematoxilina tiñe basófilos (núcleo) de azul o violeta.
5 c El PAS detecta glucógeno y mucinas neutras. 6 b El MET tiene la mayor resolución (0.2 nm). 7 b Cortes de 3–7 μm son estándar para microscopía óptica. 8 b Aumento total = ocular × objetivo. 9 c Las estructuras acidófilas reaccionan con colorantes ácidos. 10 a La orceína tiñe fibras elásticas. 11 b Núcleo = violeta/azul (hematoxilina). 12 b Tornillo micrométrico → enfoque fino. 13 c Siempre enfocar y centrar con 10x antes de aumentar. 14 c Un tejido mal fijado sufre autólisis y distorsión. 15 a Colágeno = azul/verde con tricrómico de Masson. 16 b El PAS muestra glucógeno intracelular. 17 b MET analiza alteraciones subcelulares. 18 b Biopsia por congelación = diagnóstico rápido intraoperatorio. 19 a Artefactos pueden simular patologías graves. 20 b El glomérulo requiere PAS y MET para diagnóstico preciso. Caso 1 b La autólisis por mala fijación causa distorsión morfológica. Caso 2 a PAS magenta = mucinas o glucógeno. Caso 3 a Puede romperse el porta o dañar el objetivo. Caso 4 b MET permite ver mitocondrias en detalle. Caso 5 a Azul o verde = colágeno fibroso (fibrosis). REFERENCIAS Christensen, E., Tranum-Jensen, J., Qvortrup, K., &. Geneser, F., (2014). Geneser Histología (4ta ed) https://visorweb.utpl.edu.ec/library/publication/geneser histologia Paulsen, F., Waschke, J., & Sobotta, J. (2019). Sobotta: Atlas de histología humana: estructura, función y correlaciones clínicas (2.ª ed.). Elsevier España.
